高效液相色譜法測定復方珍珠口瘡顆粒中蒼術素含量

張立新，李 娟，周曉英

（四川省成都市食品藥品檢驗研究院，四川 成都 610045）

高效液相色譜法測定復方珍珠口瘡顆粒中蒼術素含量

張立新，李 娟，周曉英

（四川省成都市食品藥品檢驗研究院，四川 成都 610045）

目的建立測定復方珍珠口瘡顆粒中蒼術素含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法色譜柱為Diamonsil C18柱（200 mm×4.6 mm，5 m），流動相為甲醇－水（79∶21），流速為1.0 mL／min，檢測波長為340 nm。結果蒼術素進樣量在18.4～277.2 g范圍內與峰面積線性關系良好，回歸方程為 Y＝7 897.2 X－31 006（r＝0.999 7），平均回收率為97.97%，RSD＝1.60%(n＝6)。結論該方法準確，簡便，重復性好，可用于復方珍珠口瘡顆粒的質量控制。

高效液相色譜法；復方珍珠口瘡顆粒；蒼術素；含量測定

復方珍珠口瘡顆粒是由珍珠、蒼術、五倍子、甘草4味中藥材經粉碎提取等工藝加工制成的中藥顆粒，具有燥濕、生津、止痛的功效，常用于心脾燥熱所致口瘡，癥見口瘡周圍紅腫、中間凹陷、表面黃白，灼熱疼痛，口干口臭，舌紅等。原質量標準為國家藥品監督管理局標準（試行）[1]，現收載于2015年版《中國藥典（一部）》[2]。蒼術素為蒼術的有效成分和特有成分[3]，具有抗菌、抗炎、抗病毒等多種功效[4－5]，原標準及現行標準均未對蒼術素含量進行測定。為更好地控制產品質量，本研究中采用高效液相色譜（HPLC）法測定其中蒼術素的含量，現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1200 series液相色譜儀，Agilent 1200 series DAD檢測器(美國安捷倫科技公司)；Waters 2695－2487型高效液相色譜儀(Waters公司)；AE240型電子天平。

1.2 試藥

蒼術素對照品（成都曼思特生物科技有限公司，批號為MUST－10090807，含量＜98%）；復方珍珠口瘡顆粒（德陽華康藥業有限責任公司）；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：Diamonsil C18柱（200 mm×4.6 mm， 5 μm）；流動相：甲醇－水（79∶21）；檢測波長：340 nm；流速：1.0 mL／min；柱溫：30℃。在該色譜條件下，蒼術素與雜質峰分離效果良好，通過二級管陣列檢測器對峰純度進行檢測，峰純度因子在計算出的閾值限值內，蒼術素為符合要求的純峰，保留時間適中。色譜圖見圖1。

2.2 溶液制備

取蒼術素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成質量濃度為80 μg／mL的溶液，作為對照品溶液。取本品適量，研細，取約1.0 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定質量，超聲處理30 min，放冷，再稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續濾液，即得供試品溶液。按處方制成不含蒼術藥材的樣品，并按供試品溶液的制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

陰性干擾試驗：取對照品溶液、陰性對照品溶液、供試品溶液各10 μL，按擬訂色譜條件進樣測定。結果陰性對照品溶液對蒼術素的含量測定無干擾，見圖1。

線性關系考察：精密吸取不同體積的蒼術素對照品溶液（0.009 24 mg／mL），注入液相色譜儀，按擬訂色譜條件測定峰面積，以對照品進樣量（X，μg）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程Y＝7 897.2 X－31 006（r＝0.999 7）。結果表明，蒼術素進樣量在18.4～277.2 μg范圍內與峰面積線性關系良好。結果詳見表1。

圖1 高效液相色譜圖

穩定性試驗：取同一對照品溶液和同一供試品溶液，置陰暗處保存，分別于1，2，4，6，8，16 h時進樣測定峰面積。結果的 RSD為1.5%和1.7%(n＝6)，表明對照品溶液和供試品溶液置暗處保存，在12 h內基本穩定。結果詳見表2。取同一對照品溶液，置日光下放置1 h后測定，分解為2個峰；放置20 h后測定，分解為6個峰。結果表明，蒼術素在光照下容易分解。

重復性試驗：取同一批樣品6份，依法制備供試品溶液。按擬訂色譜條件進樣測定。結果表明，方法重復性良好，詳見表3。

加樣回收試驗：精密吸取已知含量的樣品（批號為100715，蒼術素含量為0.196 mg／g）6份，精密加入對照品溶液（0.008 36 g／L）1＃、2＃30 mL，3＃、4＃20 mL，5＃、6＃15 mL，再精密加入甲醇至50 mL，依法制備供試品溶液。按擬訂色譜條件進樣測定，計算回收率。結果見表4。

