大蒜素對TGF-β1誘導(dǎo)的胰腺癌細(xì)胞EMT的抑制作用及其機(jī)制

馬笛,賀川,魏媛,馬新宇,張忠良,鞏平

(石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，新疆石河子832000)

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大蒜素對TGF-β1誘導(dǎo)的胰腺癌細(xì)胞EMT的抑制作用及其機(jī)制

馬笛,賀川,魏媛,馬新宇,張忠良,鞏平

(石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，新疆石河子832000)

目的 探討大蒜素對TGF-β1誘導(dǎo)的胰腺癌細(xì)胞上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的抑制作用及機(jī)制。方法 常規(guī)培養(yǎng)胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1細(xì)胞，取對數(shù)生長期細(xì)胞，隨機(jī)分為大蒜素+TGF-β1組、大蒜素組、TGF-β1組及空白對照組，前三組分別以TGF-β110 ng/mL+大蒜素5 μg/mL、大蒜素5 μg/mL、TGF-β110 ng/mL處理PANC-1細(xì)胞，空白對照組不予干預(yù)。應(yīng)用MTT法檢測細(xì)胞增殖情況；劃痕試驗(yàn)、Transwell小室試驗(yàn)測定胰腺癌細(xì)胞的遷移、侵襲能力。RT-PCR法檢測各組E-Cadherin、Viminten及NF-κB表達(dá)。結(jié)果 MTT結(jié)果顯示大蒜素干預(yù)后胰腺癌細(xì)胞增殖受到抑制，24 h與48 h的IC50分別為69.44、100.90 μmol/L,呈時間和劑量依賴性；劃痕試驗(yàn)顯示空白對照組、大蒜素+TGF-β1組、大蒜素組及TGF-β1組8 h遷移率分別為0.56±0.11、0.10±0.07、0.09±0.05、0.61±0.23；24 h遷移率分別為1.00±0.00、0.74±0.20、0.40±0.05、1.00±0.00。Transwell小室試驗(yàn)顯示，空白對照組、大蒜素+TGF-β1組、大蒜素組及TGF-β1組的侵襲率分別為2.15±0.04、1.98±0.14、1.01±0.01、2.93±0.02，大蒜素組與其他三組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)；RT-PCR結(jié)果顯示，與空白對照組相比，TGF-β1組E-cadherin表達(dá)明顯下調(diào)(P均<0.05)，Vimentin表達(dá)則明顯上調(diào)(P均<0.05)。與TGF-β1組相比，大蒜素+TGF-β1組及大蒜素組E-candherin表達(dá)上調(diào)，Vimentin表達(dá)下調(diào)；同時，NF-κB的表達(dá)亦明顯下調(diào)(P均<0.05)。結(jié)論 大蒜素能阻斷TGF-β1誘導(dǎo)的胰腺癌EMT效應(yīng)，其可能通過抑制NF-κB信號通路抑制胰腺癌細(xì)胞發(fā)生EMT。

