一株油菜根際促生菌的產芽孢發酵條件優化

楊 蓉，古孜亞，詹發強，侯 敏，龍宣杞

（1.新疆農科院微生物應用研究所，烏魯木齊 830091；2.新疆大學生命科學與技術學院，烏魯木齊 830052）

一株油菜根際促生菌的產芽孢發酵條件優化

楊 蓉1，古孜亞2，詹發強1，侯 敏1，龍宣杞1

（1.新疆農科院微生物應用研究所，烏魯木齊 830091；2.新疆大學生命科學與技術學院，烏魯木齊 830052）

【目的】提高從油菜根際分離篩選得到的促生菌蠟狀芽孢桿菌（Bacillus cereus）QZB24－6的芽孢數量和芽孢產率，為進一步該苗株在復合生物肥中的應用打下基礎。【方法】采用單因素和正交試驗，研究不同的氮源、碳源、pH、溫度、培養時間對蠟狀芽孢桿菌形成芽孢的影響。【結果】確定蠟狀芽孢桿菌產芽孢培養基的最佳組分為（g／L）：乳糖2%、酵母膏1.5%、硫酸錳0.07%、磷酸氫二鈉0.4%、磷酸二氫鈉0.2%。對發酵條件進行了研究，溫度35℃、pH值7.0、接種量4%、裝液量100mL、轉速為180 r／min下發酵72 h。【結論】通過優化培養基組分和培養基條件，最終發酵液中活菌數、芽孢數、芽孢產率分別為2.27×108cfu／mL、2.05× 108cfu／mL、90.31%。

油菜；蠟狀芽孢桿菌；發酵；優化；芽孢產率

0 引 言

【研究意義】芽孢（endospore）是產芽孢菌在生長發育后期在細胞內形成的圓形或橢圓形、厚壁、含水量低、抗逆性強的休眠構造。芽孢沒有新陳代謝，能經受多種環境傷害，包括熱、紫外線、多種溶劑、酸、堿等，這一特征使芽孢桿菌具有非常良好的應用前景，對于提高菌劑的倉儲期、維持菌劑生物活性非常重要［1］，是制備微生物制劑的理想存在形式。【前人研究進展】陳波等［2］和馬海林等［3］分別從櫻桃和冬棗根際土壤中篩選出具有較大應用潛力的PGPR，并通過盆栽試驗證實，篩選的PGPR具有較好的促生作用。作為微生態制劑中的拮抗菌劑，在生產處理過程中或外界環境影響下，要保持較高的活性和穩定性。因此，形成芽孢是評價拮抗細菌極為重要的指標［4－5］。甄靜等［6］采用單因素和正交試驗的方法，研究不同的氮源、碳源、無機鹽、pH、溫度、培養時間、接種量對枯草芽孢桿菌 XK－1形成芽孢的影響，經優化后，該菌株的產芽孢率達96%。郭夏麗等［7］采用分批培養法研究了營養條件、初始pH值、溶氧量對其生孢的影響，確定最佳培養基，產芽孢率可達82.9%。【本研究切入點】目前，對芽孢桿菌抑制真菌病害的報道越來越多，微生物菌劑肥料成為生物防治的研究熱點之一。高效穩定的微生物菌劑成為研制復合菌劑的新趨勢。菌體產生的芽孢通過現代發酵工程技術可以制作成生物肥料、接種劑、接種液等形式在農業生產中應用。芽孢桿菌對植物起有效作用又影響菌劑應用效果的就是其產生的芽孢及芽孢含量。研究芽孢桿菌的發酵培養基及條件。【擬解決的關鍵問題】以自行分離篩選的QZB24－6菌株為研究對象，QZB24－6菌株初步鑒定為蠟狀芽孢桿菌（Bacillus cereus），是一種好氧和兼性厭氧、能產生抗逆抗旱耐熱的芽孢，對其搖瓶發酵培養基及發酵條件進行優化，使芽孢產率最大化，為其規模化發酵生產提供芽孢桿菌在其生長期能產生一種休眠狀態、具有抗逆抗旱能力的內生孢子。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 菌種

從油菜主栽品種青雜2號根際土壤中分離的根際促生菌QZB24－6，經過初篩復篩鑒定得出QZB24－6為蠟狀芽孢桿菌（Bacillus cereus）。

1.1.2 試劑

蔗糖、玉米粉、麥芽浸粉、乳糖、可溶性淀粉、葡萄糖、蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、豆餅粉、硫酸銨、尿素、氯化鈣、硫酸錳、磷酸氫二鉀、碳酸鈣、硫酸鋅、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、瓊脂、NaCl、MgSO4·7H20等購自天津市天新精細化工開發中心。

