雙波長(zhǎng)高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定風(fēng)濕安泰片中柚皮苷、淫羊藿苷含量

楊立志

（黑龍江省雞西市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，黑龍江 雞西 158100）

雙波長(zhǎng)高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定風(fēng)濕安泰片中柚皮苷、淫羊藿苷含量

楊立志

（黑龍江省雞西市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，黑龍江 雞西 158100）

目的 建立同時(shí)測(cè)定風(fēng)濕安泰片中柚皮苷、淫羊藿苷含量的高效液相色譜法。方法 采用Agilent Extend C18色譜柱，流動(dòng)相為乙腈－水梯度洗脫，流速為1．0 mL／min，柱溫為30℃，柚皮苷和淫羊藿苷檢測(cè)波長(zhǎng)分別為283，270 nm。結(jié)果 柚皮苷、淫羊藿苷進(jìn)樣量分別在0．148 0～1．850 0 μg，0．432 0～5．400 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好，r＝0．999 5，1．000 0；平均回收率分別為97．38%，97．43%，RSD分別為0．84%，0．74%（n＝6）。結(jié)論 該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、靈敏、重復(fù)性好，可作為風(fēng)濕安泰片中柚皮苷、淫羊藿苷的質(zhì)量控制方法。

雙波長(zhǎng)高效液相色譜法；風(fēng)濕安泰片；柚皮苷；淫羊藿苷

風(fēng)濕安泰片為中藥復(fù)方制劑，由生川烏、生草烏、馬錢子（制）、羌活、烏梢蛇、紅花、骨碎補(bǔ)（制）、烏梅、金銀花、細(xì)辛、紅參、鹿茸、黃柏、沒藥、廣地龍、地楓皮、老貫草、五加皮、續(xù)斷、麻黃、甘草、槲寄生、淫羊藿、牛膝、桂枝25味藥材組方，具有舒筋活血、祛風(fēng)鎮(zhèn)痛的功效，用于治療筋骨麻木、手足拘攣、腰腿疼痛、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。原標(biāo)準(zhǔn)僅對(duì)方中個(gè)別藥材進(jìn)行了顯微鑒別和薄層鑒別，無含量測(cè)定項(xiàng)[1]。為更好地控制風(fēng)濕安泰片的質(zhì)量，筆者參考文獻(xiàn)[2－16]，采用雙波長(zhǎng)高效液相色譜梯度洗脫法測(cè)定了制劑中骨碎補(bǔ)所含柚皮苷及淫羊藿所含淫羊藿苷的含量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1．1 儀器

Waters e2695型高效液相色譜儀（包括2475二極管陣列檢測(cè)器，LC solution色譜工作站，美國(guó)Waters公司）；AG285型電子分析天平(瑞士梅特勒托利多公司)；KQ－400KDE型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1．2 試藥

柚皮苷對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為110722－200610)；淫羊藿苷對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為110737－200415)；風(fēng)濕安泰片(吉林省輝南輝發(fā)制藥股份有限公司，批號(hào)為20121102；通藥制藥集團(tuán)股份有限公司，批號(hào)為131101，140604)。水為超純水，乙腈為Merck公司生產(chǎn)的色譜純。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件

色譜柱：Agilent Extend C18柱（250 mm×4．6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈（A）－水（B），梯度洗脫（0～30 min，19．0%～50%A；30～40min，19．0%A）；流速：1．0mL／min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)：柚皮苷283 nm，淫羊藿苷270 nm。理論板數(shù)按柚皮苷、淫羊藿苷峰計(jì)算均不低于3 000。

2．2 溶液制備

混合對(duì)照品溶液：精密稱取柚皮苷、淫羊藿苷對(duì)照品各適量，加甲醇制成每1 mL含柚皮苷0．074 0 mg、淫羊藿苷0．216 0 mg的混合對(duì)照品溶液。

供試品溶液：取本品10片，除去糖衣，精密稱定（平均片重為0．387 7 g），研細(xì)，精密稱取2．0 g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率400 W，頻率40 kHz）30 min，取出，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，用微孔濾膜（0．45 μm）濾過，取續(xù)濾液，即得。

