異羥肟酸對宮頸癌細胞生長抑制作用的研究

魏萍+李苓+張瑋+張小玲+張婷婷+盛修貴

【中圖分類號】R490.5 【文獻標識碼】A 【文章編號】2095-6851（2016）12-0-01

組蛋白去乙酰化酶抑制劑（HDI）是一類特異性抑制組蛋白去乙酰化酶、促進染色質(zhì)解螺旋、增強其趨近性，從而調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄的小分子化合物。體內(nèi)、外研究證明組蛋白去乙酰化酶抑制劑可通過抑制腫瘤細胞增殖、誘導(dǎo)凋亡、抑制腫瘤血管生成及轉(zhuǎn)移、降低腫瘤侵襲力等機制發(fā)揮抗腫瘤作用，與放射聯(lián)合還有放射增敏作用[1]。

近來研究表明， 異羥肟酸有組蛋白去乙酰化酶（histone deacetylase ， HDAC）抑制劑活性， 可抑制多種腫瘤細胞生長。異羥肟酸被廣泛稱為低毒性HDAC抑制劑。Tambunan US[2]等研究提出了利用苯三唑?qū)Ξ惲u肟酸修改，獲得一個更好的抑制劑。本研究觀察異羥肟酸對宮頸癌Hela 和Siha 細胞株生長和細胞周期的影響及p53mRNA 和蛋白表達改變。

1.材料與方法

1.1 材料

異羥肟酸購自Sigma 公司，用PBS 稀釋成500mmol/L， 過濾分裝，貯藏于- 20℃。P53抗體購自Santa Cruz 公司，為鼠抗人單抗。RPMI-1640 （Gibco 公司）。TRIZOL 試劑購自Invitrogen 公司。新生牛血清（杭州四季青）。FACSort 流式細胞儀為美國Becton Dickson 公司產(chǎn)品。四甲基偶氮唑藍（MTT）、二甲基亞砜（DMSO）（Sigma）；AnnexinV-FITC 凋亡和細胞周期分析試劑盒為Becton Dickinson 公司產(chǎn)品。

1.2 實驗方法

1.2.1 細胞和細胞培養(yǎng)

Hela 和Siha 細胞株由本科室保存。細胞在5% CO2、37℃條件下，用含10% 新生牛血清、青霉素（100U/ml）、鏈霉素（100U/ml）的RPMI-1640 培養(yǎng)液培養(yǎng)傳代。

1.2.2 MTT 實驗檢測生長抑制率

取對數(shù)生長期宮頸癌細胞，按細胞濃度為5×104/ 孔接種于96 孔板。37℃、5%CO2 飽和濕度培養(yǎng)24h 后， 分別加入不同濃度SAHA（0， 1.2， 2.4， 5.0 mM） 的培養(yǎng)基，每孔200μl，對照組不做處理。分別于加藥后0、1、2、3和4天，每孔加入MTT 溶液（5mg/ml）20μl， 37℃避光培養(yǎng)4h。徹底吸去MTT 溶液，加入二甲基亞砜150μl/孔， 震蕩10min， 酶標儀490nm激發(fā)波長檢測吸光度。……