1.1.3 儀器

高壓蒸汽滅菌鍋MLS－3020（新的醫療器械有限公司），紫外分光光度計UV－2550（日本島津自動化設備有限公司），搖床ZHWY－100D（上海智城儀器制造有限公司），MLS－3020高壓蒸汽滅菌鍋（新德醫療器械有限公司），DK－8D電熱恒溫水槽（上海精宏實驗設備有限公司）：PHs－3C酸度計（上海雷磁儀器廠），AEL_160島津電子天平（日本島津自動化設備有限公司），搖床ZHWY－100D（上海智城儀器制造有限公司），電熱恒溫培養箱DHP－9162（上海－恒科學儀器有限公司）

1.1.4 培養基

蛋白胨牛肉膏（LB）培養基：蛋白胨 1.0%，牛肉膏0.3%，氯化鈉0.5%，瓊脂2%，pH 7.2～7.4。

種子培養基：蛋白胨1.0%，牛肉膏0.3%，氯化鈉0.5%，pH 7.2～7.4。

基礎發酵培養基：葡萄糖2%，蛋白胨1%，磷酸氫二鈉 0.4%，磷酸二氫鈉0.2%，硫酸鎂0.05%，氯化鈣0.02%，pH 7.0。

1.2 方 法

1.2.1 菌種活化

將保存好的菌株QZB24－6進行活化，然后接種于LB斜面培養基上，放入 30℃恒溫培養箱里培養24 h，備用。

1.2.2 種子液的制備

取一環活化菌種，接入裝有200mL種子培養基的500mL三角瓶中，120 r／min、30℃恒溫培養。

1.2.3 生長曲線的測定

將QZB24－6菌株在平板上活化以后，挑單菌落接入200mL裝有種子培養基的三角瓶（500mL）中，160 r／min、30℃恒溫振蕩培養。培養24 h，每隔 2 h從發酵液中取樣在600 nm下測OD值，繪制生長曲線。

1.2.4 發酵培養基成分單因素試驗

1.2.4.1 最佳碳源篩選

選取蔗糖、玉米粉、麥芽浸粉、乳糖、可溶性淀粉為碳源替代基礎發酵培養基中的碳源；將培養12 h的種子液以2%的接種量接于發酵培養基中，規格為500mL的三角瓶里裝液量為 200mL，120 r／min、30℃振蕩培養 48 h。以發酵活菌數、芽孢數及芽孢產率為檢測指標，確定最佳碳源。

1.2.4.2 最佳氮源篩選

選取豆餅粉、硫酸銨、酵母膏、牛肉膏、尿素為氮源替代基礎發酵培養基中的氮源；將培養 12 h的種子液以 2%的接種量接于發酵培養基中，采用搖瓶發酵培養條件，搖床30℃，48 h，120 r／min震蕩培養。測定發酵活菌數和芽孢數，計算芽孢產率，以確定最佳氮源。

1.2.4.3 無機鹽篩選

選取硫酸錳、磷酸氫二鉀、碳酸鈣、硫酸鋅為無機鹽替代基礎發酵培養基中的無機鹽；將培養12 h的種子液以2%的接種量接于發酵培養基中，采用搖瓶發酵培養條件，搖床 30℃，48 h，120 r／min震蕩培養。測定發酵活菌數和芽孢數，計算芽孢產率，以確定最適無機鹽。將綜合單因素試驗結果用于條件優化試驗。

1.2.5 正交試驗設計

在蠟狀芽孢桿菌QZB24－6基礎發酵培養基的基礎上，采用單因子試驗選取最適的碳源、氮源、無機鹽，綜合單因素試驗結果，然后按不同配方進行正交試驗，從而研究碳源、氮源和無機鹽濃度對該芽孢桿菌的芽孢形成量的影響。用正交助手軟件 L9（33）的3因素3水平的正交表進行正交試驗，并對結果進行發差分析。

1.2.6 搖瓶發酵條件優化

1.2.6.1 溫度

發酵溫度分別在30、32、35、37、40℃的不同溫度下的搖床（轉速160 r／min，接種量2%，500mL三角瓶里裝200mL，pH 7）中振蕩培養，從發酵液中取樣，測定活菌數、芽孢數及芽孢產率，分析得出最適宜的培養溫度，并用于下面的單因素試驗。

