串聯液質聯用技術檢測蔬菜和水果中新煙堿類殺蟲劑殘留

李二虎，吳兵兵，張 武，趙 瑞，李桂紅

(天津市農藥檢定所，天津 300061)

串聯液質聯用技術檢測蔬菜和水果中新煙堿類殺蟲劑殘留

李二虎，吳兵兵，張 武，趙 瑞，李桂紅

(天津市農藥檢定所，天津 300061)

建立了采用串聯液質聯用技術測定蔬菜和水果中新煙堿類殺蟲劑殘留的方法。采用乙腈提取樣品中新煙堿類殺蟲劑農藥殘留，用氨基柱進行凈化，串聯液質聯用電噴霧電離源正離子模式進行多反應監測。結果表明，5種新煙堿類殺蟲劑添加量為0.02～0.4 mg/kg時，蔬菜和水果中的回收率為75.6%～114.5%，相對標準偏差為2.0%～14.4%，符合痕量分析要求。

新煙堿類殺蟲劑；液相色譜/質譜；電噴霧電離源；殘留

新煙堿類殺蟲劑是在煙堿結構修飾的基礎上成功開發出來的繼有機磷類、氨基甲酸酯類和擬除蟲菊酯類之后的第四大類殺蟲劑。作為后突觸煙堿乙酰膽堿受體(nAChRs)的激動劑作用于昆蟲中樞神經系統，具有高殺蟲活性、對哺乳動物低毒的優點。目前已在世界上120多個國家取得登記[1-3]，廣泛用于鮮食蔬菜、水果。國際食品法典委員會、歐盟、美國、中國等都制定了相應的農產品中農藥最大殘留限量標準，限量值為0.5～2 mg/kg。近年來，在發現該類殺蟲劑對蜜蜂的毒性后，歐盟于2013年12月起暫停使用該類殺蟲劑3年[4,5]。新煙堿類殺蟲劑最大殘留限量值可能也會做出相應的調整，甚至可能會調整為不得檢出，適應形勢的發展需要。建立農產品中高靈敏度和準確度的新煙堿類殺蟲劑殘留的檢測方法尤為重要。

新煙堿類殺蟲劑因揮發性低、極性高、存在基質效應等原因不適于直接采用氣相色譜進行分析。與氣相色譜法相比，液相色譜法更適合于此類殺蟲劑的檢測。但由于紫外檢測器靈敏度低，無法對低殘留的樣品進行檢測，且易受干擾，無法進行定性，串聯液質聯用法不僅檢測靈敏度高，能直接進行定性定量，且不易受干擾，成為目前農藥殘留檢測的主要方法[6-9]。筆者采用串聯液質聯用對新煙堿類殺蟲劑殘留檢測技術進行探索，建立了快速檢測5種新煙堿類殺蟲劑的殘留檢測方法。

1 試驗部分

1.1 儀器與材料

1.1.1 儀器

液相色譜-串聯質譜聯用儀Thermo Accela@ TSQ Quantum Access，配備ESI源；電子天平；T-25分散器；振蕩器；氮吹儀；超聲波清洗器；實驗室常規玻璃儀器。

1.1.2 試劑

乙腈、二氯甲烷，均為分析純；甲醇，色譜純；氯化鈉，分析純，使用前650 ℃高溫烘烤2 h；水，純凈水(娃哈哈?)；氨基柱，規格為500 mg，6 mL；濾膜，0.22 μm。

1.1.3 標準品

1 000 mg/L標準溶液，從農業部環境檢測中心(天津)購置。

1.2 試驗步驟

1.2.1 提取

稱取25.00 g樣品，置于250 mL廣口瓶中，加入50 mL乙腈，勻漿1 min，過濾。濾液置于裝有約6 g氯化鈉的具塞量筒中，振搖1 min，靜置分層30 min。準確量取10 mL乙腈溶液在60 ℃的水浴上氮吹至干，加入2～3 mL二氯甲烷+甲醇(體積比95∶5)溶液溶解殘渣。

1.2.2 凈化

先用5 mL二氯甲烷+甲醇(體積比95∶5)溶液預淋氨基柱，條件化，當液面下降至小柱的填料層時，加入提取樣品，用5 mL二氯甲烷+甲醇溶液洗脫小柱2次，收集。在50 ℃水浴上氮吹至干。加2 mL甲醇溶解，并置于超聲波清洗器中1 min，用甲醇+水(體積比1∶1)定容至5.0 mL，過0.22 μm濾膜，待測。

1.3 儀器條件

1.3.1 液相色譜條件

色譜柱：Hyperisil Gold柱，2.1 mm×100 mm；進樣量：5.0 μL；流動相比例及流速見表1。

1.3.2 質譜條件

離子源：ESI；正離子掃描；噴霧電壓：4 000 V；鞘氣壓力：35 bar；輔助氣壓力：5 bar；離子傳輸管溫度：350 ℃；碰撞氣及壓力：氬氣，1.5 mTorr。

