瘤果黑種草子對小鼠急性酒精性肝損傷的影響*

于世博， 孔祥耀， 陳明翠， 任文凱， 袁桃花， 吳 寧

(1.貴州醫(yī)科大學， 貴州 貴陽 550004； 2.貴州醫(yī)科大學 基礎(chǔ)醫(yī)學院 生物化學與分子生物學教研室， 貴州 貴陽 550004)

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瘤果黑種草子對小鼠急性酒精性肝損傷的影響*

于世博1， 孔祥耀1， 陳明翠1， 任文凱1， 袁桃花1， 吳 寧2*

(1.貴州醫(yī)科大學， 貴州 貴陽 550004； 2.貴州醫(yī)科大學 基礎(chǔ)醫(yī)學院 生物化學與分子生物學教研室， 貴州 貴陽 550004)

目的： 探討瘤果黑種草子對小鼠急性酒精性肝損傷的影響。方法：50只昆明小鼠隨機分為正常對照組、模型組、陽性對照組及瘤果黑種草子高、低劑量組，除正常對照組外，其余各組給予56度白酒(10 mL/kg)灌胃建立急性酒精性肝損傷模型，正常對照組給予等量生理鹽水；灌胃同時，陽性對照組灌胃葵花護肝寧，瘤果黑種草子高、低劑量組分別灌胃黑種草子水提液6 g/kg或2 g/kg進行灌胃，連續(xù)10 d，灌胃期間觀察小鼠的體重、精神、活動及毛色等情況；最后一次灌胃后10 h時取血檢測小鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)的水平，同時稱取小鼠體質(zhì)量和肝臟質(zhì)量，計算肝指數(shù)，觀察小鼠肝組織外觀及肝組織病理學改變。結(jié)果：與正常對照組比較，模型組小鼠體重減輕，嗜睡，毛發(fā)光澤度下降；瘤果黑種草子組小鼠情況明顯改善，小鼠毛發(fā)光滑整齊，體質(zhì)量增長恢復正常，高劑量組最為明顯；小鼠體質(zhì)量和肝指數(shù)比較，模型組低于正常對照組，瘤果黑種草子組高于模型組 (P<0.05)；血清ALT及AST活性比較，模型組高于正常對照組，瘤果黑種草子組低于模型組 (P<0.05)；模型組小鼠肝組織外觀呈黃褐色、正常對照組呈紅褐色，瘤果黑種草子組介于兩組之間，高劑量組更接近正常對照組；HE染色結(jié)果顯示，模型組小鼠肝細胞明顯氣球樣變性、壞死，并伴有少量炎癥細胞浸潤；與模型組比較，高劑量瘤果黑種草子組小鼠肝細胞的病理學改變減輕。結(jié)論：高劑量瘤果黑種草子水提液對小鼠急性酒精性肝損傷有保護作用。

肝疾病，酒精性； 小鼠； 肝； 肝功能試驗； 瘤果黑種草子； 維吾爾族藥物

維藥瘤果黑種草子是我國新疆維吾爾族的傳統(tǒng)常用藥材，具有抗腫瘤、鎮(zhèn)痛、抗炎、抗氧化、抗血小板聚集及抗菌等功效[1-4]。目前，國內(nèi)外對維藥瘤果黑種草子的研究較少，多集中于其抗腫瘤及抗氧化作用，但對民間流傳的良好保肝效果卻鮮有報道。本研究通過建立急性酒精性肝損傷小鼠模型，觀察瘤果黑種草子對小鼠急性酒精性肝損傷的影響，為瘤果黑種草子的臨床應用提供一定的實驗與理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物、儀器、藥品與試劑

昆明小鼠，雌雄各半，清潔級，體質(zhì)量為19～24 g。由貴州醫(yī)科大學動物管理中心提供，合格證號SCXK(黔)2012-001 。儀器主要有7150型全自動生化分析儀(日本日立)、RM2015型石蠟切片機(德國萊卡)、BX51T-PHD-J11型顯微鏡(日本奧林巴斯)、多功能真彩色細胞圖象分析管理系統(tǒng)(美國Media Cybernetics公司)， 瘤果黑種草子購于新疆維吾爾民族醫(yī)院。紅星牌56度白酒(北京紅星二鍋頭股份有限公司)、血清ALT、AST檢測試劑盒(南京建成生物工程研究所)、葵花護肝片(北京葵花藥業(yè))。

1.2 方法

1.2.1 小鼠肝損傷模型及分組 50只昆明小鼠隨機分為正常對照組、模型組、陽性對照組及瘤果黑種草子高、低劑量組。除正常對照組外，其余各組小鼠每日下午給予56度白酒(10 mL/kg)灌胃，建立急性酒精性肝損傷模型，正常對照組小鼠給予等量生理鹽水，陽性對照組給予葵花護肝寧，瘤果黑種草子組分別給予黑種草子水提液6 g/kg或2 g/kg進行灌胃，連續(xù)10 d。

