在醫學檢驗中應用實時熒光定量PCR的研究進展

李 鑫

（天津醫科大學醫學檢驗學院，天津 300221）

實時熒光定位PCR由于測定速度快、測定結果精準，實時熒光定位PCR的敏感性強，因此適用于醫學檢測。實時熒光定位PCR是指在原有的PCR反應體系當中加入熒光基團，通過熒光基團實時的檢測和控制整個檢測過程。由于加入熒光集團的操作步驟簡單，能很大程度上的減少污染實驗的幾率，同時熒光標記更為精準，因此檢測速度更快、檢測效率更高，實時熒光定位PCR有點眾多，除了在醫學檢驗上應用外，還被應用于各個領域，實時熒光定位PCR技術還處于完善階段，具有非常好的發展前景。

1 實時熒光定位PCR的基本概念

實時熒光定位PCR技術與傳統的PCR技術相比，很多方面都有顯著的提升。實時熒光定位PCR技術是在傳統的PCR檢測的基礎上加入熒光基團，熒光基團的加入能夠有效的解決假陽性與不能定位的問題，解決這一問題能夠大大的提高檢測的準確率。熒光定位PCR以特定探針和引物作為重要組成部分，PCR反應完成后，通過熒光曲線對實驗數據進行分析，傳統的PCR技術相比較熒光定位PCR技術敏感度較差，準確度較差，結果準確率低，因此熒光定位PCR技術被廣泛應用于醫學檢測當中，能夠提供更加精準的檢測結果。

2 實時熒光定位PCR的檢驗原理

實時熒光定位PCR技術的檢驗原理包括兩個方面，一個是數學原理，一個是化工原理。數學原理是通過函數圖像和函數公式來計算，我們下面來簡單介紹一下化工原理，實時熒光定位PCR技術，是在PCR技術上，又運用了探針和熒光染料，來達到理想的定位追蹤。首先，是對引物的設計和對探針的設計，這是十分重要的，這個步驟直接影響到實驗結果的準確程度。其次就是把引物和探針進行組合，對此進行熒光標記，先利用探針來把靶序列特異雜交的探針來對產物的量進行控制，再利用熒光染料對產物進行指示或標記，PCR在擴增的過程中應加入引物和一個熒光性探針，在檢測物兩端分別標記報告熒光基團和淬滅熒光基團。報告熒光基團對淬滅熒光基團發出信號，外切酶對探針進行降解，能夠達到對檢測物質進行實時的監測，實時熒光標記能夠與DNA鏈達到實時的同步，并且能夠有效的避免交叉感染，有良好的實驗效果。

3 實時熒光定位PCR技術在醫學檢測方面的應用

熒光定位PCR技術是目前為止對DNA和RNA檢驗較為高效、精準率較高的方法，包括絕對定量分析和相對定量分析，這兩種分析方法，可以有效的檢測基因的拷貝數和濃度，同時對基因表達水平進行比較。在PCR檢測的過程中，DNA拷貝數量與反應時間成正相關，直到RNA反應不以質數方式生成，檢測結束。

4 熒光定位PCR技術當前的研究情況

我國在醫學檢驗中使用了實時熒光定量PCR技術，實時定位PCR技術在檢測癌基因方面表現突出，通過熒光定位技術能夠通過熒光標記精準的檢測出癌基因，在腫瘤早期早期進行診斷，對病情進行分析。除此之外，實時熒光定位PCR技術在藥物研究方面表現也是非常突出的，在新藥物的研究過程中，和藥物后期的觀測中，實時熒光定位能夠快速的、高效的完成任務，使研發和實驗都能夠順利完成，并且準確率較高，同時避免交叉污染。實時熒光定位PCR技術為我國的醫學方面做出了極大地貢獻，也是醫學檢驗中對實時熒光定位PCR技術大量使用的原因。實時熒光定位PCR技術是近年來較為熱門的技術之一，實時熒光定位技術是當前我們所能夠掌握的技術當中，檢測度最精準、最快速、最高效的方法之一。

5 總 結

當前實時定位PCR技術是非常熱門的檢驗技術，熒光定位PCR技術比傳統的PCR技術有較強的優勢，是臨床醫學和新藥物的研究的實用性極高的工具，與此同時，實時熒光定位PCR技術精確度高、準確性高的一個較為熱門的DNA、RNA檢測技術，通過引物探針能夠得到準確的實驗數據，通過熒光曲線達到理想的實驗效果，能夠精準的得出實驗數據，已經被廣泛的應用到現代的醫療檢測當中。

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