FHIT、C-myc基因在宮頸癌中的表達及臨床意義

宋春麗

(邯鄲市中心醫院婦一科，河北 邯鄲 056000)

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FHIT、C-myc基因在宮頸癌中的表達及臨床意義

宋春麗

(邯鄲市中心醫院婦一科，河北 邯鄲 056000)

目的 檢測脆性組氨酸三聯體基因(FHIT)、C-myc基因在宮頸癌中的表達，分析兩者之間的相關性。方法 采用免疫組化SP法檢測50例宮頸浸潤癌組織(CC)、70例宮頸上皮內瘤變(CIN)和30例正常宮頸組織中FHIT和C-myc的表達、分析其與宮頸癌臨床病理特點的關系及兩者之間的相關性。結果 (1) FHIT在正常宮頸組織、CIN組及宮頸癌組中的表達分別為93.3%、67.1%、22%，C-myc在正常宮頸組織、CIN組及宮頸癌組中的表達分別為16.7%、47.1%、76%。(2)FHIT的表達率隨FIGO分期升高、病理學分級升高而逐漸降低(P<0.05),在無淋巴結轉移及有淋巴結轉移的患者中逐漸降低(P>0.05)。C-myc陽性表達隨FIGO分期升高、病理學分級升高而升高(P<0.05)，在無淋巴結轉移及有淋巴結轉移的患者中逐漸升高(P>0.05)。(3)FHIT與C-myc的表達呈負相關。結論 同時檢測FHIT、C-myc基因可能有助于對宮頸癌的早期發現，并且有望成為對宮頸癌治療效果評價及預后分析的有效方法，兩者結合可作為宮頸癌預后判斷的指標。

脆性組氨酸三聯體基因； C-myc基因； 宮頸癌； 宮頸上皮內瘤變； 免疫組化

脆性組氨酸三聯體基因(FHIT)是一種抑癌基因,位于 3P14.2 區域,該基因跨越人類染色體脆性部位 FRA3B，在調節細胞周期和凋亡中發揮作用。C-myc基因是一種可使細胞無限增殖、獲永生化功能、促進細胞分裂的基因，與多種腫瘤的發生發展有關。FHIT、 C-myc在多種腫瘤組織中呈表達異常,但兩者在宮頸癌中相互作用的關系目前國內外尚未見相關報道。本實驗采用免疫組化方法對宮頸癌組織中FHIT和C-myc的表達進行檢測,結合臨床病理資料,探討兩者在宮頸癌中的表達及相互關系,為患者的預后估計提供參考。

1 材料與方法

1.1 標本來源及處理 本研究資料取自邯鄲市中心醫院從2012年1月至2015年9月手術切除及活檢的宮頸組織石蠟包埋標本150例為研究對象，其中30 例正常宮頸標本取自因子宮良性病變行子宮切除術的患者，宮頸上皮內瘤變70例，其中CINⅠ15 例、CINⅡ20例、CINⅢ35例，宮頸癌50例，按FTGO 臨床分期標準: Ⅰ期 16 例[其中Ⅰa1期3例，Ⅰa2期4例，Ⅰb1期 5例，Ⅰb2期4例，患者年齡19～45歲,平均年齡(33.9±5.94)歲]。Ⅱ期24 例[其中Ⅱa期10例，Ⅱb期14例，患者年齡22～58歲,平均年齡(46.4±9.94)歲]。Ⅲ期～IV期 10 例，患者年齡40～52歲,平均年齡(44.9±6.79)歲。宮頸癌患者均為宮頸鱗狀細胞癌，按腫瘤分化程度: 角化性大細胞型鱗狀細胞癌14例，非角化性大細胞型鱗狀細胞癌26 例，小細胞型鱗狀細胞癌10例。在手術的宮頸癌患者中，有淋巴轉移5例，無淋巴結轉移21例。全部標本均經過病理科診斷，術前未經過放、化療及腫瘤藥物治療。

1.2 主要試劑 FHIT兔抗人多克隆抗體、C-myc鼠抗人單克隆抗體、SP試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。DAB顯色試劑購自武漢博士德生物工程公司。

1.3 免疫組織化學染色 采用免疫組織化學S-P法，實驗步驟按試劑盒說明書進行，以檸檬酸緩沖液高溫高壓進行抗原修復，DAB顯色，自來水充分沖洗;梯度酒精脫水,二甲苯透明,中性樹膠封片。PBS代替一抗作空白對照，陽性對照為隨試劑盒附帶的陽線切片。每張切片選取5個高倍(400倍)視野，每視野觀察100個細胞。

1.4 結果判定 所有切片的觀察均經3名病理科醫生獨立在光鏡下完成。FHIT蛋白的表達產物定位于細胞漿，C-myc蛋白的陽性表達產物定位于細胞核,以出現棕黃色顆粒為陽性。按染色強度計分,0分為無色,1分為淡黃色,2分為黃色,3分為棕黃色；按陽性細胞所占百分比計分,陽性細胞數為≤10%為0分(-)，陽性細胞數>10%～≤25%為1分(+)，陽性細胞數>25%～≤50%為2分(++)，陽性細胞數>50%～≤75%為3分(+++)，陽性細胞數>75%為4分(++++)。0～<3分為表達陰性，≥3分為表達陽性。

