用兩種方法檢測乙肝表面抗原結果分析

摘要：目的 了解用ELISA法檢測乙肝表面抗原和用化學發光法檢測表面抗原兩者之間的結果情況。方法 采集320例就診人員的血液標本，分別用化學發光法與ELISA法檢測。結果 320份標本中，發光法檢測出40份陽性，280份陰性。ELISA法檢測出42份陽性，278份陰性。經χ2檢驗兩者無顯著性差異（P>0.05）。結論 ELISA法成本比較低，耗時長，實驗的影響因素比較多，易出現假陽性。化學發光法成本高，所需時間短，干擾因素少，不易出現假陽性。

關鍵詞：乙肝表面抗原；ELISA；化學發光

流行病學調查結果顯示，我國的乙型病毒肝炎感染性約達10%，乙肝的實驗檢測對其防治具有非常重大的意義[1]。乙型肝炎病毒乙肝表面抗原（HBsAg）是乙肝病毒的外殼蛋白，它可存在于患者的血液、唾液、乳汁、汗液、淚水、鼻咽分泌物、精液及陰道分泌物中。隨著科學越來越進步，檢測的手段也越來越多。自20世紀70年代至今，諸多高敏感性的檢測方法被廣泛應用于臨床免疫學的檢測中，當中應用最為廣泛的就屬酶聯免疫法（enzyme linked Immunosor bent assay，ELISA）[2]。近幾年，化學發光微粒子免疫分析法（chemiluminescent microparticle immunoassay，CMIA）正逐漸發展，是一種敏感性較強的臨床免疫學檢測方法，有效解決了低濃度乙型肝炎病毒乙肝表面抗原的檢測難題[3]。現用ELISA法，化學發光法，這兩種方法檢測的相關性進行探討。

1 資料與方法

1.1一般資料 標本來自于我院2016年3月1日～3月5日體檢人員，共320例，男198例，女122例，年齡18～72歲，平均年齡為（39.5±8.4）歲。

1.2標本采集 用紅頭采血管，真空抽取靜脈血3 ml，標本靜置后離心提取血清。

1.3檢測試劑與儀器 一種采用雅培化學發光HBsAg定量檢測試劑盒，標本離心后，按照雅培I2000化學發光儀的操作規程檢測。試劑源自美國雅培公司，批準文號為70318HN00，儀器為美國雅培公司生產的i2000r化學光分析儀。另一種采用英科新創HBsAg酶聯免疫吸附試劑盒，安圖酶標儀，按照說明書的操作步驟進行。試劑由英科新創（廈門）科技有限公司提供，批準文號為2008095514，主要儀器為酶標儀（型號：伯樂680）、恒溫水浴箱（生產企業：上海博訊公司醫療器械廠）。

1.4結果陽性的判讀 化學發光法檢測含量>0.05為陽性。ELISA法：檢測標本的OD值/0.105>1為陽性。

2 結果

320份標本，ELISA法檢測出278份陰性，42份陽性，其中40份陽性的OD值>0.5，2份標本的OD值<0.5。化學發光法檢測出40份陽性，其中ELISA法檢測的那2份OD值<0.5的陽性標本檢測為陰性。最后再用ELISA法重新檢測這兩份標本，結果最終顯示又為陰性，與化學發光法結果相符。

3 討論

ELISA法檢測HBsAg是標本中存在的乙肝表面抗原與固相載休表面的抗體相結合，放入恒溫箱，通過一段時間的反應，再進行洗滌拍干后加入酶標記的抗體，反應一定時間后，再進行洗滌拍干，最后加顯色劑，與固相載體表面復合物相反應，如果存在乙肝表面抗原抗體復合物就會出現一定的顏色反應，呈現陽性。化學發光法將待測標本與生物素標記的單克隆抗體、三氯聯吡啶釕標記單克隆抗體、鏈酶親和素標記磁性微粒加入到反應杯中共同溫育，形成磁性微珠包被抗體-抗原-發光劑標記抗體復合物。經儀器內的緩沖液沖洗，當磁性微粒流經電極表面時，被安裝在電極下的磁鐵吸引住，而游離的發光劑標記抗體被沖走。同時在電極加電壓，啟動電化學發光反應，使發光試劑標記物三氯聯吡啶釕和TPA在電極表面進行電子轉移，產生電化學發光，光的強度與待測抗原的濃度成正比。全自動化學發光法所有的操作控制由儀器操作，具有靈敏度，準確率高，無輻射及快捷方便等優點[4]，避免了各種交叉污染，標本加錯的可能性，避免了溫度，時間控制偏差等。在ELISA法測定中影響因素較多，操作中的各個環節對試驗的檢測結果影響較大，在臨床檢驗中除正常反應外，有時常可見到一些錯誤的結果（即假陽性或陰性結果）[5]。如在人工加標本，加酶結合物，加底物，可能產生氣泡或濺出等人為的不當操作，特別是洗滌在ELISA中決定著實驗的成敗，標本中的非特異性的干擾物質吸附于固相載體上后，如果沒洗脫掉，就會產生假陽性，錯誤的結果。

320份標本中兩種方法檢測雖沒有顯著性差異，但有2份標本結果不相符，通過ELISA法一旦報告給患者，就會引起多方面的麻煩。化學發光法雖所需時間短，干擾因素少，不易出現假陽性，但成本高。由于ELISA法成本比較低，檢測的價格便宜，雖耗時長，實驗的影響因素比較多，易出現假陽性，但大多數健康體檢人員還是比較喜歡采用此種方法。所以作為臨床檢驗人員在操作的過程中一定要仔細，不得馬虎，對于像這種OD值<0.5標本一定要重新檢測，排除人為因素。

綜上所述，在乙型肝炎病毒乙肝表面抗原的檢測上，ELISA法成本比較低，耗時長，實驗的影響因素比較多，易出現假陽性。化學發光法成本高，所需時間短，干擾因素少，不易出現假陽性。

參考文獻：

[1]衛曉青，黃秋芳，戴悅，等.低水平HBsAg3種方法檢測結果比較[J].檢驗醫學與臨床，2013，10（3）：283-284.

[2]李秀梅，劉秋霞，閻澤君，等.ELISA法檢測乙肝表面抗原出現假陽性結果分析[J].慢性病學雜志，2010，12（9）：1037-1038.

[3]馬躍飛，高麗欽， 林曉麗.ELISA法檢測乙型肝炎表面抗原假陽性的影響因素[J].國際檢驗醫學雜志，2010，31（10）： 1176-1177.

[4]孫永惠. 淺議化學發光法診斷系統檢測乙型肝炎表面抗原[J]. 醫學信息，2013，26（8）：604-605.

[5]遲婉利，孔祥民. ELISA檢測乙肝病毒表面抗原假陽性原因分析[J].中國誤診學雜志，2011，11（9）：2050-2050.編輯/哈濤