32%精甲霜靈·噁霉靈種子處理液劑的高效液相色譜分析

高敬雨，潘 靜，徐 妍，東 琴，劉潤峰

(北京明德立達農業科技有限公司，北京 100085)

32%精甲霜靈·噁霉靈種子處理液劑的高效液相色譜分析

高敬雨，潘 靜，徐 妍，東 琴，劉潤峰

(北京明德立達農業科技有限公司，北京 100085)

采用高效液相色譜法測定32%精甲霜靈·噁霉靈種子處理液劑中精甲霜靈和噁霉靈的質量分數。以乙腈+水為流動相，使用ZORBAX SB-C18為填充物，對噁霉靈和甲霜靈進行定量分析，以正己烷+異丙醇為流動相，CHIRALCEL OD-H為填充物，對甲霜靈R-對映體(精甲霜靈)比例進行測定。結果表明，精甲霜靈和噁霉靈的標準偏差分別為0.11、0.24；變異系數分別為2.63%、0.85%；平均回收率分別為98.89%、99.68%。該法具有較高的準確性和精密度，簡便、快速，分離效果好。

精甲霜靈；噁霉靈；高效液相色譜；分析

精甲霜靈(metalaxyl-m)是先正達公司開發的酰胺類殺菌劑，也叫高效甲霜靈，具有預防和治療功效，對霜霉病菌、疫霉病菌、腐霉病菌等所致的蔬菜、果樹、煙草、棉花等作物病害具有良好的防治效果。此物質在土壤中的降解速度快，持效期長施藥次數少，對使用者安全性，與環境相容性好[1-2]。噁霉靈(hymexazol)是1930年由三井公司開發的一種內吸殺菌劑，對土壤病原真菌等有強烈的殺滅作用，能通過植物根部吸收，在植物體內代謝產生糖苷，促進作物根的生長和吸收，提高種苗的存活率。噁霉靈對由土傳病菌引起的各種作物立枯病、猝倒病、枯黃萎病、根腐病、莖枯病、莖腐病等防治效果顯著[3]。目前用于防治土傳病害的藥劑較少。對現有殺菌劑進行復配，可以延緩病菌抗藥性的產生，提高防效，擴大殺菌譜及降低用藥成本[4]。

有關精甲霜靈、噁霉靈單劑的檢測已有很多報道，梁有[5]等采用反相液相色譜法測定煙葉中精甲霜靈殘留。譚智勇[6]采用氣相色譜法對稻谷中噁霉靈的殘留進行檢測。關于兩者復配劑，崔林燕[7]等研究了甲霜·噁霉靈水劑的氣相液譜分析法，但液相色譜同條件分析方法目前尚未見報道。本文建立了同一液相色譜條件下測定精甲霜靈和噁霉靈質量分數的方法。試驗結果表明，該方法操作簡便，分離效果好，精密度、準確度較高。

1 材料與方法

1.1 甲霜靈、噁霉靈質量分數的測定

1.1.1 儀器和試劑

高效液相色譜儀：Agilent 1260，具可變波長紫外檢測器；色譜數據處理工作站。

乙腈：色譜純；水：新蒸2次蒸餾水；甲霜靈標樣(≥98.0%)，噁霉靈標樣(≥99.0%)(兩者均由北京明德立達農業科技有限公司提供)；32%精甲霜靈·噁霉靈種子處理液劑(4%精甲霜靈+28%噁霉靈，北京明德立達農業科技有限公司研制)。

1.1.2 色譜操作條件

色譜柱：150 mm×4.6 mm(i.d.)不銹鋼柱，內裝ZORBAX SB-C18填充物，粒徑5 μm；檢測波長：210 nm；流動相：乙腈︰水=45︰55(體積比)；流速：1.0 mL/min；進樣量：5 μL；柱溫：25 ℃。

上述操作條件，系典型操作參數，可根據不同儀器特點，對給定的操作參數作適當調整，以期獲得最佳效果。保留時間：噁霉靈約1.8 min，甲霜靈約5.9 min。典型的甲霜靈、噁霉靈液相色譜圖見圖1、圖2。

圖1 標樣液相色譜圖(1-噁霉靈、2-甲霜靈)

圖2 試樣液相色譜圖(1-噁霉靈、2-甲霜靈)