1.2.2 檢測指標 實驗期間觀察各組小鼠活動狀態(tài)、毛色、體質(zhì)量、飲食等一般狀態(tài)；末次給予白酒灌胃后禁食不禁水10 h，取血清測定谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性；迅速取出肝臟稱重，計算肝指數(shù)(肝指數(shù)=肝重/體質(zhì)量)；取肝右葉用10%甲醛固定，石蠟包埋切片HE染色，觀察其病理變化。

1.3 統(tǒng)計學處理

2 結(jié)果

2.1 一般情況

正常對照組比較，模型組小鼠體質(zhì)量減輕，嗜睡，毛發(fā)光澤度下降，并伴有反應遲鈍，活動及進食減少，腹部腫脹等癥狀；與模型組比較，瘤果黑種草子組小鼠情況均有明顯改善，毛發(fā)光滑整齊，體質(zhì)量增長恢復正常，其中高劑量組最為明顯。

2.2 小鼠體質(zhì)量、肝指數(shù)和血清ALT及AST活性

小鼠體質(zhì)量和肝指數(shù)比較，模型組低于正常對照組，瘤果黑種草子組高于模型組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；血清ALT及AST活性比較，模型組高于正常對照組，瘤果黑種草子組低于模型組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；見表1。

Tab.1 Body mass and liver index of mice in each group

與正常對照組比較，(1)P<0.01,(2)P<0.05 ；與模型組比較，(3)P<0.05,(4)P<0.01

2.3 小鼠肝組織外觀及HE染色

正常對照組小鼠肝組織外觀呈紅褐色且具有明顯光澤，觸之感覺柔軟且富有彈性；模型組小鼠肝組織外觀呈黃褐色，少數(shù)呈深紅色及灰白色，觸之感覺質(zhì)地較硬且缺少彈性；瘤果黑種草子組肝臟外觀介于模型組與正常對照組之間，其中高劑量組更接近于正常對照組。HE染色后，鏡下可見正常對照組肝細胞完整，肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，多數(shù)為單核，少見雙核及多核；模型組小鼠肝細胞腫脹，并伴有氣球樣變，肝小葉結(jié)構(gòu)不清晰，肝細胞排列混亂，部分肝細胞伴有少量炎癥細胞浸潤；陽性對照組及瘤果黑種草子組僅部分細胞可見氣球樣變性及少量點狀壞死，其中瘤果黑種草子高劑量組改善最為明顯。見圖1。

注：A為正常對照組，B為模型組， C、D分別為瘤果黑種草子高劑量及低劑量組，E為陽性對照組

3 討論

肝臟是酒精在體內(nèi)代謝的重要臟器，過量的飲酒會造成肝臟組織不同程度的損傷。酒精性肝損傷為繼病毒性肝炎后的一種多發(fā)的肝損傷疾病[5]。天然保肝類藥物的研發(fā)已成為業(yè)界的研究熱點之一。近年來，一些民族中草藥從多角度、多靶點治療酒精性肝損傷的效果已逐漸得到認可[6-10]。瘤果黑種草子作為我國新疆維吾爾族常用的藥材，具有抗氧化，抗炎等多種功效，當?shù)鼐用癯Ｓ脕韼椭⒐听X、抗腫瘤及提高機體免疫力[11-12]。本研究模擬人類急性酒精中毒肝臟損傷過程，采用連續(xù)高劑量飲酒方法給小鼠每天灌胃高度白酒，隨著酒精灌胃時間的延長，發(fā)現(xiàn)模型組小鼠皮毛光澤度變差，體質(zhì)量下降，明顯低于對照組，表明過量飲酒導致的小鼠食欲和吸收功能降低，易造成小鼠營養(yǎng)不良。