陰性對(duì)照品溶液：按處方量并以相同工藝制備不含骨碎補(bǔ)、淫羊藿的陰性對(duì)照樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗(yàn)：取2．2項(xiàng)下3種溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果陰性對(duì)照品溶液色譜圖中，在柚皮苷、淫羊藿苷色譜峰相應(yīng)位置處無干擾峰出現(xiàn)，表明陰性樣品中其他組分對(duì)柚皮苷、淫羊藿苷的測(cè)定無干擾，見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：精密吸取混合對(duì)照品溶液2，5，10，15，20 μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積，以進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程，柚皮苷 Y＝2．000 0×106X＋5．578 5× 103，r＝0．999 5（n＝6）；淫羊藿苷 Y＝1．000 0×106X＋5．400 1×103，r＝1．000 0（n＝6）。結(jié)果表明，柚皮苷、淫羊藿苷進(jìn)樣量分別在0．148 0～1．850 0 μg和0．432 0～5．400 0 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一混合對(duì)照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄平均峰面積。結(jié)果柚皮苷、淫羊藿苷的峰面積值分別為1 357 476和2 582 938，RSD分別為0．57%和0．64%（n＝6），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批（批號(hào)為20121102）樣品，分別依法制備6份供試品溶液，并測(cè)定含量。結(jié)果柚皮苷、淫羊藿苷的平均含量為每片0．080和0．085 mg，RSD分別為0．71%和0．82%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一份供試品溶液，分別于配制0，2，4，8，12，16，20，24 h時(shí)各進(jìn)樣10 μL。結(jié)果柚皮苷、淫羊藿苷峰面積的平均值分別為150 071．5和103 337．5，RSD分別為0．43%和0．52%（n＝8），表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：稱取已知含量的同一批樣品（批號(hào)為20121102，柚皮苷和淫羊藿苷每片含量為0．079 mg和0．084 mg）樣品6份，每份約0．1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，共3組，每組分別精密加入質(zhì)量濃度為20 μg／mL和21 μg／mL的柚皮苷和淫羊藿苷對(duì)照品溶液各0．8，1．0，1．2 mL。依法制備供試品溶液，并按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

2．4 樣品含量測(cè)定

取風(fēng)濕安泰片3批，按2．2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件測(cè)定本品中柚皮苷、淫羊藿苷的含量。結(jié)果見表2。

3 討論

選擇測(cè)定波長(zhǎng)時(shí)，對(duì)柚皮苷和淫羊藿苷對(duì)照品溶液在 240～300 nm波長(zhǎng)處進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果柚皮苷在270 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，淫羊藿苷在283 nm波長(zhǎng)處有最大吸收。故選擇270 nm及283 nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。

本試中驗(yàn)以甲醇、40%甲醇、稀乙醇為提取溶劑，結(jié)果以甲醇為提取溶劑時(shí)柚皮苷含量明顯高于40%甲醇和稀乙醇。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

表2 3批樣品每片藥品含量測(cè)定結(jié)果（n＝6，mg）

對(duì)甲醇－0．1%磷酸溶液、甲醇－0．1%冰醋酸、乙腈－水等流動(dòng)相進(jìn)行了考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)以乙腈－水為流動(dòng)相能很好地改善分離度和柱效，柚皮苷峰及淫羊藿苷峰與其他組分均能實(shí)現(xiàn)完全分離，經(jīng)過優(yōu)化選擇，確定了乙腈－水梯度洗脫為流動(dòng)相。

樣品提取時(shí)，分別超聲提取20，30，40 min，結(jié)果超聲30 min提取完全，故采用超聲提取30 min作為本試驗(yàn)提取方法。

方中骨碎補(bǔ)、淫羊藿為主藥，柚皮苷和淫羊藿苷為其主要成分，且含量高，易于測(cè)定，故采用測(cè)定處方中柚皮苷和淫羊藿苷的量來控制該制劑的質(zhì)量。該方法簡(jiǎn)便準(zhǔn)確，專屬性強(qiáng)，靈敏度和精密度均能達(dá)到測(cè)定要求，可為控制風(fēng)濕安泰片質(zhì)量和深入研究其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供了參考。

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Content Determination of Naringin and Icariin in Fengshi Antai Tablets by Dual－Wavelength HPLC

Yang Lizhi
(Jixi Center for Food and Drug Inspection,Jixi,Heilongjiang,China 158100)

Objective To establish a HPLC for the simultaneous content determination of Naringin and Icariin in Fengshi Antai Tablets．M ethods HPLC assay was carried out on a Agilent Extend－C18column with a column temperature at 30℃．The mobile phase used Acetonifrile －Water as gradient elution with flowing rate 1．0 mL／min．The detection wavelength was 283 nm and 270 nm for naringin and icariin respectively．Results The linear ranges of naringin and icariin were in the range of 0．148 0－1．850 0 μg and 0．432 0－5．400 μg respectively(r＝0．999 5,r＝1．000 0),and the average recovery was 97．38%,97．43%(RSD＝0．84%,0．74%,n＝6)．Conclusion The method is convenient,accurate,sensitive and repeatable,and could be used in the content control of naringin and icariin in Fengshi Antai Tablets．

dual－wavelength HPLC;Fengshi Antai Tablets;naringin;icariin

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2016)23－0071－03

楊立志（1977－），男，大學(xué)本科，副主任藥師，主要從事食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)工作，（電子信箱）Lizhi669＠sohu．com。

2016－07－13；

2016－09－11)