胰腺癌；大蒜素；上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化；核因子-κB

胰腺癌是高發(fā)病率和高病死率的惡性腫瘤之一,僅2014年就約有46 420新發(fā)病例和39 590例死亡病例[1]。眾所周知，胰腺癌具有侵襲性的原因之一是化療藥物的耐藥性[2]。晚期胰腺癌患者的標(biāo)準(zhǔn)化療方案是吉西他濱單藥或聯(lián)合其他化療藥物治療[3。4]，雖然化療和全身性治療對胰腺癌有一定療效，但5年生存率仍不達(dá)6%[1]。越來越多的證據(jù)表明，上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)在胰腺癌的發(fā)展中起重要作用[5]，在EMT過程中，上皮細(xì)胞獲得間質(zhì)表型，從而增強(qiáng)侵襲性和轉(zhuǎn)移性，同時，上皮細(xì)胞失去如E-cadherin的上皮標(biāo)記物表達(dá)，而細(xì)胞獲得間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物包括波形蛋白的高表達(dá)[6]，而TGF-β1可誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞發(fā)生EMT從而促進(jìn)其侵襲和轉(zhuǎn)移[7]。已有研究表明，多條通路均能誘導(dǎo)EMT，NF-κB通路就是其中重要的一條[8]，近年來研究發(fā)現(xiàn)大蒜素的抗瘤效應(yīng)與核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)信號通路密切相關(guān)[9]。2015年7月，我們觀察了EMT分子標(biāo)志物及NF-κB在胰腺癌細(xì)胞中的表達(dá)及細(xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移能力變化，探討大蒜素對NF-κB誘導(dǎo)的胰腺癌細(xì)胞EMT的抑制作用及機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料 人胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1(中國科學(xué)院細(xì)胞生物研究所)；大蒜素注射液(徐州萊恩藥業(yè)有限公司，0901241，2 mL：30 mg)；重組人TGF-β1(美國Peprotech公司，0614209)；DMEM高糖培養(yǎng)基(美國HyClone公司)；四季青胎牛血清(浙江天杭生物科技股份有限公司)；二甲基亞砜(上海國藥集團(tuán))；四甲基偶氮唑藍(lán)(北京鼎國生物技術(shù)有限責(zé)任公司)；胎牛血清(美國Gibco公司);Transwell試劑盒(Corning)；TRIzol試劑盒(上海普飛)。無菌超凈工作臺；英國 New Brunswick Galaxy 170S CO2培養(yǎng)箱；ZE122 熒光顯微鏡；湖南湘儀L420臺式低速自動平衡離心機(jī)；穩(wěn)壓電泳儀；RT-PCR儀器。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)及分組 人胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1于含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液中培養(yǎng)，于37 ℃、5%CO2飽和濕度條件下培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞70%～80%融合時用胰蛋白酶消化傳代，每3～4 d傳代1次，取對數(shù)生長期細(xì)胞，隨機(jī)分為大蒜素+TGF-β1組、大蒜素組、TGF-β1組及空白對照組。

1.3 細(xì)胞增殖抑制率測算 采用MTT法。將處于對數(shù)生長期的各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞胰酶消化，完全培養(yǎng)基重懸成細(xì)胞懸液，使細(xì)胞濃度為5×104/mL，將細(xì)胞接種到96孔板，每組3～5復(fù)孔，每孔100 μL，鋪好板后，置37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，吸棄培養(yǎng)液，大蒜素+TGF-β1組、大蒜素組、TGF-β1組分別以TGF-β110 ng/mL+大蒜素5 μg/mL、大蒜素5 μg/mL、TGF-β110 ng/mL處理PANC-1細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)組及空白對照組均加入不同濃度大蒜素的10%小牛血清RPMI1640培養(yǎng)液，濃度分別為1、2、5、10、20、50、100 μmol/L，置37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)12、48 h，培養(yǎng)終止前4 h加入5 mg/mL的MTT 10 μL；4 h后，吸棄培養(yǎng)液，每孔加入100 μL DMSO終止反應(yīng)。振蕩器振蕩5～10 min，酶標(biāo)儀490 nm處檢測OD值，計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率。細(xì)胞增殖抑制率=(1-實(shí)驗(yàn)組OD值/對照組OD值)×100%。

1.4 細(xì)胞遷移率測算 取對數(shù)生長期的人胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1經(jīng)胰酶消化后制成單細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度至2×106/mL，接種到6孔板中，每孔1 mL，置37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜。細(xì)胞完全貼壁鋪滿孔底，吸棄培養(yǎng)液，用黃色移液槍頭在6孔板的每孔中線劃出一道直痕，痕寬650～680 μm。分別以大蒜素5 μg/L+TGF-β110 ng/mL、大蒜素5 μg/L、 TGF-β110 ng/mL處理細(xì)胞，另設(shè)空白對照組。置37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。分別于0、8、24 h拍照。用倒置顯微鏡圖像處理軟件測量痕寬，計(jì)算各組細(xì)胞遷移率。

