解郁安神顆粒中梔子苷含量測定的比對

王世清 王全豪

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【實驗研究】

解郁安神顆粒中梔子苷含量測定的比對

王世清1王全豪2

目的高效液相色譜法測定解郁安神顆粒中梔子苷含量的比對試驗。方法采用回流法與超聲處理法分別進行提取，兩臺高效液相色譜儀同時進樣分析。結果回流與超聲處理兩種提取方法測得的解郁安神顆粒中梔子苷含量基本相同。但是，兩臺液相色譜儀測定的結果之間有較大偏差。結論超聲處理提取法避免了回流法燒瓶形成固體粘附物對梔子苷含量的影響，可以使用超聲處理法提取解郁安神顆粒中的梔子苷。

解郁安神顆粒；梔子苷；含量測定

2016年7月河南省食品藥品檢驗所在全省轄區范圍內組織中藥制藥廠、中藥飲片廠、各地市藥檢所進行了一年一度的實驗室比對試驗，采用《中國藥典》2015年版一部解郁安神顆粒含量測定[1]的方法，以干燥品計算每克中梔子苷的含量。試驗過程中除使用規定的回流法外，還采用超聲法提取，兩臺液相色譜儀同時測定，結果兩種提取方法所得結果基本相同。現匯報如下供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器安捷倫 1260全自動高效液相色譜儀(美國)兩臺，分別是2008年與2015年安裝；色譜柱：Weters(Symmetry C18柱，5μm，柱長：250 mm，內徑：4.6mm )、天津蘭博(Kromasil C18柱，5μm，柱長：250 mm，內徑：4.6mm)；KS-500EII超聲波清洗機(寧波海曙科生超聲設備有限公司)。

1.2 試藥梔子苷參考物(規格：20mg，批號：151204，含量99.79%，成都普菲德生物技術有限公司)一支；解郁安神顆粒(規格：5g，批號：Z2016132-A、Z2016132-B，河南省食品藥品檢驗所)共4袋，A、B樣各2袋；甲醇為分析純，液相流動相使用的乙腈為色譜純、水為娃哈哈純凈水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件流動相：乙腈-水(15：85)；流速：1.0 ml/min；檢測波長：236 nm；柱溫：35 ℃；進樣量：10 μl

2.2 對照品溶液的制備精密稱取梔子苷參考物10.06 mg、9.01 mg，分別置100 ml的容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取15 ml，置 50 ml量瓶中，各加甲醇至刻度,搖勻,即得。

2.3 供試品溶液的制備取本品內容物，混勻，研細，取1 g(剩余樣品按照《中國藥典》2015年版四部水分測定法之烘干法[2]測定水分)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇 20 ml，稱定重量，加熱回流40分鐘(回流速度約30滴/min)(另取1 g，不回流而是超聲處理(功率500 W，頻率40 kHz)40分鐘)，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.4 測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μl，分別注入兩臺液相色譜儀，同時測定[3～5]，即得。從表1可以看出0.10038874mg/ml濃度的對照品計算出來的結果明顯偏低，可能該濃度已超過該臺液相的線性范圍。從兩表結果可以看出超聲提取與回流的結果基本一致，可以使用超聲處理法提取解郁安神顆粒中的梔子苷，從而相互佐證。從表1和表2的含量可以看出，兩個液相的數據偏差較大。可以取兩臺液相測得結果的平均值報告。結果見表1、表2。

3 討論

我們在比對試驗前，先從市場購買解郁安神顆粒進行預試驗，實驗過程中發現回流后燒瓶壁上粘附一圈黃白色固體(蔗糖及處方成分)，超聲使之脫落、溶解，結果溶解不完全，致使平行試驗的兩份之間誤差較大。對此，我們在第二次預試驗的過程中，對粘附物先用粗玻璃棒慢慢研細，取出前觸碰內壁，使棒上液體流下，再用甲醇3～5滴沖洗玻棒，洗液入瓶，然后超聲3～5分鐘，最后調節重量(少了滴加甲醇，過了放置揮發)。

為了克服瓶壁固體粘附物對梔子苷的包埋，考慮到解郁安神顆粒本身為提取物，第二次預試驗時增加了超聲處理法提取，結果理想，隨即決定比對試驗增加超聲處理法提取樣品中的梔子苷。

比對試驗過程中發現樣品的峰面積特別大，隨即將高濃度的對照品溶液裝機進樣。從兩表峰面積可以看出，不同的色譜柱重復性不同，國產色譜柱雖然使用進口填料，但重復性明顯不如原裝進口色譜柱的好。另外，重復性的好壞也與液相的六通閥的清潔程度有關，可以在卸下色譜柱的情況下，用2.5 ml.min-1流速的甲醇以連續進樣的方式沖洗六通閥，進針數為6的倍數。

表1 解郁安神顆粒中梔子苷的含量測定(Weters柱、新安捷倫1260液相)

注：樣品A的水分為2.70%；樣品B的水分為2.64%

表2 解郁安神顆粒中梔子苷的含量測定(天津蘭博柱、老安捷倫1260液相)

[1] 國家藥典委員會.中國藥典一部[S].北京：中國醫藥出版社，2015:1660-1661.

[2] 國家藥典委員會.中國藥典四部[S].北京：中國醫藥出版社，2015:59-61，103-104.

[3] 王世清.不同方法測定六味地黃丸(濃縮丸)中熊果酸含量的比較[J].中醫學報，2011,26(10):1215-1216.

[4] 王世清.冬凌草片中冬凌草甲素的含量測定[J].河南中醫，2013,33(8):1350-1351.

[5] 王世清.雙黃連口服液含量測定比對試驗中的問題分析[J].中國藥業，2008，17(16):44-45.

1.河南省濮陽市食品藥品檢驗檢測中心(濮陽 457000)；2.河南省濮陽市惠成電子材料有限公司(濮陽 457000)

10.3969/j.issn.1003-8914.2016.21.022

1003-8914(2016)-21-3113-02

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2016-07-28)