雞白痢沙門氏菌的分離鑒定及耐藥性分析

梁 惠　（山東省蓬萊市大辛店畜牧獸醫工作站　265612）

雞白痢沙門氏菌的分離鑒定及耐藥性分析

梁 惠（山東省蓬萊市大辛店畜牧獸醫工作站265612）

采集蓬萊某養雞場疑似雞白痢病死雞的肝臟、脾臟、腎臟等作為病料，進行細菌的分離、生化鑒定、血清型鑒定及藥敏試驗。試驗結果表明，分離得到的3株分離株均是雞白痢沙門氏菌，其血清型分別為2株O9、1株O12。藥敏試驗結果表明：分離株對頭孢噻呋和阿米卡星高敏；對卡那霉素、慶大霉素和新霉素中敏；對環丙沙星和鏈霉素低敏。因此頭孢噻呋和阿米卡星可以很好的作為該養雞場預防和治療雞白痢的藥物，然而其他抗生素可以減少其使用量或停用。

雞白痢沙門氏菌分離鑒定藥敏試驗

雞白痢是由雞白痢沙門氏菌引起的雞的一種敗血性傳染病，嚴重影響雛雞的成活率和成年雞的生產性能，對養雞業危害嚴重[1]。使用抗生素進行治療是防治雞白痢的主要措施之一，由于抗生素藥物的長期使用以及不合理使用，導致雞白痢沙門氏菌的耐藥性日益嚴重[2]，如何選擇有效的藥物進行治療，成為一個問題。本試驗采集蓬萊某養雞場疑似雞白痢的病料進行細菌分離鑒定及藥敏試驗，篩選出有效的藥物，希望能為該養雞場雞白痢的防治提供一定的理論指導。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1病料采集蓬萊某養雞場疑似雞白痢病死雞的肝臟、脾臟、腎臟等作為病料。

1.1.2培養基、試劑SS瓊脂平板、EMB瓊脂平板、三糖鐵培養基、藥敏紙片均購自青島生物制品研究所，生化鑒定試劑購自上海靜融生化試劑有限公司，沙門氏菌O多價抗血清、O單因子抗血清購自廣州真知生物技術有限公司。

1.2方法

1.2.1細菌分離將采集的病料分別劃線接種于SS培養基、EMB培養基，置37℃生化培養箱培養18-24h，挑取單個可疑菌落涂片染色鏡檢，并挑取可疑的菌落進行反復劃線直到得到純培養。

1.2.2生化鑒定參考《獸醫微生物學》[3]介紹的方法，將分離菌株依次接種在三糖鐵培養基、葡糖糖、乳糖、甘露醇和蔗糖等發酵管，經37℃培養24-48h觀察結果。

1.2.3血清型鑒定將分離菌株接種在EMB培養基上，然后在37℃生化培養箱培養24h，用0.5%生理鹽水沖洗培養物，再經過120℃高溫處理2h，得到抗原。分別與沙門氏菌O多價抗血清、O單因子血清做玻片凝集試驗[4]，同時用生理鹽水做對照試驗，分別混和均勻后，反應1～3min，觀察現象，出現凝集者為陽性，則不凝聚者為陰性。

1.2.4藥敏試驗將經過純化培養的細菌接種在TSB培養液中，37℃培養12h，然后取2滴菌液均勻涂于TSA平板上，用無菌鑷子夾取各種藥敏紙片，平貼于培養基表面，每個藥敏片的間距不小于20mm，藥敏片的中心距平板的邊緣不小于15mm，最后倒置于生化培養箱37℃培養24h，觀察結果，抑菌圈直徑的大小作為供試菌株敏感指標報告敏感、中度敏感和低度敏感的結果。

2　結果與分析

2.1細菌分離結果

經培養后，在SS培養基、EMB培養基上出現無色、半透明、光滑、圓形的小菌落。經反復劃線，得到3株分離株。

2.2生化鑒定結果

3株分離菌生化特性一致，具體表現為，在TSI中不分解乳糖及蔗糖，下層底部分解葡萄糖呈酸性變黃色，斜面呈紅色；3株分離株發酵葡萄糖、甘露醇產酸產氣，不利用乳糖，發酵木糖，肌醇、衛矛醇反應為陰性，沒有H2S生成，生化反應符合沙門氏菌的特性，具體結果見表1。