1.5 細(xì)胞侵襲能力檢測 于24孔Transwell小室濾膜上方每孔涂敷人工基底膜(Matrige)50 μL，置于37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱孵育5 h，使其形成凝膠狀。分別以大蒜素5 μg/L+TGF-β110 ng/mL、大蒜素5 μg/L、 TGF-β110 ng/mL作用胰腺癌PANC-1細(xì)胞 2 h 后，取1×104個細(xì)胞加入100 μL無血清RPMI1640培養(yǎng)基中，至上室，下層培養(yǎng)孔加 600 μL含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基，每組設(shè)5個復(fù)孔。培養(yǎng)24 h后取出濾膜，擦掉小室內(nèi)表面未穿過膜的細(xì)胞，固定后結(jié)晶紫染色，倒置顯微鏡下計(jì)數(shù)膜背面的細(xì)胞數(shù)，隨機(jī)計(jì)數(shù)20個視野，計(jì)算平均值，每組重復(fù)3次。

1.6 PANC-1細(xì)胞中E-cadherin、Vimentin及NF-κB mRNA表達(dá)檢測 采用RT-PCR法。將人胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1先用無血清培養(yǎng)基饑餓培養(yǎng)12 h，再分別以大蒜素5 μg/L+ TGF-β110 ng/mL、大蒜素5 μg/L、TGF-β110 ng/mL處理細(xì)胞，未用藥處理組為對照組。處理48 h后采用TRIzol試劑盒提取細(xì)胞總RNA，采用Nanpdrop 2000/2000C分光光度計(jì)分析測定所抽提RNA的濃度及質(zhì)量。再以Promega-M-MLV試劑盒將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,配制PCR反應(yīng)液，在RT-PCR儀器上按反應(yīng)條件進(jìn)行RT-PCR反應(yīng)，每組設(shè)3個復(fù)孔。設(shè)GAPDH為內(nèi)參，E-cadherin上游引物5′-AACGCATTGCCACATACA-3′,下游引物5′-C-GGGCTTGTT-GTCATTC-3′;Vimentin上游引物5′-AATGGCTCGTCACCTTCG-3′，下游引物5′-CTAGTTTCAACCGTCTTAAT-3′;NF-κB上游引物5′-GACTACGACC-TGAATGCTGTG-3′,下游引物5′-ACCTCAATGTCCTCTTTCTGC-3′;GAPDH上游引物5′-AGGATTTCGTTTCCGTTATGT-3′，下游引物5′-TGACTTCAACAGC-GACACCCA-3′。PCR反應(yīng)條件:95 ℃ 30 s,95 ℃ 5 s，60 ℃ 30 s，40個循環(huán)。將對照組mRNA表達(dá)量定為100%,以2-ΔΔCt法計(jì)算E-cadherin、Vimentin及NF-κB mRNA相對表達(dá)量,分析比較各組基因表達(dá)差異。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以表示，多組間差異比較用單因素方差分析，組間多重比較采用LSD法(方差齊)或Dunnett′s法(方差不齊)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大蒜素對人胰腺癌細(xì)胞PANC-1增殖的影響MTT結(jié)果顯示大蒜素作用于胰腺癌PANC-1細(xì)胞24、48h后，IC50分別為69.44、100.9μmol/L，呈時間和劑量依賴性(圖1)。

注：A為大蒜素作用24 h；B為大蒜素作用48 h。

2.2 大蒜素對人胰腺癌PANC-1細(xì)胞發(fā)生EMT后遷移能力的影響 空白對照組、大蒜素+TGF-β1組、大蒜素組及TGF-β1組8 h遷移率分別為0.56±0.11、0.10±0.07、0.09±0.05、0.61±0.23；24 h遷移率分別為1.00±0.00、0.74±0.20、0.40±0.05、1.00±0.00。給藥前各組PANC-1細(xì)胞的傷痕寬度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)，隨著時間推移，傷痕開始得到修復(fù)，8、24 h時，傷痕寬度逐漸變窄，與對照組相比，大蒜素+TGF-β1組和大蒜素組可顯著抑制劃痕的修復(fù)(P<0.05)，并呈一定時效關(guān)系。而TGF-β1組和空白對照組在24 h時已完全愈合(P>0.05)，表明大蒜素可抑制胰腺癌PANC-1細(xì)胞發(fā)生EMT后的遷移能力。

