夏天無滴丸的藥效學研究

胡 佳，何 濤，王 闖

（遼寧省錦州市藥品檢驗檢測中心，遼寧 錦州 121000）

夏天無滴丸的藥效學研究

胡 佳，何 濤，王 闖

（遼寧省錦州市藥品檢驗檢測中心，遼寧 錦州 121000）

目的 探討夏天無滴丸的鎮痛、抗炎、免疫增強作用。方法 采用熱板法、醋酸扭體法、鼠耳腫脹法、大鼠炎性肉芽腫增生法、小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞試驗。結果 夏天無滴丸對冰醋酸誘發的小鼠扭體反應均有明顯的抑制作用；對小鼠的痛閾值有提高；對二甲苯所致的小鼠耳腫脹具有明顯的抑制作用，并呈明顯的量效關系；各劑量對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞功能均有明顯的促進作用，作用呈一定的量效關系。結論 夏天無滴丸具有鎮痛、抗炎與免疫增強的作用。

夏天無滴丸；鎮痛；抗炎；免疫；藥效學試驗

夏天無又名伏地延胡索、無柄紫堇、一粒金丹，系罌粟科植物伏生紫堇 corydalis decumbens(Thunb．)Pers．的干燥塊莖，具活血通絡、行氣止痛之功效，臨床用于中風偏癱、跌撲損傷、風濕性關節炎、坐骨神經痛[1]。其常用制劑包括注射劑、片劑和滴眼劑[2]。普通片劑常因崩解和藥物溶出緩慢而影響藥物的充分吸收，老人、兒童和吞咽困難的患者服用不便，當藥品劑量、規格較大，或需一次服用片數較多時，問題尤為突出。液體制劑雖服用方便，但穩定性差，包裝、運輸、貯存均不便，且不易準確掌握服用劑量。滴丸劑系指固體或液體藥物與適宜的基質加熱熔融后溶解、乳化或混懸于基質中，滴入不相混溶、互不作用的冷凝液中，收縮冷凝而制成的制劑[3]，利用固體分散體的技術制備。當基質溶解時，體內藥物以微細結晶、無定形微粒或分子形式釋出，所以溶解快、吸收快、作用快、生物利用度高[4]。現就夏天無滴丸藥效學研究報道如下。

1 儀器、試藥與動物

1．1 儀器

HH－4型數顯恒溫水浴鍋（國華電器有限公司）；打孔器，消毒手術器械一套、消毒棉球；K3100A型電子天平均購自上海天平儀器廠。

1．2 試藥

夏天無滴丸（本課題組制備）；夏天無片（江西天施康中藥股份有限公司，國藥準字號Z36021951）；生理鹽水（沈陽北方制藥廠，國藥準字H21021049），戊巴比妥（西安化學試劑廠，批號為200210100)；完全弗氏佐劑購于Sigma公司。雞紅細胞懸液[將雞血置有玻璃珠的錐形瓶中，朝一個方向充分搖動，以脫纖維；用生理鹽水洗滌2～3次，離心(2 000 r／min，10 min)，去上清，用生理鹽水配成體積分數為20%(V／V)]。

1．3 動物

昆明種系小鼠，清潔級SD大鼠，雌性，未交配，購于遼寧長生生物技術有限公司(許可證號SCXK2010－0001號)。飼養條件：遼寧中醫藥大學實驗動物中心，符合衛生檢疫標準，室溫（20±1）℃，濕度20%，照明晝夜明暗交替時間為12∶12，大鼠自由飲水、進食。飼料為標準飼料（沈陽市于洪區前民飼料廠，飼料配方：玉米面40%，白面26%，麩子10%，豆餅10%，魚粉10%，骨粉2%，鹽1%及復合維生素1%）。

2 方法與結果

2．1 鎮痛作用

2．1．1 醋酸誘發小鼠扭體反應

取體重為（20±2）g的雄性小鼠50只，隨機分為5組，每組10只。陰性對照組灌胃生理鹽水0．5 mL，陽性對照組灌胃夏天無片藥液464 mg／kg，低、中、高劑量組灌胃夏天無滴丸混懸液55，167，510 mg／kg，連續灌胃5 d。第5天，各組小鼠于給藥1 h后，分別腹腔注射1%的冰醋酸溶液0．2 mL，記錄15 min內各小鼠有無扭體反應以及扭體的次數，計算各組扭體次數，計算鎮痛百分率，并經方差分析作 q檢驗比較給藥組與對照組的差異。扭體反應表現為腹部內凹、軀干和后退伸張、臀部抬高等[5]。腹腔注射冰醋酸溶液后，各組小鼠均出現扭體反應。結果見表1。

