抗-cE合并抗-c、抗-E抗體致新生兒溶血病的臨床研究

孫長杰，王曉寧，劉 冰*，李凌波

(1.吉林大學第一醫院 輸血科，吉林 長春130021；2.長春博迅生物技術有限責任公司)

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抗-cE合并抗-c、抗-E抗體致新生兒溶血病的臨床研究

孫長杰1，王曉寧1，劉 冰1*，李凌波2*

(1.吉林大學第一醫院 輸血科，吉林 長春130021；2.長春博迅生物技術有限責任公司)

1 臨床資料

患兒男，1小時新生兒，因母孕29周，呼吸困難1小時入吉林大學第一醫院就診。系3胎2產，母孕29周，因胎盤早剝、陰道流血，加重1天，產程未發動剖宮產分娩，出生體重1.36 kg。患兒生后不久呼吸困難明顯，給予氣管插管、人工正壓通氣治療，為求進一步治療轉入我院。入院查體：一般狀態及反應差，皮膚略蒼白，早產兒外貌，胎齡評估28周，呼吸65次/分，呼吸急促，三凹征陽性，心率130次/分，四肢肌張力低。白細胞8.83×109/L，紅細胞3.41×1012/L，血紅蛋白126 g/L，紅細胞比容0.391 L/L，紅細胞分布寬度15.4%，血小板300×109/L。診斷為早產兒、新生兒呼吸窘迫綜合癥、極低出生體重兒，予以機械通氣等對癥治療。患兒生后12小時出現黃疸，總膽紅素132.3 μmol/L，直接膽紅素7.3 μmol/L，間接膽紅素125.0 μmol/L，全身黃染呈進行性加重。經血清學檢測證實，系由抗-cE合并抗-c、抗-E抗體引起Rh系統新生兒溶血病。

血型檢測及母血清不規則抗體篩查和鑒定：采用卡式法，按廠家說明書進行操作和判讀。ABODE血型檢測卡(微柱凝膠)、Rh血型抗原檢測卡(單克隆抗體)、抗人球蛋白檢測卡由長春博迅生物技術有限責任公司生產；ABO標準紅細胞、抗體篩選紅細胞、譜細胞由上海血液生物醫藥有限責任公司生產。不規則抗體鑒定將母血清采用鹽水法及卡式法抗人球蛋白試驗分別與由10人份O型紅細胞組成的譜細胞及自身紅細胞反應，與譜細胞中1至數人份凝集，與自身紅細胞不凝集者為抗體陽性，并根據與譜細胞的反應格局判定抗體特異性。

新生兒溶血病直接抗人球蛋白、游離、釋放試驗：直接抗人球蛋白、游離試驗采用卡式法，釋放試驗應用酸放散方法，按說明書操作判讀。抗人球蛋白檢測卡、酸放散試劑盒由長春博迅生物技術有限責任公司生產。新生兒溶血病三項試驗陽性判斷方法參照文獻[1]。

吸收放散試驗及抗體效價測定：吸收放散試驗及抗體效價測定均按文獻[2]進行。

2 結果

新生兒血型為O型，Rh血型表型DCcEe；母血型為O型，Rh表型DCCee。母血清在生理鹽水介質中，與全部3支篩檢細胞反應均為陰性，在卡式法抗人球蛋白試驗中與篩檢細胞中2號、3號反應均為陽性，與1號細胞反應陰性，提示母血清檢出ABO系統外IgG類不規則抗體，篩檢細胞的1號、2號和3號Rh表型分別為DCCee、DccEE、DCcee。為確定母血清抗體特異性，用譜細胞作進一步鑒定，母血清在生理鹽水介質中與自身細胞及所有的譜細胞反應均為陰性，在卡式法抗人球蛋白試驗中，除與自身細胞及1號(Rh表型DCCee)譜細胞反應為陰性外，其余的反應結果均為陽性，經分析得出母血清中可能存在抗-E、抗-c和(或)抗-cE抗體(表1)。

新生兒直接抗人球蛋白試驗陽性，游離試驗新生兒血清與ABO標準紅細胞在鹽水介質中呈陰性反應，在卡式抗人球蛋白試驗中與ABO標準紅細胞均呈現陽性反應。酸放散方法釋放患兒紅細胞，卡式抗人球蛋白法檢測放散液，與譜細胞譜中含c和(或)E抗原的細胞反應陽性，與母血清抗體特異性一致(表1)。