1.2.6.2pH

采用2 mol／L鹽酸或3 mol／L NaOH調節培養基pH值，使得初始pH值為6.0、6.5、7.0、7.5、8.0，搖床振蕩培養（轉速160 r／min，接種量2%，500mL三角瓶里裝200mL），從發酵液中取樣，測定活菌數、芽孢數及芽孢產率，分析得出最適宜的初始pH值，并用于下面的單因素試驗。

1.2.6.3 時間

在最優培養基pH值和發酵溫度下，在搖床（轉速160 r／min，接種量2%，500mL三角瓶里裝200mL）中分別振蕩培養24、36、48、60、72 h，從發酵液中取樣，測定活菌數、芽孢數及芽孢產率，分析得出最適宜的培養時間，并用于下面的單因素試驗。

在最佳發酵時間和溫度條件下，分別按 2%、4%、6%、8%、10%的接種量，在搖床（轉速160 r／min）中振蕩培養，從發酵液中取樣，測定活菌數、芽孢數及芽孢產率，分析得出最適宜的接種量，并用于下面的單因素試驗。

1.2.6.5 通氣量

在500mL三角瓶里分別裝 50、100、150、200、250mL發酵液，在最佳發酵溫度、時間、接種量的條件下培養，測定活菌數、芽孢數及芽孢產率，從而得出最佳的通氣量。

1.2.6.6 轉速

將搖床振蕩速度分別設定在 120、140、160、180、200 r／min，在最佳發酵溫度、時間、接種量、通氣量條件下振蕩培養，從發酵液中取樣，測定活菌數、芽孢數及芽孢產率，分析得出最佳的發酵轉速。

1.2.7 芽孢產率測定

1.2.7.1 活菌總數

比如寶寶在孕16周時，體重約120克，而很多孕婦這時可能由于妊娠反應重，體重不增反降，其實這沒關系，媽媽的體內營養儲備足以應付這樣的反應，因為寶寶這時對營養要求不高，所以孕媽媽這時體重不長，甚至下降都沒問題。反之，如果這時孕媽媽體重增加了3～5千克，而寶寶才120克，這些體重都長在什么地方了呢？其實是孕媽媽自己變胖了，是多余的營養素轉變成脂肪儲存在體內了。當然這可能會為將來母乳喂養儲存營養，但問題是16周后隨著妊娠反應的消退，孕媽媽的胃口會越來越好，逐漸進入孕期的“蜜月期”，這時如果孕媽媽不及時控制體重，還是一味高歌猛進，就有可能誘發孕期一系列的并發癥。

活菌總數測定計數采用平板計數法［1］

1.2.7.2 芽孢數

先將發酵液在 80℃的水浴條件下加熱 15 min，然后利用稀釋平板菌落計數法來進行芽孢數的測定。

1.2.7.3 芽孢產率

芽孢產率＝芽孢數／活菌總數×100%。

2 結果與分析

2.1QZB24－6的生長曲線

研究表明，0～6 h QZB24－6的數量緩慢增加，6 h之后，隨著培養時間的延長，菌株迅速繁殖，總菌數也增多，到14 h后進入穩定期，菌體數量變化緩慢。試驗確定菌齡為 12 h的培養液作為種子液，這時的菌液濃度高，細胞生命活動力強，種子繁殖處于最旺盛期。圖1

圖1 菌株QZB24－6生長曲線Fig．1 Growth curve of QZB24－6

2.2 碳源

將基礎發酵培養基中的碳源分別用 2%的葡萄糖、蔗糖、乳糖、可溶性淀粉、尿素、麥芽浸粉來替換制備發酵培養基，不加碳源的設為對照，搖床培養（30℃，160 r／min）48 h后，發酵液中的活菌及芽孢數用稀釋平板計數法進行測定。結果表明，對QZB24－6生長情況效果好的碳源是乳糖，葡萄糖和蔗糖次之；可溶性淀粉對發酵液菌株芽孢形成量的影響比對照差。計算芽孢產率乳糖、蔗糖、葡萄糖等三種糖類對菌株活菌數的及芽孢的形成量的影響都良好，最終的芽孢產率均處于同一水平。圖2，圖3

圖2 不同碳源下菌株QZB24－6活菌數與芽孢形成量變化Fig．2 The influences of different carbon sources on viable count and sporulation of QZB24－6