表1 流動相比例及流速

2 結果與分析

2.1 儀器條件的優化

筆者采用電噴霧電離源(ESI)對噻蟲嗪、噻蟲胺、吡蟲啉、啶蟲脒和噻蟲啉進行了探索，均能產生穩定的[M+H]離子峰，在適宜的碰撞能量下均能產生穩定的定量離子峰。為得到較好的峰形，對液相色譜的流動相條件進行了摸索。試驗結果發現，在水相中加入5 mmol/L醋酸銨時，5種新煙堿類殺蟲劑的定性與定量離子峰的峰形得到改善，對[M+H]離子峰形成的抑制作用影響也較小，能夠進行準確定量，定性、定量離子對，碰撞電壓及保留時間(表2)。

表2 定性、定量離子對、碰撞電壓及保留時間

2.2 線性相關性測定

將噻蟲嗪、噻蟲胺、吡蟲啉、啶蟲脒和噻蟲啉的標準品用甲醇配制成0.02～3.0 mg/L濃度系列標準溶液，按照上述色譜-質譜條件，進樣測定。以質量濃度(mg/L)為橫坐標，定量離子的峰面積為縱坐標作圖，在一定的質量濃度范圍內，質量濃度與峰面積成良好的線性關系。線性范圍及線性方程見表3。

2.3 樣品前處理

為了減少檢測工作量，選取了芹菜、甘藍、番茄、蘋果和臍橙作為蔬菜和水果的代表基質進行研究，分別在以上基質中添加噻蟲嗪、噻蟲胺、吡蟲啉、啶蟲脒和噻蟲啉等常見的5種新煙堿類殺蟲劑進行檢測。參照了NY/T761-2008的前處理方法[10]，在方法探索過程中，對固相萃取的洗脫液比例進行了調整，將二氯甲烷和甲醇的量的比例由99∶1變為95∶5，洗脫液體積由4 mL增加至10 mL，使對5種新煙堿類殺蟲劑的洗脫更加充分，提高了回收率。

表3 線性范圍及線性方程

2.4 方法的回收率及精密度

在芹菜、甘藍、花椰菜、蘋果和臍橙中添加5種新煙堿類殺蟲劑進行回收率試驗，添加量為0.02～0.4 mg/kg，每個濃度重復5次。為了降低基質效應對樣品檢測的影響，采用空白的樣品基質配制標準溶液進行定量，均取得較好的結果，回收率為75.6%～114.5%，相對標準偏差為2.0%～14.4%(表4)，定量離子色譜圖見圖1。

圖1 噻蟲嗪、噻蟲胺、噻蟲啉、吡蟲啉、啶蟲脒標準溶液定量離子圖

表4 添加回收率試驗結果

3 結 論

本文對5種新煙堿類殺蟲劑殘留檢測的前處理、流動相條件及質譜條件進行優化，建立了利用串聯液質聯用儀ESI源檢測蔬菜和水果中新煙堿類殺蟲劑殘留的分析方法。該方法前處理簡便，重現性好，靈敏度高，可以作為檢測蔬菜和水果中新煙堿類殺蟲劑殘留量較為理想的方法。

[1] 鄧麗, 張蘭, 張燕寧, 等. 4種新煙堿類殺蟲劑對大型溞的急性活動抑制[J]. 農藥科學與管理, 2013, 34(6)： 23—25.

[2] 仇是勝, 張一賓. 新煙堿類殺蟲劑的發展及趨勢[J]. 世界農藥, 2014,36(5)： 5—6.

[3] 張梅鳳, 范金勇, 張宏偉, 等. 新煙堿類殺蟲劑的研究進展[J]. 世界農藥, 2009, 31(1)： 22—25.

[4] 段麗芳, 李賢賓, 柯昌杰, 等. 歐盟新煙堿類農藥限用政策對我國農藥相關產業的風險分析[J]. 農藥科學與管理, 2013, 34(9)： 15—20.

[5] 張敏恒, 趙平, 嚴秋旭, 等. 新煙堿類殺蟲劑市場與環境影響[J]. 農藥, 2012, 51(12)： 859—862.

[6] 何慶, 徐迎波, 王程輝, 等. SPE-LC/MS/MS法同時測定煙葉中5種

Determination of Neonicotinoid Insecticides Residues in Vegetables and Fruits by HPLC-MS/MS

LI Er-hu, WU Bing-bing, ZHANG Wu, ZHAO Rui, LI Gui-hong
(Tianjin Institute for the Control of Agrochemicals, Tianjin 300061, China)

A method for the determination of neonicotinoid insecticides residues in vegetables and fruits was developed by HPLC-MS/MS. The sample was extracted with acetonitrile and cleaned up with amino column. The residues of neonicotinoid insecticides was quantitated by HPLC-MS/MS with ESI in positive ion and multiple reaction monitoring (MRM) mode. When the addition levels were in the range of 0.02-0.4 mg/kg, the average recoveries ranged from 75.6% to 114.5% and the relative standard deviations were from 2.0% to 14.4%. This analytical method could meet the requirement for neonicotinoid insecticides residues.

neonicotinoid insecticides; HPLC-MS/MS; ESI; residue

10.16201/j.cnki.cn31-1827/tq.2016.06.10

TQ450.7；S481+.8

：A

1009-6485(2016)06-0044-03

天津市農業局青年科技人才培育項目(QN201506)

李二虎，男，高級農藝師，主要從事農藥殘留檢測及農藥管理工作。Tel： 13820280751；E-mail： lehjh@126.com。

2016-12-07。