1.1.3 溶液配制

1.1.3.1 標樣溶液的配制

稱取甲霜靈標樣約30 mg、噁霉靈標樣約210 mg (精確至0.000 2 g)于50 mL容量瓶中,用乙腈溶解、定容，搖勻后吸取2 mL至10 mL容量瓶中，再用乙腈定容，搖勻后備用。

1.1.3.2 試樣溶液的配制

稱取試樣約148 mg(精確至0.000 2 g)于50 mL容量瓶中，用乙腈溶解、定容，搖勻、過濾后備用。

1.1.4 測定

在上述操作條件下，待儀器穩定后，連續注入數針標樣溶液，直至相鄰2針甲霜靈(噁霉靈)響應值相對變化小于1.5%時，按照標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液的順序進行測定。

1.1.5 計算

將測得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標樣溶液中的甲霜靈(噁霉靈)峰面積分別進行平均。試樣中甲霜靈(噁霉靈)的質量分數X1(%)按式(1)計算：

式中：A1——標樣溶液中，甲霜靈(噁霉靈)峰面積的平均值；A2——試樣溶液中，甲霜靈(噁霉靈)峰面積的平均值；m1——甲霜靈(噁霉靈)標樣的質量，g；m2——試樣的質量，g；P——標樣中甲霜靈(噁霉靈)的質量分數，%；5——稀釋因子。

1.2 甲霜靈R-對映體(精甲霜靈)比例的測定

1.2.1 儀器和試劑

高效液相色譜儀：Agilent 1260，具可變波長紫外檢測器；色譜數據處理工作站。

正己烷：色譜純；異丙醇：色譜純；水：新蒸2次蒸餾水；精甲霜靈標樣(≥98.0%)(北京明德立達農業科技有限公司提供)；32%精甲霜靈·噁霉靈種子處理液劑(4%精甲霜靈+28%噁霉靈，北京明德立達農業科技有限公司研制)。

1.2.2 色譜操作條件

色譜柱：250 mm×4.6 mm(i.d.)不銹鋼手性柱，內裝CHIRALCEL OD-H填充物，粒徑5 μm；檢測波長：225 nm；流動相：正己烷︰異丙醇=70︰30(體積比)；流速：1.0 mL/min；進樣量：5 μL；柱溫：25 ℃。

上述操作條件，系典型操作參數，可根據不同儀器特點，對給定的操作參數作適當調整，以期獲得最佳效果。保留時間：S-對映體約7.2 min，R-對映體(精甲霜靈)約16.3 min。典型的精甲霜靈液相色譜圖見圖3、圖4。

1.2.3 溶液配制

1.2.3.1 標樣溶液的配制

稱取精甲霜靈標樣約10 mg(精確至0.000 2 g)于50 mL容量瓶中，用流動相溶解、定容，搖勻后備用。

圖3 精甲霜靈標樣液相色譜圖(1-S-對映體、2-R-對映體)

圖4 精甲霜靈樣品液相色譜圖(1-S-對映體、2-R-對映體)

1.2.3.2 試樣溶液的配制

稱取試樣約含精甲霜靈10 mg(精確至0.000 2 g)于50 mL容量瓶中，用流動相溶解、定容，搖勻后備用。

1.2.4 測定

在上述操作條件下，待儀器穩定后，連續注入數針標樣溶液，直至相鄰2針甲霜靈S-對映體、R-對映體響應值相對變化小于1.5%時，按照標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液的順序進行測定。

1.2.5 計算

試樣中甲霜靈R-對映體的比例K，按式(2)計算：

式中：AR——試樣溶液中甲霜靈R-對映體峰面積的平均值；AS——試樣溶液中甲霜靈S-對映體峰面積的平均值。

試樣中精甲霜靈質量分數X2(%)按式(3)計算：

2 結果與討論

2.1 檢測波長的選擇

波長直接影響吸收峰面積的大小。對精甲霜靈、噁霉靈和甲霜靈標樣溶液分別進行紫外掃描(如圖5、圖6、圖7)，從圖中可以看出精甲霜靈、噁霉靈和甲霜靈的最大吸收波長分別在195 nm、205 nm和195 nm處。通過對比影響值，發現在甲霜靈、噁霉靈質量分數的測定中選擇210 nm作為檢測波長比較適宜。在此波長噁霉靈和甲霜靈均具有較強吸收峰，同時雜質影響值小，流動相無吸收。綜合考慮多種因素，最終選定210 nm作為同時檢測噁霉靈和甲霜靈的波長。同時發現甲霜靈S-對映體、R-對映體在225 nm處均具有較強吸收峰，同時雜質影響值小，流動相無吸收；綜合考慮多種因素，最終選定225 nm作為S-對映體和R-對映體的檢測波長。