表1　糖發酵試驗結果

2.3血清型測定結果

將分離到的3個菌株分別與沙門氏菌O多價抗血清做玻片凝集試驗1～2min后，反應結果全部呈陽性凝集。分別與O單因子血清玻片凝集試驗時，發現有2株和O9因子出現了顆粒凝集的現象，1株與O12因子出現了顆粒凝集的現象。生理鹽水對照組不發生凝集反應。通過以上試驗鑒定，確定該3株分離菌中有2株O9血清型，1株O12血清型。

2.4藥敏試驗結果

3株細菌對阿米卡星和頭孢噻呋的表現為高敏；而對慶大霉素、新霉素、卡那霉素表現為中敏；對環丙沙星以及鏈霉素則表現為低敏或不敏感，見表2。

表2　藥物的抑菌圈平均直徑

3　討論

（1）雛雞雞白痢與禽傷寒的臨床表現及病理變化相似，但兩者的病原體分別為雞白痢沙門氏菌與雞傷寒沙門氏菌，雞白痢沙門氏菌與雞傷寒沙門氏菌的生化特性存在顯著差異，本試驗分離的3株分離菌均不發酵衛矛醇，這與雞傷寒沙門氏菌的生化特性不相符，而符合雞白痢沙門氏菌的生化特性，因此說明分離菌為雞白痢沙門氏菌。（2）本試驗藥敏試驗的結果與金艷麗[5]的測定結果差別很大，這表明雞白痢沙門氏菌由于用藥種類和用藥習慣的不同會使雞白痢沙門氏菌耐藥性發生變化，本地區耐藥性較高主要是因為獸醫臨床上使用頻率較高的鏈霉素和環丙沙星藥，這可能與雞場由于疾病的壓力而長期大量使用此類抗生素進行藥物預防或飼料中添加過多的原因導致，由此警示臨床治療時應慎用此類藥物[6]。而分離株對頭孢噻呋和阿米卡高度敏感，因此頭孢噻呋和阿米卡星可以很好的作為該養雞場預防和治療雞白痢的藥物。（3）本試驗分離得到的雞白痢沙門氏菌血清型為O9和O12，與江蘇徐州市的呂華申、孫鵬[7]分離到O9、O12和O1不同，這說明雞白痢是由多種血清型雞白痢沙門氏菌混合感染而引起的，在以后的檢驗檢疫過程中，應該多挑取疑似菌落并且逐一的進行病原體的分離與鑒定，以確定其血清型，本試驗分離株血清型的確定為該養雞場以后疫苗的研究及預防提供一定的理論基礎。

[1] 王新華, 銀梅. 禽病檢驗與防治[M]. 北京: 中國農業出版社, 2013: 222-225.

[2] 張凌云. 雞場沙門氏菌的分離鑒定及耐藥性研究[D]. 沈陽: 吉林農業大學, 2011: 7-8.

[3] 陸承平. 獸醫微生物學[M]. 北京: 中國農業出版社, 2011: 155-158.

[4] 馬興樹. 禽傳染病實驗診斷技術[M]. 北京: 化學工業出版社, 2005: 280-282.

[5] 金艷麗. 雞白痢沙門氏菌的分離鑒定及藥敏試驗[J]. 山東畜牧獸

醫. 2014(1): 12-14.

[6] 嚴曉玲, 邵紅. 雞白痢沙門氏菌臨床分離株的耐藥性分析[J]. 黑龍江八一農墾大學學報, 2012, 24(2): 23-26.

[7] 呂華申, 孫鵬. 江蘇徐州市雞白痢沙門氏菌的分離鑒定和耐藥性分析[J]. 中國動物檢疫. 2014, 31(12): 50-51.

S852.61

A

1007-1733(2016)12-0015-02

（2016–08–26）