圖3 不同碳源下菌株QZB24－6芽孢產率變化Fig．3 The influences of different carbon sources on spore－forming of QZB24－6

2.3 氮源篩選

在基礎發酵培養基的基礎上，把氮源分別用1%的牛肉膏、酵母膏、豆餅粉、硫酸銨、蛋白胨、尿素來替換，制備發酵培養基，不加碳源的設為對照，搖床培養（30℃，160 r／min）48 h后，發酵液中的活菌及芽孢數由稀釋平板計數法進行測定。在這6種氮源里，對QZB24－6生長情況最好的氮源是酵母膏，次之為牛肉膏和蛋白胨，尿素的芽孢形成數與活菌數最差。計算芽孢產率酵母膏對菌株活菌數的及芽孢的形成量的影響良好，最終的芽孢產率顯著高于其他氮源。圖4，圖5

圖4 不同氮源下菌株QZB24－6活菌數與芽孢形成量變化Fig．4 The influences of different nitrogen on viable count and sporulation of QZB24－6

圖5 不同氮源下菌株QZB24－6芽孢產率變化Fig．5 The influences of different nitrogen sources on spore－forming of QZB24－6

2.4 無機鹽篩選

在基礎發酵培養基的基礎上，把無機鹽分別用0.05%的磷酸氫二鉀、硫酸鎂、硫酸錳、硫酸鋅、氯化鈣、碳酸鈣來代替，制備發酵培養基，不加碳源的設為對照，搖床培養（30℃，160 r／min）48 h后，由稀釋平板計數法來測定發酵液中的活菌及芽孢數。在這6種無機鹽里，對QZB24－6生長情況最好的無機鹽是硫酸錳，次之為硫酸鋅和硫酸鎂；氯化鈣對發酵液中菌株芽孢形成數與活菌數的影響，比對照還低。圖6，圖7

圖6 不同無機鹽下菌株QZB24－6活菌數與芽孢形成量變化Fig．6 The influences of different mineral salt on viable count and sporulation of QZB24－6

圖7 不同無機鹽下菌株QZB24－6芽孢產率變化Fig．7 The influences of different mineral salt on spore－forming of QZB24－6

2.5 發酵培養基成分正交試驗優化

通過對碳源、氮源及無機鹽進行單因素試驗，最終選取乳糖、酵母膏、硫酸錳為QZB24－6的最佳的碳源、氮源及無機鹽。為了知道各培養基成分之間的關系，對這三個因素進行 L9（33）的正交試驗，列出各因素水平設計。表1

將乳糖、酵母膏、硫酸錳作為培養基的三個因素，進行的L9（33）的正交試驗結果及各因素指標為2%乳糖、1.5%酵母膏和0.07%的硫酸錳為菌株QZB24－6的最適宜的發酵培養基成分配方。從R值可以得出，影響菌株QZB24－6的芽孢產率的主要因素依次為乳糖＞酵母膏＞硫酸錳。各因素的最佳水平為A2B2C3，在該條件下，菌株QZB24－6的最高芽孢產率可達到83.58%。表2

表1 發酵培養基正交試驗因素水平Table 1 Factor and level of orthogonal experiment on fermentation medium

表2 菌株QZB24－6的發酵培養基優化正交試驗設計及結果Table 2 The results from the orthogonal test for optimized composition of the ferment medium by QZB24－6

2.6 搖瓶發酵條件

2.6.1 溫度

研究表明，在pH 7.0，160 r／min條件下培養48 h，對菌株QZB24－6的生長溫度進行試驗，選出最適宜的溫度。結果表明，在 30～35℃內，發酵液中活菌數及芽孢形成量隨著溫度的增高而增大，35～37℃內處于相當平穩的狀態，然后隨著溫度增高活菌數及芽孢形成量就慢慢降低。在32℃時菌株芽孢產率最高，達到 0.84×108cfu／mL；而這時的活菌數及芽孢產率低。因此，按芽孢數為標準選取35℃為菌株QZB24－6的最適宜生長溫度。圖8

圖8 不同溫度下菌株QZB24－6的芽孢產率變化Fig．8 The influences of temperature on spore－forming Bacillus velezensisQZB24－6