2.3 大蒜素對人胰腺癌PANC-1細(xì)胞發(fā)生EMT后侵襲能力的影響 小室實(shí)驗(yàn)顯示，空白對照組、大蒜素+TGF-β1組、大蒜素組及TGF-β1組的侵襲率分別為2.15±0.04、1.98±0.14、1.01±0.01、2.93±0.02。大蒜素組及大蒜素+TGF-β1組細(xì)胞的侵襲能力較對照組減弱，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)，大蒜素組及大蒜素+TGF-β1組細(xì)胞的侵襲能力較TGF-β1組明顯減弱，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。

2.4 大蒜素對人胰腺癌PANC-1細(xì)胞發(fā)生EMT后E-cadherin、Vimentin及NF-κB表達(dá)的影響 胰腺癌PANC-1細(xì)胞經(jīng)大蒜素及TGF-β1處理后，空白對照組、大蒜素+TGF-β1組、大蒜素組及TGF-β1組E-cadherin的mRNA相對表達(dá)量分別為1.00±0.30、0.53±0.05、2.59±0.32、0.29±0.04，而Vimentin mRNA相對表達(dá)量分別為1.00±0.09、1.39±0.04、0.69±0.08、2.42±0.22，NF-κB mRNA相對表達(dá)量分別為1.00±0.05、0.92±0.05、0.45±0.04、2.17±0.26。與對照組相比，TGF-β1組的E-cadherin表達(dá)下調(diào)，Vimentin及NF-κB表達(dá)上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)；大蒜素+TGF-β1組的E-cadherin及NF-κB表達(dá)下調(diào)，Vimentin表達(dá)上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而大蒜素組的E-cadherin表達(dá)明顯上調(diào)，Vimentin及NF-κB表達(dá)下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。此外，與TGF-β1組相比，大蒜素+TGF-β1組及大蒜素組的E-cadherin表達(dá)上調(diào)，而Vimentin及NF-κB表達(dá)明顯下調(diào)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。

3 討論

大蒜素為三硫代烯丙醚類化合物，天然存在于百合科植物大蒜的鱗莖中。大量研究表明，大蒜素的攝入能減少多種腫瘤的發(fā)生；而且大蒜素在體內(nèi)外對多種腫瘤包括肺癌、肝癌、結(jié)腸癌、食管癌、胃癌、前列腺癌及血液系統(tǒng)腫瘤等均有抗腫瘤作用[10]。但有關(guān)大蒜素對胰腺癌的作用機(jī)制研究卻鮮有報(bào)道。本研究通過MTT檢測發(fā)現(xiàn)大蒜素可抑制胰腺癌PANC-1細(xì)胞的增殖，并隨著作用時間延長，大蒜素對PANC-1細(xì)胞的增殖抑制率升高，并呈一定的劑量依賴性；此與文獻(xiàn)[11]報(bào)道基本一致。

EMT是指細(xì)胞失去上皮特性向間充質(zhì)轉(zhuǎn)變的過程。研究證明，EMT與腫瘤的遷移、轉(zhuǎn)移和侵襲密切相關(guān)，有研究發(fā)現(xiàn)大蒜素對人腦膠質(zhì)瘤[12]、肺癌[13]、結(jié)腸癌[13]等腫瘤細(xì)胞的侵襲及轉(zhuǎn)移有明顯抑制作用。本研究通過Transwell和劃痕試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，TGF-β1誘導(dǎo)胰腺癌PANC-1細(xì)胞發(fā)生EMT后，在大蒜素的干擾下，其侵襲及轉(zhuǎn)移能力明顯減弱；提示大蒜素可抑制胰腺癌細(xì)胞發(fā)生EMT，從而影響其侵襲和轉(zhuǎn)移能力。

上皮標(biāo)志蛋白E-cadherin是腫瘤細(xì)胞EMT過程中最重要的標(biāo)志蛋白，其表達(dá)缺失伴隨上皮細(xì)胞表型的喪失，使細(xì)胞黏附能力下降，易于脫落發(fā)生轉(zhuǎn)移，而間質(zhì)標(biāo)志蛋白Vimentin表達(dá)升高使得細(xì)胞易于發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移。Tsuji等[14]研究認(rèn)為E-cadherin表達(dá)缺失與再表達(dá)不是取決于不可逆轉(zhuǎn)的基因缺失或突變，調(diào)節(jié)其表達(dá)的機(jī)制是可逆的。因此，抑制EMT的發(fā)生對腫瘤轉(zhuǎn)移與浸潤有重要意義。