2.4 樣品含量測定

取本品3批樣品，依法制備供試品溶液，按擬訂方法進樣測定。結果見表5。

3 討論

表1 蒼術素線性關系考察結果

表2 蒼術素穩定性試驗結果

表3 蒼術素重復性試驗結果（n＝6）

表4 蒼術素加樣回收試驗結果（n＝6）

蒼術為復方珍珠口瘡顆粒制劑中的重要成分，蒼術中所含蒼術素為揮發性成分，主要存在于揮發油中，光照下較易分解，但在避光條件下較穩定。參照文獻[6－9]，對供試品溶液的制備方法和高效液相色譜條件進行了比較研究。

表5 3批樣品含量測定結果（mg／g，n＝2）

樣品提取時間：比較了不同超聲處理時間（20，30，60 min）的影響，結果含量分別為0.193，0.198，0.197mg／g，說明3個提取時間測定結果無明顯差異，故選擇了提取率最高的超聲處理30 min。

提取溶劑選擇：比較了乙醇和甲醇2種溶劑的影響，甲醇提取測定結果高于乙醇提取（提取結果甲醇為0.198 mg／g，80%乙醇為0.135 mg／g）。

流動相選擇：比較了流動相組成比例和pH變化的影響，以甲醇－水（79∶21）、甲醇－水（84∶21）、甲醇－水（72∶28）、甲醇－0.3%磷酸（79∶21）為流動相，均能達到理想的分離效果，故選擇甲醇－水（79∶21）。

儀器選擇：比較了不同儀器的測定結果，采用Agilent 1200 series高效液相色譜儀與 Waters 2695－2487高效液相色譜儀，蒼術素峰形均良好，測定結果無明顯差異。

色譜柱選擇：比較了不同品牌和不同長度的C18柱，采用了3根色譜柱進行比較[Diamonsil C18柱（200 mm× 4.6 mm，5 μm），Ultimate PAH柱（250 mm×4.6 mm， 5 μm），Akasil柱（200 mm×4.6 mm，5 μm），結果均能達到較好的分離效果。

綜上所述，該提取方法簡便，提取完全，色譜條件適應性強，方法重復性好，可作為復方珍珠口瘡顆粒質量標準的含量測定方法。

[1]WS－091（Z－015）－2011－2011Z，國家藥品監督管理局標準（試行）[S].

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫藥科技出版社，2015：1 235－1 236.

[3]黃瑞平，孫敏寧，潘紅玲.茅蒼術與北蒼術中蒼術素含量的比較[J].中國中醫藥科技，2015，22（4）：398－399.

[4]殷俊方，黃寶康，吳錦忠.蒼術屬藥用植物的藥理作用研究進展[J].藥學實踐雜志，2008，26（4）：252－254.

[5]趙子劍，肖勝男，趙永新，等.蒼術藥理作用的文獻再評價[J].中國醫院藥學雜志，2011，31（7）：607－609.

[6]周 軍，趙 晨，王 杰.藿香正氣不同制劑中蒼術素的含量測定[J].藥物分析雜志，2012，32（8）：1 476－1 478.

[7]翟衛峰，尉小慧，張淑霞，等.HPLC法同時測定越鞠丸提取物YJ－XCC1Z3中藁本內酯、 －香附酮、蒼術素的含量[J].藥物分析雜志，2009，29（5）：693－695.

[8]張 磊，歐陽臻，趙 明，等.茅蒼術中蒼術酮、茅術醇、 －桉葉醇和蒼術素的同時含量測定及其聚類分析[J].中國中藥雜志，2010，35（6）：725－727.

[9]閔春艷，游本剛.香附、蒼術揮發油中 －香附酮和蒼術含量的同時測定[J].中國藥業，2013，22（12）：89－91.

Content Determination of Atractylodin in Fufang Zhenzhu Kouchuang Granules

Zhang Lixin，Li Juan，Zhou Xiaoying
(Chengdu Institute for Food＆ Drug Control，Chengdu，Sichuan，China 610045）

Objective To establish a method to determine the contentsofatractylodin in Fufang Zhenzhu Kouchuang Granules.Methods An HPLC method was adopted.Diamonsil C18column（200 mm×4.6 mm，5 μm）was used.The mobile phase consisted of mthanol－water（79∶21）；the flow rate was 1.0 mL／min；the wavelength of detector was 340 nm.Results The calibration curves of atractylodin showed good linearity in the range of 18.4－277.2 g.The Regression Equation was Y＝7 897.2 X－31 006（r＝0.999 7）.The average recoveries was 97.97%，RSD＝1.60%（n＝6）.Conclusion This method is accurate，simply and reproducible，and is suitable for the determination of atractylodin content in Fufang Zhenzhu Kouchuang Granules.

HPLC；Fufang Zhenzhu Kouchuang Granules；atractylodin；content determination

R284.1；R286.0

A

1006－4931(2016)24－0070－03

2016－08－11)