2.6.2pH

發酵培養基成分的離子化程度是由發酵培養基的pH值來決定的，它影響著菌株是否有效吸收利用培養基里各種營養物質，影響其細胞中的代謝酶，從而決定菌株的正常生長、繁殖。因此，將發酵培養基的pH值分別調到6、6.5、7、7.5、8，搖床培養（30℃、160 r／min）48 h后，測定發酵液活菌數、芽孢數及芽孢產率。研究表明，在pH 6～7芽孢產率處于相當穩定點狀態，pH 6～7活菌數及芽孢數明顯增加，在pH 7～8時，發酵液活菌數和芽孢數都開始下降。pH 7時芽孢數和芽孢產率分別達到1.14×108cfu／mL、85.07%。因此，確定最適pH值為7。圖9

圖9 不同pH下菌株QZB24－6芽孢產率變化Fig．9 The influences of pHon spore－forming of QZB24－6

2.6.3 時間

時間對細菌繁殖和芽孢的形成量影響很大。不同發酵時間對QZB24－6菌株的芽孢形成量的影響，研究表明，發酵時間在24 h時，該菌株活菌數和芽孢數的形成量較低，芽孢產率也較低；從36～48 h活菌數和芽孢數的增加緩慢，在24～36 h芽孢產率迅速增加；從48～72h活菌數和芽孢數迅速增加，可芽孢產率緩慢增加。到72 h活菌數和芽孢數分別達到2.76×108cfu／mL、2.38× 108cfu／mL。因此，選72 h為該QZB24－6菌株的最適發酵時間。圖10

圖10 不同時間下菌株QZB24－6的芽孢產率變化Fig．10 The influences of time on spore－forming of QZB24－6

2.6.4 接種量

接種量對該QZB24－6菌株活菌數和芽孢形成量的影響，結果表明，接種量為2%時活菌數和芽孢形成量較低，2%～4%時活菌數的形成量不大，而芽孢形成量多，分別達2.89×108cfu／mL、2.47×108cfu／mL，接種量多于4%時，發酵液中的活菌數和芽孢數的形成量逐漸降低。因此，確定最適接種量為4%。圖11

圖11 不同接種量下菌株QZB24－6芽孢產率變化Fig．11 The influences of inoculum sizeon spore－forming of QZB24－6

2.6.5 裝液量

裝液量對該QZB24－6菌株活菌數和芽孢形成量的影響，研究表明，用500mL的三角瓶進行搖瓶發酵裝液量研究，裝液量為50mL時發酵液中活菌數和芽孢形成量較高，分別2.49×108cfu／mL、1.87×108cfu／mL；裝液量為100mL時活菌數及芽孢形成量達到最大值2.29×108cfu／mL，芽孢產率也較高，89.6%；隨著裝液量的增加活菌數緩慢增加，但影響芽孢的形成量。因此，選擇發酵培養基裝液量為100mL。圖12

圖12 不同裝液量下菌株QZB24－6芽孢產率變化Fig．12 The influences of culture volumeon spore－forming of QZB24－6

2.6.6 轉速

轉速對QZB24－6菌株活菌數和芽孢形成量的影響結果表明，轉速在 120～180 r／min活菌數和芽孢形成量及芽孢產率逐漸增加到最高值，分別達2.27×108cfu／mL、2.05×108cfu／mL、90.31%，過了180 r／min后活菌數和芽孢形成量就慢慢降低。芽孢產率隨著轉速的加大處于穩定的狀態。因此，選擇 180 r／min為蠟狀芽孢桿菌QZB24－6的最適發酵轉速。圖13

圖13 不同轉速下菌株QZB24－6芽孢產率變化Fig．13 The influences of rotate speed spore－forming of QZB24－6

3 討 論

以篩選出的對油菜具有促生作用的優良菌株QZB24－6為研究對象，以提高對其芽孢產率為目的，采用單因素和正交試驗的方法對其發酵培養基進行優化，確定乳糖2%、酵母膏1.5%、硫酸錳0.07%、磷酸氫二鈉0.4%、磷酸二氫鈉0.2%為QZB24－6的發酵培養基，繼而確定該菌株發酵條件為：溫度35℃、pH值7.0、接種量4%、裝液量100mL、轉速為180 r／min下發酵72 h；最終發酵液中活菌數、芽孢數、芽孢產率分別為2.27× 108cfu／mL、2.05×108cfu／mL、90.31%。