鎮痛百分率(%)＝(對照組平均扭體次數－給藥組平均扭體次數)／對照組平均扭體次數×100%

表1 夏天無滴丸對醋酸誘發小鼠扭體反應的影響（n＝10）

2．1．2 熱刺激小鼠痛閾值(熱板法)

將作為熱板的材料置入恒溫水浴箱中，把恒溫水浴箱調節至（55±1）℃，待熱板溫度恒定時開始試驗。取體質量（20±2）g的雌性小鼠，置熱板上，以小鼠舔后足或跳躍為觀察指標，測定各小鼠的正常痛閾值。30 s以內者供試驗用，過于敏感、反應遲鈍、喜跳動者剔除[6]。取測試合格的雌性小鼠50只，隨機分為5組，每組為10只。空白對照組灌胃生理鹽水0．5 mL；陽性對照組按464 mg／kg的劑量灌胃夏天無片藥液；低、中、高劑量組分別按55，167，510 mg／kg灌胃夏天無滴丸混懸液。分別在各組給藥后15，30，45，60，90 min測定各組小鼠的痛閾值。如果小鼠在熱板上停留超過60 s仍無痛反應，則即刻取出，按60 s計算。用測得的數值與同一時間間隔的陰性組痛閾值進行比較，并經方差分析作 t檢驗比較給藥各組與對照組的差異情況。按下述公式計算各組鎮痛百分率。結果見表2。

鎮痛百分率(%)＝(用藥后平均痛閾值－用藥前平均痛閾值)／用藥前平均痛閾值×100%

2．2 抗炎作用[7]

2．2．1 對小鼠二甲苯致炎的影響（鼠耳腫脹法）

取昆明種小鼠50只，體質量18～22 g，雄性，隨機分成5組，每組10只，高、中、低劑量組灌夏天無滴丸混懸液 510，167，55 mg／kg，陰性對照組灌生理鹽水0．5 mL，陽性對照組灌胃夏天無片溶液464 mg／kg。每天灌1次，連續7 d，于末次給藥30 min后，于小鼠右耳兩面涂二甲苯0．1 mL，致腫，左耳不涂為正常耳，1 h后脫頸椎處死，沿耳廓基線剪下兩耳，用直徑9 mm打孔器沖下左耳及右耳同一部位的圓片，于分析天平上稱重。右耳質量減去左耳質量為腫脹度，計算鼠耳腫脹度。結果見表3。對腫脹度進行分組 t檢驗，夏天無滴丸各組與模型組相比較，差異均不顯著。

表2 夏天無滴丸對熱刺激小鼠痛閾值的影響（n＝10）

抑腫率(%)＝（模型組－給藥組差值）模型組差值× 100%

表3 夏天無滴丸對小鼠二甲苯致炎的影響（n＝10）

2．2．2 大鼠炎性肉芽腫增生的影響[8]

大鼠購回后適應性喂養1周，然后隨機分為5組，每組10只，手術當日，給予大鼠腹腔注射1%戊巴比妥35 mg／kg麻醉，于胸部正中線用碘及75%酒精消毒后剪1～2 cm的小口，再用止血鉗由切口處將滅菌棉球(重量為30 mg，經高壓滅菌)塞入左、右腋窩處的皮下，每側一個，而后將切口縫合。手術后第2天開始每組每日灌胃1次，陽性對照組給生理鹽水3 mL，陽性對照組給夏天無片藥液464 mg／kg，低、中、高劑量組分別予夏天無滴丸混懸液55，167，510mg／kg，連續7 d。第8天處死，分別剝離肉芽組織，80℃，3 h烘干，電子天平稱重，減去棉球質量即為肉芽組織凈重。所有數據用均數±標準差(s)表示，組間數據比較用 t檢驗。結果見表4。

表4 夏天無滴丸對大鼠棉球肉芽腫的影響(n＝10)

2．3 免疫作用

2．3．1 小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞試驗

小鼠的巨噬細胞可通過聚集、識別和吞入消滅3個步驟完成吞噬異體物質雞紅細胞[9]。利用小鼠的巨噬細胞對光滑表面（如玻璃表面）具有黏附能力的特性，將雞紅細胞經腹腔注射入小鼠體內后，用生理鹽水洗脫小鼠腹腔，將含有巨噬細胞的腹腔液滴于載玻片上，孵育一定時間后，沖洗掉無黏附能力或粘附力差的巨噬細胞，固定染色，在顯微鏡下計數吞噬雞紅細胞的小鼠巨噬細胞數，按下列公式算出吞噬指數和吞噬率，據此判定夏天無滴丸對小鼠巨噬細胞吞噬能力的影響。

