重組蛋白sCAR?TMTP1增強腺病毒對骨肉瘤細胞基因轉染效率的研究

羅丹楓 龔靜吉 程騰 魏睿 魏軍成 祝文濤

·實驗研究論著·

重組蛋白sCAR?TMTP1增強腺病毒對骨肉瘤細胞基因轉染效率的研究

羅丹楓 龔靜吉 程騰 魏睿 魏軍成 祝文濤

目的提高腺病毒（adenovirus,ADV）在缺乏柯薩奇腺病毒受體（coxsackie and adenovirus receptor,CAR）的骨肉瘤細胞中的轉染效率。方法通過昆蟲（Bac?to?Bac）桿狀病毒表達系統表達含有CAR胞外段（sCAR）及TMTP1肽的重組蛋白（sCAR?TMTP1），并對其純化、鑒定。流式細胞儀分別檢測骨肉瘤細胞及人胚腎細胞293（HEK293）的CAR表達水平，ADV對其的感染效率及FITC?TMTP1的結合能力。重組蛋白sCAR?TMTP1與ADV共同孵育形成復合物，流式細胞儀研究其在缺乏CAR的骨肉瘤細胞（MG?63）中的轉染效率。結果表達及純化的sCAR?TMTP1蛋白在相對分子質量約31 000處可見特異蛋白條帶，感染的sf9細胞裂解上清可與兔抗小鼠sCAR單克隆抗體發生特異性反應。MG?63可與FITC?TMTP1特異結合，其CAR表達水平低，ADV轉染效率低。經sCAR?TMTP1修飾后的ADV/GFP對MG?63細胞的感染效率顯著高于未經修飾的含報告基因GFP的ADV（ADV/GFP）。結論重組蛋白sCAR?TM?TP1可顯著提升ADV對缺乏CAR的骨肉瘤細胞的轉染效率。

骨肉瘤；腺病毒；TMTP1肽；柯薩奇腺病毒受體；重組蛋白；基因治療；腫瘤細胞

骨肉瘤（osteosarcoma）是最常見的原發惡性骨腫瘤，好發于青少年，其極易出現復發和轉移，且血行轉移發生早，其中最常見的是肺轉移。對于發生轉移的患者，常規進行手術治療及化療，但臨床療效不佳，愈后不良，亟需探索發現新的治療模式［1］。

基因治療是一種有前景的新型治療策略，腺病毒（adenovirus,ADV）因具有轉染效率高、不整合到靶細胞基因組中、遺傳毒性低等優點，已成為基因治療中最常見的病毒載體之一［2］。……