接觸性生物物證法醫DNA檢驗的影響因素分析

張麗萍 段晉琦 龔疏影

（臨汾市公安局刑事技術處，山西 臨汾 041000）

接觸性生物物證法醫DNA檢驗的影響因素分析

張麗萍 段晉琦 龔疏影

（臨汾市公安局刑事技術處，山西 臨汾 041000）

本文首先對法醫DNA檢驗現狀進行詳細分析，其次闡述接觸性生物物證DNA檢驗常見方法，最后通過對接觸性生物物證法醫DNA檢驗影響因素的探討，意在表述接觸性DNA檢驗的價值。

接觸性生物；物證；法醫DNA檢驗；影響因素

犯罪行為的出現，其現場物證具有微量化和多樣化的特點，而接觸性物證比例越大，方可有效提升法醫接觸性DNA檢驗準確率，從而為公安部調查工作的開展奠定有利基礎。雖然接觸性生物物證DNA模板量相對較低，加之檢驗分型穩定性缺失的問題，促使法醫接觸性DNA檢驗工作面臨嚴峻阻礙，但基于DNA檢驗水平提升、試劑盒與檢驗設備的研發，推進接觸性DNA檢出率得以快速提高。

1 法醫DNA檢驗現狀

1.1 DNA：脫氧核糖核酸（Deoxyribonucleic acid，DNA）屬于遺傳指令、生物發育、功能運作的組成引導分子，具有信息長期儲存的優勢。DNA通過核苷酸組成長鏈聚合物，而其內部堿基以DNA長鏈為基準呈現序列排布，利用遺傳密碼判斷蛋白質氨基酸是否合成。依據DNA結構類別的差異，將其分為單鏈DNA（single-stranded DNA）、閉環DNA（closed circular DNA）、連接DNA（Linker DNA）、模板DNA（Template DNA）、互補DNA（cDNA，complementary DNA）。

1.2 法醫DNA檢驗現狀：1985年，我國首次開展關于DNA指紋技術在法醫鑒定中應用的研究工作，促使國內DNA檢驗技術逐漸走向國際化、成熟化；“七五”時期，辦案審計中對DNA檢驗技術予以全面利用，推進國內法醫DNA檢測領域的新紀元；“八五”階段，我國緊跟國外研究腳步，利用DNA片段多態性、線粒體序列性原則，促使關于DNA檢驗技術的研究工作得以深化；“九五”時期，商品化試劑盒、自動檢驗儀的衍生，促使16個位點DNA多態性檢驗工作即可同步完成，從而提升DNA檢驗識別率；“十五”階段，公安部物證鑒定中心，首次完成自主DNA熒光劑試劑盒研制工作，使之在國內公安DNA鑒定領域得以全面普及；“十一五”期間，更是通過疑難檢驗、技術與試劑提取研究工作的開展，保證法醫DNA檢測技術的合理應用。

2 接觸性生物物證DNA檢驗常見方法

2.1 磁珠純化法：磁珠純化法具體檢驗流程為：通過細胞裂解液的使用，對細胞實施裂解，使其內部DNA得以釋放，再添加適量磁性顆粒，將細胞內游離態DNA分子予以吸附，而細胞內蛋白質、血紅蛋白等雜質無法被磁性顆粒所吸附，從而余留于細胞裂解液內。隨后，磁場條件下，可實現液體、磁性顆粒間有效分離，通過對磁性顆粒的回收，加之純水、TE液的作用完成DNA洗脫和收集工作。從整體上來看，利用磁珠純化法對DNA實施檢驗，具有操作簡易、回收率高、模板純凈、自動化收集的優勢，當前行業領域已存在商品化磁珠DNA試劑提取盒，但因耗時長和成本高、耗材貴以及手工操作繁瑣等缺陷，使之磁珠純化法應用范圍受到局限。