NF-κB是一種重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，在刺激因素作用下，胞質(zhì)中的抑制蛋白IκB發(fā)生磷酸化降解，解除了對NF-κB的抑制，釋放其進(jìn)入核內(nèi)參與調(diào)節(jié)多種基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)，使其在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。扈啟寬等[15]研究發(fā)現(xiàn)大蒜素能降低胃癌細(xì)胞的NF-κB活性，使NF-κB結(jié)合DNA的活性降低，導(dǎo)致某些基因表達(dá)水平改變。Wang等[16]發(fā)現(xiàn)，NF-κB表達(dá)下調(diào)，則會出現(xiàn)EMT現(xiàn)象，同時降低了癌細(xì)胞的侵襲能力。本研究發(fā)現(xiàn)，與空白對照組相比，TGF-β1組的E-cadherin表達(dá)下調(diào)、Vimentin表達(dá)上調(diào)，同時NF-κB表達(dá)上調(diào)；而與TGF-β1組相比，大蒜素+TGF-β1組及大蒜素組E-cadherin表達(dá)上調(diào)、Vimentin表達(dá)下調(diào)，同時NF-κB表達(dá)明顯下調(diào)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。上述結(jié)果表明，大蒜素可能通過調(diào)節(jié)NF-κB信號通路發(fā)揮其對胰腺癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的抑制作用。

綜上所述，大蒜素能抑制TGF-β1誘導(dǎo)的胰腺癌細(xì)胞發(fā)生EMT，這種作用可能通過調(diào)節(jié)NF-κB信號通路實(shí)現(xiàn)。

[1] Siegel R, Ma J, Zou Z, et al. Cancer statistics 2014[J].CA Cancer J Clin, 2014,64(1):9-29.

[2] Paulson AS, Tran Cao HS, Tempero MA, et al.Therapeutic advances in pancreatic cancer[J]. Gastroenterology, 2013,144(6):1316-1326.

[3] Oettle H. Progress in the knowledge and treatment of advanced pancreatic cancer: From benchside to bedside[J].Cancer Treat Rev, 2014,40(9):1039-1047.

[4] de Sousa Cavalcante L, Monteiro G. Gemcitabine:Metabolism and molecular mechanisms of action, sensitivity and chemoresistance in pancreatic cancer[J]. Eur J Pharmacol, 2014,741(10):8-16.

[5] Castellanos JA, Merchant NB, Nagathihalli NS. Emerging targets in pancreatic cancer: epithelial-mesenchymal transition and cancer stem cells[J]. Oncol Targets Ther, 2013,6(9):1261-1267.

[6] Lamouille S, Xu J, Derynck R. Molecular mechanisms of epithelial-mesenchymal transition[J]. Nat Rev Mol Cell Biol, 2014,15(3):178-196.

[7] Zhu L, Qin H, Li PY, et al. Response gene to complement-32 enhances metastatic phenotype by mediating trans-forming growth factor beta-induced epithelial-mes-enchymal transition in human pancreatic cancer cell line BxPC-3[J]. J Exp Clin Cancer Res, 2012,31(1):29.

[8] 陳曉敏，郭俊明，樂東海，等.上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化：腫瘤轉(zhuǎn)移的重要調(diào)控機(jī)制[J].中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào)，2013,35(9):1367-1375.

[9] 孔春芳，丁江華.大蒜素抗癌作用與信號傳導(dǎo)通路[J].重慶醫(yī)學(xué)，2013，42(10)：1175-1177.

[10] Casella S，Leonardi M，Melai B，et al. The role of disllyl sulfides and dipropyl sulfides in the In vitro antimicrobial activity of the essential oil of garlic，allium sativum L，and leek，allium porrumL[J]. Phytother Res， 2013，27(3)：380-383.

[11] 王保才，張炳太，林鎮(zhèn)海.大蒜素對人胰腺癌PANC-1細(xì)胞株的作用及機(jī)制的研究[J].中國醫(yī)藥與臨床，2011，11(7)：793.