吞噬指數＝吞噬雞紅細胞的巨噬細胞數／巨噬細胞數×100%

吞噬率(%)＝被吞噬的雞紅細胞數／巨噬細胞數× 100%

將受試組和對照組的小鼠連續灌胃7 d后，（給藥后第6天，每鼠腹腔注射5%滅菌淀粉溶液1．0 mL），末次給藥后1 h，每只小鼠腹腔注射5%雞紅細胞懸液1．0 mL。于注射雞紅細胞后1．5 h，將小鼠脫頸椎處死，仰臥固定于鼠板上，腹腔注射生理鹽水1．0 mL，輕輕按摩小鼠腹部1 min，然后剪開腹壁，抽取小鼠腹腔液滴于2片干凈的載坡片上，每片0．2 mL涂片。將涂片放在墊有濕紗布的塘瓷盤中，置于恒溫37℃孵育箱中溫育40 min，使載坡片上腹腔洗液干燥。干燥后用乳頭吸管抽取生理鹽水輕輕沖洗，以洗去未貼片的細胞，晾干，用姬母薩－瑞特氏液染色15 min，用蒸餾水輕輕沖洗，晾干，在油鏡下每片計數200個巨噬細胞，計數出已吞噬雞紅細胞的巨噬細胞個數及各巨噬細胞吞噬雞紅細胞的總數。按下列公式計算每鼠巨噬細胞的吞噬百分率和吞噬指數。對吞噬百分率及吞噬指數進行組間 t檢驗，評價對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能的影響。結果見表5。

表5 夏天無滴丸對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬能力的影響（s，n＝10）

表5 夏天無滴丸對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬能力的影響（s，n＝10）

注：與陰性對照組比較，**P＜0．05。

組別陰性對照組陽性對照組低劑量組中劑量組高劑量組劑量（mg／kg）464 55 167 510吞噬百分率(%) 39．60±4．86 70．60±2．86 51．30±4．22 95．40±3．08**63．45±4．67吞噬指數0．97±0．27 0．41±0．032 0．50±0．042 0．58±0．044**0．54±0．039

2．3．2 佐劑型關節炎大鼠的影響[10]

大鼠購回后，喂養1周，然后隨機分為6組，A（空白組）、B(模型組)、C(陽性對照組)、D(夏天無滴丸高劑量組)、E(夏天無滴丸中劑量組)、F(夏天無滴丸低劑量組)，每組8只，各組大鼠體質量經統計學處理，無顯著性差異（P＞0．05）。結果見表6。

表6 各組大鼠體質量比較（s，n＝8，g）

表6 各組大鼠體質量比較（s，n＝8，g）

組別A組B組C組平均體質量163．7±15．2 163．2±11．2 163．3±10．5組別D組E組F組平均體質量163．5±12．5 163．0±16．3 163．8±10．3

大鼠在滅菌條件下經鼠右后跖皮下一次性注射CFA0．1 mL，48 h后，灌胃給藥，每日1次，連續30 d，陰性對照組不灌胃，陽性對照組給生理鹽水2 mL，組給夏天無片藥液464 mg／kg，低、中、高劑量組分別給夏天無滴丸混懸液55，167，510 mg／kg。造膜及給藥期間，觀察各組大鼠精神狀態、飲食、體重變化、毛色等；觀察關節原發病變及繼發損害情況，如皮膚充血、紅腫、皮溫升高、結節等。

行為狀態：造模18 h后，大鼠出現豎毛、喜臥、活動減少，第3天開始出現攝食減少，1周后飲食基本恢復正常。造模13 d后，隨著繼發關節腫脹加重，再次出現活動攝食減少，體質量增長較空白組慢，毛色泛黃無光澤，精神不振，18 d達高峰，至第30天基本恢復。A組試驗期間精神狀態，攝食活動均無明顯變化，體重增加較快。30天其余各組體質量比較見表7。

表7 造模第30天各組大鼠體質量比較（s，n＝8，g）

表7 造模第30天各組大鼠體質量比較（s，n＝8，g）

A組B組C組平均體質量430．5±18．3 351．0±31．2 387．2±33．3組別D組E組F組平均體質量376．5±19．8 368．7±15．4 350．6±18．6

關節外觀變化：造模數小時后，右后足出現局部皮膚充血，溫度升高，24 h后，后足明顯腫脹發紅，第3天達高峰，后開始減輕。第13天，大多數造模大鼠右后足再次腫脹，逐漸累及全后肢及前肢，第18天達高峰，關節局部充血，足跖增厚出現蹺足等。第30天C，D，E，F組基本恢復正常。B組恢復程度較差，仍有腫脹。

3 討論

3．1 鎮痛作用

根據疼痛所表現出的行為反應，應用的疼痛模型主要有:熱刺激法(如熱板法)、機械刺激法、化學刺激法(如醋酸扭體試驗)、電刺激法等[11]。化學刺激法比較適用于篩選解熱鎮痛藥的鎮痛作用，機械刺激法、電刺激法及熱刺激法主要用于篩選麻醉性鎮痛藥[12]。疼痛所引起的情緒反應、行為反應、生理功能障礙，是許多疾病的癥狀[13]。