ALT和AST時肝損傷疾病的敏感指標，主要存在于細胞漿內(nèi)，AST還存在于線粒體中，當肝細胞嚴重受損時，因肝細胞通透性增加，胞漿內(nèi)的ALT及線粒體內(nèi)的AST則釋放入血，導致血液中的ALT及AST的表達水平大幅升高[6]。因此，血清ALT及AST的含量可作為衡量酒精性肝損傷的重要指標。本研究發(fā)現(xiàn)，與模型組比較，瘤果黑種草子組小鼠一般情況均有明顯改善，毛發(fā)光滑整齊，體質(zhì)量恢復正常，其中高劑量組最為明顯。除此之外，本實驗還通過檢驗小鼠血清ALT及AST的含量變化及觀察小鼠肝組織外觀和病理切片來進一步驗證瘤果黑種草子對急性酒精性肝損傷小鼠的影響。結(jié)果顯示，模型組小鼠血清ALT和AST水平明顯升高，肝臟出現(xiàn)明顯的小葉組織破壞及肝細胞的氣球樣變，說明小鼠急性酒精性肝臟損傷模型建立成功。而與模型組相比，瘤果黑種草子均能提高小鼠肝臟重量及肝臟指數(shù)，并減緩ALT及AST升高的趨勢，以瘤果黑種草子高劑量組結(jié)果最為明顯，而低劑量組次之；進一步觀察小鼠肝臟組織病理學切片，發(fā)現(xiàn)高劑量瘤果黑種草子能夠明顯減輕急性酒精性肝損傷小鼠肝小葉結(jié)構(gòu)的破壞及肝細胞的氣球樣變，腫脹及壞死。隨著瘤果黑種草子劑量的減少，其治療作用也逐步減弱。

綜上所述，瘤果黑種草子能延緩小鼠急性酒精性肝損傷，但因本研究瘤果黑種草子不同劑量對各效應指標的影響尚未呈現(xiàn)一致性的劑量效應關(guān)系，有關(guān)瘤果黑種草子對小鼠急性酒精性肝損傷干預的最佳有效劑量和確切作用機制還有待進一步研究。

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[2] 耿東升，趙麗萍，史榮梅，等.維藥瘤果黑種草子總皂苷鎮(zhèn)咳祛痰及抗炎作用研究[J].新疆醫(yī)科大學學報, 2013(7)：908-911.

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(2016-07-17收稿，2016-10-20修回)

中文編輯： 吳昌學； 英文編輯： 劉 華

The Influence of Nigellae Semen to Acute Alcoholic Liver Damage Mice

YU Shibo1, KONG Xiangyao1, CHEN Mingcui1, REN Wenkai1， YUAN Taohua1, WU Ning2

(1.GuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004,Guizhou,China; 2.DepartmentofBiochemistryandmolecularbiology,GuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004,Guizhou,China)

Objective: To explore the effects of seeds of Uygur medicine Nigella glandulifera freyn on acute alcoholic liver damage of mice. Methods: 50 mice were randomly divided into control group, model group, the positive control group, high dose of Nigella water extract group(6 g/kg), and low dose of Nigella semen water extract group(2 g/kg). The normal group received saline of equal volume while the other groups were orally administered daily 56 degree liquor of 10 mL/kg to establish a model of acute alcoholic liver injury. When intragastric administration was going on, the positive control group received gavage of sunflower Huganning, while Nigella glandulifera freyn group were given intragastric administration of Nigella seeds water extract 6 g/kg(high dose) or 2 g/kg(low dose) for 10 d. The body weight, spirit, activity and hair color of mice were observed during the period of gavage. 10 h after the last intragastric administration, serum of mice was collected to detect serum glutamic pyruvic transaminase (ALT), aspartate aminotransferase (AST) levels. At the same time, the mice body weight and liver weight were measured to calculate liver index and the liver tissue appearance and the pathological changes of liver tissue were observed. Results: Compared with the normal control group, model group mice showed weight loss, sleepiness, hair gloss drop. The situation of mice in Nigella glandulifera freyn group were significantly improved. Their mouse hair was smooth, body weight increased and returned to normal with high dosage groups being better. The body weight and liver index of mice in model group were lower than their counterparts of normal control group while the body weight and liver index in Nigella glandulifera freyn group were higher than their counterparts of model group (P<0.05). The serum ALT and AST activity in model group were lower than their counterparts of normal control group while the serum ALT and AST activity in Nigella glandulifera freyn group were higher than their counterparts in model group (P<0.05). The liver tissue appearance of model group was brown while normal control group reddish brown. The appearance of Nigella glandulifera freyn group was between model group and normal control group, with the high dose group closer to the normal control group. He staining results showed that mice hepatic cells of model group showed significant ballooning degeneration and necrosis, accompanied by a small amount of inflammatory cell infiltration. Compared with model group, the pathological changes of mice liver cell of high dose of Nigella glandulifera freyn was alleviated. Conclusion: High dose of Nigella glandulifera freyn water extract has a protective effect on acute liver injury in mice.

liver diseases,alcoholic; mice; liver; liver function tests; nigellae semen; Uygur medicine

?? E-mail:1638210715@qq.com

時間：2016-11-15 網(wǎng)絡出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.1164.R.20161115.1757.024.html

R29； R285.5

A

1000-2707(2016)11-1288-04

10.19367/j.cnki.1000-2707.2016.11.011