2.2 過濾柱法：過濾柱DNA提取原理和磁珠純化法等同，僅利用硅膠旋轉柱對磁性顆粒實施替換，即選擇超濾膜對其DNA分子予以截取，對其他雜質實施過濾。目前市場也存在該類型商品化試劑提取盒，其不僅具有操作簡便、回收率高的優勢，又涉及大分子污染物殘留、DNA檢出率低、過濾柱成本高的缺陷，促使法醫在針對接觸性生物物證DNA檢驗中，應充分結合當前環境與檢驗中心資金成本，對DNA檢測法進行合理選擇。

3 接觸性生物物證法醫DNA檢驗影響因素分析

通過對接觸性生物物證法醫DNA檢驗結果的分析，可知其主要為提取時間、提取環境兩項影響因素，使之DNA檢驗結果出現偏差，影響法醫正確判斷，延誤公安部最佳辦案時機[1]。

3.1 提取時間：因表皮細胞立體后其機體功能、溶酶體均會受到較大影響，如機體功能活性降低、溶酶體大量釋出，其中溶酶體分為蛋白酶、水解酶，通過對高分子物質（核酸、蛋白）、復合物（核蛋白、糖脂）實施逐層降解，該過程屬于表皮細胞自溶現象。而在表皮細胞出現自溶后，核染色體作為DNA載體呈現固縮或碎裂，使之DNA得以溶解。在此環節，DNA自溶、降解具有相應的規律，一般在72 h內自溶和降解速率影響因素較小，而超過該期限則會加快溶解速率。

3.2 提取環境：首先，外界環境。接觸性生物DNA檢驗需在無菌環境下進行，若選擇自然環境作為DNA提取空間，則會受到光源和潮濕、高溫與灰塵、昆蟲以及細菌等因素的影響，促使DNA提取階段面臨以下問題[2]：DNA提取率過低，無法完成其分析工作；對溶液內抑制劑予以并存提取，從而抑制DNA酶反應；對DNA活性產生損壞，使之降解速率得以全面提升，對DNA提取與分析質量產生威脅。

其次，載體環境。筆者以多年DNA檢驗經驗為參照，表面粗糙、密度低載體空間，如石塊和木塊、針織品等載體，其表皮細胞脫落DNA檢出率較高；而表層光滑、密度高載體空間，如橡膠或金屬等，DNA檢出率明顯有所降低，其原因在于：載體細胞易于從載體表層脫落，從而降低DNA提取模量[3]。此外，載體污染程度也是影響DNA降解速率的主要因素，例如：地毯或織物表層存在食物殘渣，但因其具有較強的吸濕性，可使脫落細胞在潮濕環境下出現干燥難度大的問題，導致DNA發生降解，其中食物中富含大量蛋白質，屬于細胞繁殖有機載體，更易促進DNA降解。

最后，人源性污染。對于接觸性生物物證而言，其DNA含量普遍偏低，若被常量DNA載體所覆蓋，如血跡或唾液等，結合STR檢驗可有效實現DNA模量擴增的目的，但會對接觸性DNA檢出率產生影響；若接觸性生物檢材多樣，則會呈現交叉污染問題，從而使之DNA檢出工作呈現混合分型模式，不利于后期公安部調查工作的開展[4]。

4 結束語

總結上文，法醫在針對接觸性物證DNA檢驗中，為促進DNA檢出率的提升，應做好以下幾點工作：對現場物證接觸性DNA予以及時提取并在短時間內完成送檢工作；最大限度上提高脫落細胞接觸性DNA模量；選擇個人防護或單獨包裝的形式，避免接觸性DNA發生污染；通過對接觸性DNA載體清潔度的控制，對其提取方法進行合理選擇。

[1] 胡麗梅,張瑞,鄒軍根.接觸性生物檢材DNA提取方法的比較[J].法醫學雜志,2016,32(3):215-216.

[2] 李長征,劉海東,崔文,等.直接擴增技術在接觸性檢材DNA檢驗中的應用[J].濟寧醫學院學報,2014,37(5):347-349.

[3] 馬妍,匡金枝,朱巍,等.法醫DNA實驗室污染問題分析與對策[J].中國法醫學雜志,2014,29(4):363-364.

[4] 許冰瑩.法醫DNA序列多態性分析技術的研究進展[J].昆明醫科大學學報,2014,35(6):1-3.

R446.1

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1671-8194（2017）19-0295-02