畜產品中氟喹諾酮類藥物殘留高效液相色譜法檢測技術

[摘 要] 目的改善畜產品中氟喹諾酮類藥物殘留檢測。方法樣品經過磷酸鹽緩沖液提取，過HLB固相萃取柱，用適當乙腈比例的流動相進行分離。結果雞肉、雞蛋、豬肉樣品回收在85%—95%之間。結論操作簡單，回收穩定。

[關鍵詞] 畜產品 氟喹諾酮 藥物殘留 高效液相色譜法

[中圖分類號] S826 [文獻標識碼] A [文章編號] 1003-1650（2016）09-0276-01

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Waters2695高效液相色譜儀，15厘米C18粒徑5um液相色譜柱，WatersHLB固相萃取柱（30mg），安捷倫1200熒光檢測器，高速離心機，高速振蕩勻漿器。恩諾沙星、環丙沙星、沙拉沙星、達氟沙星標準品，色譜純乙腈、甲醇，超純水，其他試劑均為分析純。

1.2 工作試劑配制

5.0mol/L氫氧化鈉溶液：取氫氧化鈉飽和溶液28mL

加水稀釋至100mL。

0.03mol/L氫氧化鈉溶液：取5.0mol/L氫氧化鈉溶液0.6mL加水稀釋至100mL。

0.05mol/L磷酸三乙胺溶液：取濃磷酸3.4mL用水稀釋至1000mL，用三乙胺調pH至2.4。

30%乙腈緩沖液：取30mL乙腈和70mL0.05mol/L磷酸三乙胺溶液混合。

磷酸鹽提取液：取磷酸二氫鉀6.5g加水稀釋至500mL，用5.0mol/L氫氧化鈉溶液調pH至7.0。

洗脫液：乙腈與0.05mol/L磷酸三乙胺溶液2比8配制。

流動相：乙腈與0.05mol/L磷酸三乙胺溶液14比86配制。

1.3 標準溶液配制

準確稱取恩諾沙星、環丙沙星、沙拉沙星約25.00mg，達氟沙星5.00mg，用0.03M氫氧化鈉溶液定容于25mL容量瓶中，制成標準儲備液，根據稱量量和標準品濃度計算標準溶儲備液濃度，分別約為1mg/mL和0.2mg/mL。

根據儲備液實際濃度取適量至25mL容量瓶中，用流動相定容，配制成混標，混標濃度為：恩諾沙星、環丙沙星、沙拉沙星10ug/mL，達氟沙星2ug/mL。

質控樣品：取空白樣品2g，加入混標20uL。

1.4 樣品前處理

稱取均質后樣品2g與50mL離心管中，加18mL磷酸鹽提取液，高速震蕩10分鐘，9000r離心10分鐘，倒出上清液與50mL離心管中。上清液加10mL正己烷，高速震蕩10分鐘，9000r離心10分鐘，取10mL下清液過柱。

1.5 凈化

HLB固相萃取柱依次用3mL乙腈、30%乙腈緩沖液、磷酸鹽提取液潤洗，取上步10mL下清液過柱，用3mL水淋洗吹干，加1mL洗脫液洗脫抽干，收集洗脫液作為試樣溶液，過0.2um濾膜上機。

1.6 測定

液相流速1.0mL/min，進樣量10uL，流動相：乙腈與0.05mol/L磷酸三乙胺溶液14比86配制，運行時間12min（根據流動相比例改變可調整）。檢測波長：激發波長280nm，發射波長450nm。

2 結果與討論

2.1 流動相的選擇

在試驗中發現完全洗脫需要乙腈比例達到20%，而這個比例在15cm的液相色譜柱使用中不能達到良好的分離度，因此采用2中不同比例用在洗脫和上機過程中，以達到良好的效果。

2.2 處理方法的選擇

在一些方法中，前處理是提取液分2次添加，雖然理論上能達到更好的回收，在實際實驗中，發現部分樣品處理中，乳化嚴重，不好操作，該成一次添加能更穩定的處理樣品。

有的方法使用的是C18固相萃取柱，在本方法試驗多次后發現C18回收偏低，而HLB能達到良好回收，故選用HLB固相萃取柱。

2.3 方法回收率

質控樣品：取空白樣品2g，加入混標20uL。對雞蛋、雞肉、豬肉各取3個樣品分批處理，每個樣品測定2次，回收率均在85%—95%之間。

3 結論

本實驗建立了恩諾沙星、環丙沙星、沙拉沙星、達氟沙星4種氟喹諾酮類藥物殘留在畜產品中的高效液相檢測方法，使用相對高的乙腈比例洗脫，適當乙腈濃度上機，達到較高且穩定的回收率，在圖譜中有良好的分離和峰型，測定結果穩定。