丙泊酚對鼠胚胎神經干細胞凋亡的影響及作用機制

肖華平 程其許 楊小敏

(江西省腫瘤醫院麻醉科，江西 南昌 330029)

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·論著·

丙泊酚對鼠胚胎神經干細胞凋亡的影響及作用機制

肖華平*程其許 楊小敏

(江西省腫瘤醫院麻醉科，江西 南昌 330029)

目的:探討丙泊酚對鼠胚胎神經干細胞凋亡的影響及作用機制。方法：選擇孕14～16 d Wistar大鼠，分離培養胚胎神經干細胞，分別用5、25、50、100 μmol/L丙泊酚進行處理，同時設立脂肪乳劑組和空白對照組。采用MTT法檢測細胞存活率；流式細胞術觀察丙泊酚對胚胎神經干細胞凋亡的影響；提取對照組、脂肪乳劑組、50 μmol/L丙泊酚、50 μmol/L丙泊酚+caspase抑制劑培育12 h后的全細胞蛋白，Western-blot檢測激活的細胞色素c、caspase-3、caspase-8、caspase-9蛋白的表達。結果：丙泊酚可引起胚胎神經干細胞凋亡，其效應呈劑量依賴型(P<0.05)；丙泊酚處理后的胚胎神經干細胞激活的caspase-3、CytochromeC、caspase-9、caspase-8蛋白表達水平顯著增加(P<0.05)。結論：丙泊酚主要通過激活caspase依賴的內源性和外源性凋亡通路引起鼠胚胎神經干細胞凋亡。

丙泊酚；胚胎神經干細胞；流式細胞術；凋亡

丙泊酚是一種靜脈全麻藥，作用于GABA-A受體β亞基，廣泛運用于臨床麻醉和重癥監護室。有報道顯示，發育中的大腦反復暴露于丙泊酚會引起細胞凋亡[1]，但其引起神經凋亡的細胞內機制與信號通路目前尚不清楚?；诖耍狙芯客ㄟ^體外培養大鼠胚胎神經干細胞(neural stem cells,NSCs)，探討丙泊酚引起神經細胞凋亡的通路，為尋找相應的靶點，阻斷細胞凋亡通路，減輕丙泊酚神經毒性作用奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 胚胎NSCs 分離培養

孕14～16 d Wistar大鼠10%水合氯醛麻醉后，用75 %乙醇擦拭腹部,打開腹腔，取出胚胎，剪開顱骨骨膜，取出胎鼠腦皮質，放入D-hanks液中，剝除腦膜和血管，將其剪碎，以1 000 r/min離心3 min棄上清，加入0.125 %胰蛋白酶和0.102 %乙二胺四乙酸二鈉鹽( EDTA)，用火焰刨光……