由表1可見，夏天無片與夏天無滴丸對冰醋酸誘發的小鼠扭體反應均有明顯的抑制作用，與陰性對照組比較具有顯著性差異(P＜0．05)；中劑量組與陽性對照組比較有顯著性差異(P＜0．05)；中劑量組灌胃給藥可顯著抑制醋酸誘導的扭體反應，且與陽性對照組比較，藥品服用量顯著減少。

由表2可見，給藥組對小鼠的痛閾值均有提高，鎮痛效果與陽性對照組相似；給藥組在給藥后15～60 min痛閾值沒有明顯變化，60 min后痛閾值略有提高，90 min后痛閾值下降。結果表明，夏天無滴丸具有提高小鼠痛閾值(熱刺激)的作用，但未表現出良好的量效關系。

3．2 抗炎作用

由表3所示，給藥組對二甲苯所致的小鼠耳腫脹具有明顯的抑制作用，并呈明顯的量效關系。

由表4所示，陽性對照組與陰性對照組之間比較有極顯著性差異(P＜0．01)；低劑量組與陽性對照組間比較有極顯著性差異(P＜0．01)；中劑量組與陰性對照組間比較有極顯著性差異(P＜0．01)；高劑量組與陽性對照組間比較有極顯著性差異(P＜0．01)。說明夏天無滴丸具有良好的抗炎作用[14]。

3．3 增強免疫

免疫是指機體接觸“抗原性異物”“異己成分”的一種特異性生理反應，是機體在進化的過程中獲得的“識別自身、排除異己”的一種重要生理功能[15]。在正常情況下，免疫反應通常對機體是有利的，但是在某些條件下（免疫異常）也可以是有害的，如注射異種動物血清引起的血清病，血型不符的輸血引起的輸血反應等。廣義的免疫應答包括非特異性和特異性的識別，并排除異己成分以維持自身穩定的過程。機體的非特異性免疫功能主要是吞噬細胞的吞噬作用(主要包括兩類吞噬細胞即中性粒細胞和巨噬細胞的作用)和自然殺傷細胞的作用。免疫應答多指抗原誘導的特異性免疫應答，主要是由淋巴細胞介導的韁胞免疫和體液免疫來完成。在生物繁衍過程中，吞噬是一種細胞功能，也是基本的防衛機制之一。人的血液中的吞噬細胞包括中性粒細胞和單核巨噬細胞兩類，由于它們能非特異性地吞噬多種抗原，對機體起防御和保護作用，故稱為非特異性免疫。巨噬細胞受抗原刺激后活化，使其吞噬功能增強，測定出它們的吞噬功能即反映了機體非特異性免疫功能的強弱。

由表5所示，夏天無滴丸各劑量對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞功能均有明顯的促進作用，作用呈一定的量效關系。中劑量組與陰性對照組之間的方差分析結果表明，中劑量組與陰性對照組之間有顯著性差異，各劑量組能顯著地提高小鼠巨噬細胞活性功能。

本試驗中，僅對佐劑型關節炎大鼠體質量、行為狀態、關節局部變化等外部特征做了觀察。若要進一步考察夏天無滴丸對風濕的治療作用，還應從病理形態學方面觀察風濕性關節炎大鼠關節皮下軟組織和滑膜炎癥的改變，須從分子水平作深入的研究[16]。

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Pharmacodynamical Study on Corydalis Decumbens Dropping Pills

Hu Jia,He Tao,Wang Chuang
(Jinzhou Institute for Drug Control,Jinzhou,Liaoning,China 121000)

Objective Tostudy the analgesicand anti－inflammatory effects of Corydalis Decumbens Dropping Pills．Methods Hot plate,acetic acid body turning,mouse ear swelling model,inflammatory granuloma hyperplasia in rats,mice macrophage cell consume chicken red blood cell tests were used．Results Corydalis Decumbens Dropping Pills had obvious inhibitory effect on the body torsion reaction induced by acetic acid;the pain threshold of mice was increased;had obvious inhibitory effect on the mouse ear swelling caused by xylene and showed clear dose－response relationship．All dose of Corydalis Decumbens Dropping Pills had obvious promoting effect on phagocytic function of macrophage and a certain dose－response relationship．Conclusion Corydalis Decumbens Dropping Pills has analgesic,anti－inflammatory effect and can improve immune function

Corydalis Decumbens Dropping Pills;analgesia;anti－inflammatory;immune;pharmacodynamical test

R285．5；R286

A

1006－4931(2016)23－0014－05

胡佳（1981－），女，碩士研究生，副主任中藥師，研究方向為中藥學，（電話）0416－2655924（電子信箱）hujia0424＠126．com。

2015－10－14；

2016－06－28)