圖5 精甲霜靈的紫外吸收圖

圖6 噁霉靈的紫外吸收圖

圖7 甲霜靈的紫外吸收圖

2.2 流動相的選擇

在甲霜靈、噁霉靈的檢測中，分別采用不同比例的乙腈＋水作為流動相對試樣進行分離檢測，結果發現，乙腈和水的體積比為45︰55時分離效果好，出峰時間短，且色譜峰尖銳，工作效率高。綜合以上因素，最終選定乙腈＋水(體積比為45︰55)作為流動相。

在精甲霜靈的檢測中，分別采用不同比例的正己烷+異丙醇作為流動相對試樣進行分離檢測，結果發現，正己烷和異丙醇的體積比為70︰30時分離效果好，出峰時間短，且色譜峰尖銳，工作效率高。綜合以上因素，最終選定正己烷+異丙醇(體積比為70︰30)作為流動相。

2.3 分析方法的線性曲線

配制5份不同濃度的精甲霜靈(噁霉靈)標樣溶液，在上述色譜操作條件下進行分析。以精甲霜靈(噁霉靈)質量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線，得精甲霜靈線性方程y=19.212 5x+31.050 5，其線性關系系數R2=0.999 3，表明線性關系良好(表1、圖8)；得噁霉靈線性方程y=18.383 1x+10.651 7，其線性關系系數R2=0.999 5，表明線性關系良好(表1、圖9)。

表1 分析方法的線性試驗數據

圖8 精甲霜靈線性關系圖

2.4 分析方法的精密度

在上述色譜條件下對同一個樣品進行5次平行測定，計算精甲霜靈、噁霉靈的標準偏差、變異系數(表2)。

圖9 噁霉靈線性關系圖

表2 32%精甲霜靈·噁霉靈種子處理液劑精密度測定

由表2看出，此方法的標準偏差和變異系數都較小，精密度較高。

2.5 分析方法的回收率

為檢測分析方法的準確度，測定產品的回收率。在已知含量的32%精甲霜靈·噁霉靈種子處理液劑中分別加入一定量的精甲霜靈、噁霉靈標樣，在上述色譜條件下，對各試樣中精甲霜靈、噁霉靈進行分析，重復5次，計算回收率(表3)。

表3 32%精甲霜靈·噁霉靈種子處理液劑高效液相色譜測定法準確度

由表3看出，此方法平均回收率在99.5%以上，準確度較高，方法可行。

3 結 論

本文中提出的32%精甲霜靈?噁霉靈種子處理液劑中有效成分質量分數的分析方法具有可行性，準確度和精密度較高，且簡便、快速。

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[7] 崔林燕. 3%甲霜?噁霉靈水劑的氣相色譜分析[J]. 現代農藥, 2012, (4)： 37－39.

Analysis of Metalaxyl-m and Hymexazol 32% LS by HPLC

GAO Jing-yu，Pan Jing，XU Yan，MA Chao，DONG Qin，LIU Run-feng
(Beijing MindleaderAgroscience Co., Ltd., Beijing 100085, China)

A method was developed for the determination of metalaxyl-m·hymexazol 32% LS by HPLC in this paper. Quantitative analysis of hymexazol and metalaxyl was carried out using acetonitrile and water as mobile phases using ZORBAX SB-C18as filler. The ratio of metalaxyl R-enantiomer (mefenoxam) was performed using n-hexane and isopropanol as mobile phase and CHIRALCEL OD-H as filler. The results showed that the standard deviations, coefficients of variationand average recovery ratesofmetalaxyl-m and hymexazol were 0.11, 2.63%, 98.89% and 0.24, 0.85%, 99.68%, respectively. This method has the advantages of high precision and accuracy, simple, fast, good separation.

metalaxyl-m; hymexazol; HPLC; analysis

10.16201/j.cnki.cn31-1827/tq.2016.06.11

TQ450.7

：A

1009-6485(2016)06-0047-04

高敬雨(1993—)，男，河北省邯鄲市人，工程師，主要從事農藥制劑加工研究工作。Tel： 010-62975002，E-mail： gaojingyu@mdldagro.com。

2016-11-17。