芽孢桿菌是能產生抗逆性芽孢的細菌［8］，在農業生產中作為生物肥料來應用，具有誘導植物抗病性、拮抗等作用，它通過產生一些抗菌物質來降低酵母、真菌、病毒等的生物活性［9］。因此，對所篩選出的芽孢桿菌進行發酵工藝的研究研制成一種生物肥料是很必要的。菌體的細胞質濃縮脫水后，形成一種具有抗逆作用的形狀近似球形或者橢圓形的休眠體就是芽孢。細菌形成的芽孢能夠讓它在重新變為營養太細胞。發酵培養基中的各成分（碳源、氮源、無機鹽及微量元素）對細菌芽孢的形成量的影響很大，而且發酵溫度、時間、通氣量、接種量、轉速等也是影響細菌芽孢形成的重要因素。對發酵培養基單因素試驗中可知，糖類作為碳源，提高芽孢桿菌芽孢形成量；酵母膏和牛肉膏也能促進芽孢的形成量；從無機鹽對QZB24－6菌株生長和芽孢形成量的影響來看，Mn2＋和 Mg2＋起到促進芽孢形成的作用，是芽孢桿菌產生大量芽孢的最適無機鹽。Mn2＋加入量的增加會導致芽孢產量的降低［10］，Mn2＋加入量不能大于0.07%，不然會抑制菌體芽孢的形成，試驗通過對發酵培養成分進行優化，最終確定Mn2＋加入量為 0.07%時QZB24－6菌株的芽孢形成量達到最大值。

4 結 論

4.1 以篩選出的對油菜具有促生作用的優良菌株QZB24－6為研究對象，以提高對其芽孢產率為目的，采用單因素和正交試驗的方法對其發酵培養基進行優化，最終確定乳糖 2%、酵母膏1.5%、硫酸錳0.07%、磷酸氫二鈉0.4%、磷酸二氫鈉0.2%為QZB24－6的發酵培養基。

4.2 對發酵條件進行了研究，該菌株產芽孢最適發酵溫度35℃、pH 7.0、接種量4%、裝液量100mL、180 r／min，發酵周期72 h。

4.3 通過優化培養基組分和培養基條件，蠟狀芽孢桿菌QZB24－6發酵液中活菌數達到2.27× 108cfu／mL、芽孢數 2.05×108cfu／mL、芽孢產率為90.31%。

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Optimization of Fermentation Conditions for the Production of Spore Producing Bacteria from Rhizosphere of Rape

YANG Rong1，Guziya2，ZHAN Faqiang1，Hou Min1，Long Xuanqi1
（1．Research Institute of Applied Microbiology，Xinjiang Academy of Agricultural Sciences，Urumqi 830091，China；2．College of Life Science and Technology，Xinjiang University，Urumqi 830046，China）

【Objective】In order to improve the spore production rate and spore quantity of（Bacillus cereus）QZB24－6 against Fusarium wilt.【Method】The medium composition for the production of Bacillus cereus QZB24－6 spores was optimized by using the single factor and orthogonal tests.Various factors，such as carbon sources，nitrogen sources initial pH，temperature and fermentation time were investigated.【Result】The results showed that the optimum medium was as follows（g／L）：milk sugar 2%，yeast extract 1.5%，MnSO40.07%，Na2HPO40.4%，NaH2PO40.2%.The optimum culture conditions were as follows：temperature 35℃，pH 7.0 in inoculum size 4%，liquid measure 100mL，rotate speed 180 r／min，fermentation time 72 h.【Conclusion】By optimizing the culture medium composition and culture conditions，the number of viable bacteria in the final fermentation broth，the number of spores，and the yield were 2.27×108cfu／mL，2.05×108cfu／mL and 90.31%，respectively.It laid the foundation for the application of Bacillus cereus QZB24－6 as a kind of microbial fertilizer.

rape；Bacillus cereus；fermentation；optimization；spore

S188＋.2

A

1001－4330（2016）09－1700－08

10.6048／j.issn.1001－4330.2016.09.018

2016－04－26

自治區青年科技創新人才培養工程項目“新疆主要經濟作物油菜有益根際微生物篩選及應用”；自治區科技成果轉化專項資金項目（201554113）

楊蓉（1981－），女，新疆人，助理研究員，研究方向為土壤微生物，（E－mail）Lingxuan2519＠126.com

（Cotresponding author）：龍宣杞（1969－），女，四川人，研究員，研究方向為土壤微生物與微生態學，（E－mail）longxq_xj＠sina. com

Fund project：Special funds for the transformation of scientific and technological achievements of Xinjiang（201554113），the youth science and technology innovation personnel training project＂Screening and Application the of Beneficial Rhizosphere Microbial of Main Economic Crops in Xinjiang of Rape＂