1.5 統計學方法 采用SPSS13.0軟件包對數據進行統計學處理，實驗數據采用χ2檢驗,檢驗水準α=0.05(雙側)。

2 結 果

2.1 FHIT、 C-myc在正常宮頸組織、CIN組及宮頸癌組中的表達 FHIT在正常宮頸組織、CIN組及宮頸癌組中的表達分別為93.3%、67.1%、22%，其中正常宮頸組與CIN組比較差異有統計學意義(P<0.05)，CIN組與宮頸癌組比較差異有統計學意義(P<0.05)，正常宮頸組與宮頸癌組比較差異有統計學意義(P<0.05)。C-myc在正常宮頸組織、CIN組及宮頸癌組中的表達分別為16.7%、47.1%、76%，其中正常宮頸組與CIN組比較差異有統計學意義(P<0.05)，CIN組與宮頸癌組比較差異有統計學意義(P<0.05)，正常宮頸組與宮頸癌組比較差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 三組FHIT、 C-myc表達

2.2 FHIT、C-myc表達與宮頸癌臨床病理特征的關系 FHIT蛋白在宮頸癌Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期的表達分別為43.8%、12.5%、10%，差異有統計學意義(P<0.05)，在角化性大細胞型鱗狀細胞癌、非角化性大細胞型鱗狀細胞癌及小細胞型鱗狀細胞癌中的表達分別為50%、11.5%、10%，差異有統計學意義(P<0.05)。在無淋巴結轉移及有淋巴結轉移的宮頸癌中，表達分別為42.9%、20%，差異無統計學意義(P>0.05)。C-myc蛋白在宮頸癌Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期的表達分別為43.8%、87.5%、90%，差異有統計學意義(P<0.05)，在角化性大細胞型鱗狀細胞癌、非角化性大細胞型鱗狀細胞癌及小細胞型鱗狀細胞癌中的表達分別為71.4%、76.9%、80%，差異無統計學意義(P>0.05)。在無淋巴結轉移及有淋巴結轉移的宮頸癌中，表達分別為76.2%、100%，差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 FHIT和C-myc蛋白表達與宮頸癌臨床特征的關系

2.3 宮頸癌組織中FHIT與C-myc表達的相關性 在50例宮頸癌中，FHIT與C-myc同時表達陽性有10例，同時表達陰性有5例，應用spearman相關分析，FHIT與C-myc的表達呈負相關(P<0.05)。見表3。

表3 FHIT和C-myc蛋白在宮頸癌中表達的相關性

注：r=-0.622，P=0.000。

3 討 論

人乳頭瘤病毒(HPV)是一種雙鏈DNA病毒,其核心含有約7 800～7 900個堿基對高危型人乳頭瘤病毒的持續感染,是子宮頸上皮內瘤變及子宮頸癌發生的最主要因素[1]。但僅有HPV感染對宮頸癌的發展是不夠的，其他宿主因素包括改變腫瘤抑制基因的活動可能導致致癌過程[2]。到目前為止，多種人類原發腫瘤組織和細胞系中，尤其是暴露于環境致癌物的器官上皮腫瘤中經常發現有FHIT基因高比例的缺失，包括胃癌、結腸癌、乳腺癌、宮頸癌和頭頸部腫瘤等。近年來，人們從轉錄、翻譯等不同水平研究了FHIT與宮頸癌的關系。在宮頸癌中有44%～71%的FHIT基因的轉錄異常和表達異常，而且在宮頸癌前病變和原位癌中也有FHIT的異常轉錄和表達，表明FHIT基因的異常改變參與了宮頸癌的發生和發展。研究[2]表明FHIT基因CpG島甲基化是FHIT基因失活的主要機制，是與宮頸癌的發生有密切關系的早期事件。本研究顯示FHIT在正常宮頸組織、CIN組及宮頸癌組中的表達分別為93.3%、67.1%、22%，在宮頸癌中的表達明顯低于CIN組及正常宮頸組，三組之間差異均有統計學意義，說明FHIT在宮頸癌中發生了缺失，與其他研究結果一致[3]。且發現FHIT表達與臨床分期、病理分級關系密切，FHIT的低表達主要見于期別較高、小細胞型鱗狀細胞癌及有淋巴結轉移的宮頸癌患者中，提示它與宮頸癌潛在的惡性生物學行為密切相關，在宮頸癌的發生、發展中可能起重要作用。有研究表明，人乳頭狀瘤病毒16感染、FHIT基因甲基化和葉酸缺乏可能促進宮頸癌的進展，FHIT基因可能是一個有效的目標子宮頸癌的預防和治療[4]。

C-myc基因是myc基因家族的重要成員之一，C-myc基因既是一種可易位基因，又是一種多種物質調節的可調節基因，也是一種可使細胞無限增殖，獲永生化功能，促進細胞分裂的基因，與多種腫瘤發生發展有關。C-myc基因的擴增和過度表達可能是某些宮頸癌發生中的早發事件，約1/3的早期浸潤性癌和某些宮頸上皮內瘤樣病變3級出現C-myc的過度表達，但并未在正常宮頸上皮和低級別非典型增生中發現，有研究[5]表明，在早期癌中C-myc的擴增和預后較差有關。研究[6]證明，在宮頸癌中，C-myc蛋白的表達在有周圍組織浸潤、有淋巴結轉移和遠處轉移時顯著升高，其陽性表達隨期別的增加而升高。何志連[7]等研究結果顯示：C-myc在正常宮頸組織、CIN及宮頸癌中陽性表達率分別為20%(2/10),45%(9/20)和66.7%(20/30), 且隨FIGO分期、病理學分級、淋巴結轉移而升高。本研究顯示，C-myc在正常宮頸組織、CIN組及宮頸癌組中的表達分別為16.7%、47.1%、76%，且隨FIGO分期、病理學分級而升高。在有淋巴結轉移中的表達高于無淋巴結轉移病例中的表達，說明C-myc參與了宮頸癌的發展，對預后起預測作用。

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邯鄲市科技局科技計劃項目(項目編號：1323108087-13)

R737.33

B

1000-744X(2016)03-0254-03

2015-11-02)