[12] 王科文，王戰(zhàn)營，王旭東，等.大蒜素對人腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞侵襲與遷移的影響及其機(jī)制探討[J].山東醫(yī)藥，2013，53(42)：35-37.

[13] 夏磊，周玲，崔淑香,等.大蒜素誘導(dǎo)胃腫瘤細(xì)胞凋亡機(jī)制的探討[J].中華腫瘤防治雜志，2010,17(16)：1266-1269.

[14] Tsuji T, Ibaragi S, Hu GF. Epithelial-mesenchymal transition and cell cooperativity in metastasis[J]. Cancer Res, 2009,69(18):7135-7139.

[15] 扈啟寬，李文梅，趙喜榮,等.大蒜素對胃癌NF-KB活性的影響[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)，2002,18(1):7-10.

[16] Wang Z, Li Y, Kong D, et al. Acquisition of epithelial-mesenchymal transition phenotype of gemcitabine-resistant pancreatic cancer cells is linked with activation of the notch signaling pathway[J]. Cancer Res, 2009,69(6):2400-2407.

Inhibitory effect of allicin on TGF-β1-induced EMT of pancreatic cancer cells

MADi,HEChuan,WEIYuan,MAXinyu,ZHANGZhongliang,GONGPing

(TheFirstAffiliatedHospitalofShiheziUniversity,Shihezi832000,China)

Objective To investigate the inhibitory effects of allicin on TGF-β1-induced epithelium mesenchymal transition (EMT) of pancreatic cancer cells and its mechanism.Methods The pancreatic cancer cell line PANC-1 in logarithmic growth phase were routinely cultured and then were randomly divided into allicin+TGF-β1group, allicin group, TGF-β1group and the control group. The PANC-1 cells in the former three groups were respectively treated with 10 ng/mL TGF-β1+ 5 μg/mL allicin, 5 μg/mL allicin, and 10 ng/mL TGF-β1, and the control group without any treatment. MTT assay was used to detect cell proliferation; scratch test, Transwell chamber experiment were used to measure the migration and invasion of pancreatic cancer cell, and RT-PCR was applied to detect the E-Cadherin, Viminten and NF-κB expression.Results MTT showed that after allicin intervention, the cell proliferation of pancreatic cancer was inhibited, IC50at 24 and 48 h was 69.44, and 100.9 μmol/L, which was in a time- and dose-dependent manner. The scratch test showed the migration rates at 8 h of the control group, allicin + TGF-β1group, allicin group and TGF-β1group were 0.56±0.11, 0.10±0.07, 0.09±0.05, and 0.61±0.23; at 24 h , they were 1.00±0.00, 0.74±0.20, 0.40±0.05, and 1.00±0.00. Transwell chamber experiment showed the invasion rates of the control group, allicin + TGF-β1group, allicin group and TGF-β1group were 2.15±0.04, 1.98±0.14, 1.01±0.01 and 2.93±0.02, and statistically significant difference was found between allicin group and the other three groups (allP<0.05). The RT-PCR showed that compared with the control group, E-cadherin expression was significantly decreased, and Vimentin expression was significantly increased in the TGF-β1group (allP<0.05). Compared with TGF-β1group, the E-candherin was up-regulated, Vimentin was down-regulated and the NF-κB expression was also down-regulated in the allicin + TGF-β1group and allicin group (allP<0.05). Conclusion Allicin has a blocking effect on TGF-β1-induced EMT of pancreatic cancer, which can inhibit the EMT of pancreatic cancer cells by regulating NF-κB signaling pathway.

pancreatic carcinoma; allicin; epithelial mesenchymal transition; nuclear factor-κB

上海市胰腺疾病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放課題(PC-2013-02)。

馬笛(1990-)，女，碩士研究生，主要研究方向?yàn)槟[瘤的綜合治療。 E-mail:591417144@qq.com

簡介：鞏平(1964-)，女，教授，主任醫(yī)師，博士生導(dǎo)師，主要研究方向?yàn)槟[瘤的綜合治療。E-mail:18999536479@163.com

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.41.005

R735.9

A

1002-266X(2016)41-0018-04

2016-02-20)