表1 母血清及新生兒抗體特異性鑒定

注：“0”代表陰性，“+”代表陽性

由于此抗體在室溫條件下于生理鹽水介質中沒有反應活性，且可通過胎盤進入胎兒體內，檢測新生兒紅細胞放散液與母血清抗體特異性一致，可判斷為IgG性質抗體。應用吸收放散試技術一步鑒定母血清中抗體特異性，選取O型譜系胞Rh表型為dccee和DCcEe型細胞來吸收母血清中抗體[3]，直到吸收后血清不再與譜細胞反應為止，表明已經完全去除了單一性存在的抗-c和抗-E抗體，再用O型DccEE型紅細胞測吸收后血清中IgG抗-cE效價為16。選取O型譜系胞Rh表型為DCCEe型紅細胞測母血清中IgG抗-E效價為256；選取O型dccee型細胞測得IgG抗-c效價為32。同樣方法測得新生兒放散液中抗體效價抗-c為16，抗-E為32，抗-cE為8。

經上述輔助檢查，患兒補充臨床診斷新生兒溶血病(Rh血型不合)，給予外周動靜脈換血治療，換血血液選擇O型Rh表型DCCee(與母Rh血型同型血)[4]。換血后檢測，患兒總膽紅素97.8 μmol/L，直接膽紅素4.3 μmol/L，間接膽紅素93.5 μmol/L。患兒經換血、丙種球蛋白輸注、光照等治療后皮膚黃染逐漸消退，血常規等指標逐漸達正常范圍，無需呼吸支持治療，無感染表現，體重增長良好，好轉出院。

3 討論

2012年以來，國際輸血協會(International Society of Blood Transfusion，ISBT)新確認了多個血型系統，如Forssman血型系統(FOR，031)、Junior血型系統(JR，032)、Langereis血型系統(LAN，033)、Vel血型系統(VEL，034)和CD59血型系統(CD59，035)，血型系統總數已達35個[5]。除ABO血型系統外，已報道有50多種不同紅細胞抗原與新生兒溶血病有關[6]。在我國，ABO系統以及Rh系統D抗原相關的新生兒溶血病報道較多，Rh系統除抗-D抗體外，與E、c抗原相關的抗-E、抗c及抗-cE復合抗體均能引起新生兒溶血病，并在臨床上造成嚴重后果[7-9]。

Rh系統新生兒溶血病是由于Rh陽性的胎兒免疫Rh陰性的母親所致，再次妊娠時致敏母體產生的抗體經胎盤傳播，結合胎兒Rh陽性紅細胞表面，導致新生兒溶血、貧血、水腫及嚴重的新生兒黃疸[10]。本例患兒母親系3胎2產，有妊娠史，且Rh表型為DCCee，與患兒E、c抗原不合，具備發生新生兒溶血病的條件，患兒生后12小時內出現黃疸，呈進行性加重，膽紅素偏高，溶血三項試驗均陽性，證實發生新生兒溶血病。大約1%的孕產婦體內有臨床有意義的紅細胞抗體，當抗體篩檢為陽性時，應進一步鑒定抗體的特異性，并確定是否具有臨床意義[11]。本例母血清檢出ABO系統外具有臨床意義的IgG類不規則抗體，并與患兒紅細胞放散液中抗體特異性一致，分析得出母血清中可能存在抗-E、抗-c和(或)抗-cE抗體。國外報道，IgG類抗-c、抗-E均是導致嚴重Rh系統新生兒溶血病的常見抗體[12,13]，而經妊娠引起免疫后，非但產生單一特異性抗體，也可以產生復合抗體，抗-cE復合抗體由Keith等人于1965年首次發現[14]，亦可引起嚴重的新生兒溶血病[15]。血清中存在的復合及混合抗體給抗體鑒定帶來復雜性，抗-cE相應的復合抗原存在于一條染色體的單倍體上，即所謂順位，該抗體只和Rh單倍型中的DcE、dcE反應，而和其他單倍型不反應[3,9]。如果同時存在單一性抗體和復合抗體時，必須先把單一性抗體吸盡，在本例血清(放散液)中同時存在抗-c，抗-E及抗-cE，先用dccee及DCcEe紅細胞吸收，去除血清(放散液)中單一性抗-c及抗-E抗體，再以DccEE紅細胞檢測，成功測得復合抗體抗-cE效價，亦通過試驗證實了本例患兒是由抗-cE復合抗體合并抗-E、抗-c混合抗體導致的新生兒溶血病，并選擇與母Rh血型同型血(O型Rh表型DCCee)對患兒進行換血治療，取得了良好效果。

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[4]中華醫學會兒科學會新生兒學組.新生兒黃疸干預推薦方案[J].中華兒科雜志,2001,16(8):501.

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[6]Altuntas N,Yenicesu I,Himmetoglu O,et al.The risk assessment study for hemolytic disease of the fetus and newborn in a University Hospital in Turkey[J].Transfus Apher Sci,2013,48(3):377.

[7]林甲進,朱碎永,張 瑛.Rh新生兒溶血病的血清抗體分析[J].中國實驗診斷學,2007,11(12):1634.

[8]米弘瑛,李 利,蘇品璨.新生兒Rh溶血病8例臨床分析[J].第三軍醫大學學報,2012,34(20):2138.

[9]楊世英.抗E、抗c混合抗體和抗cE復合抗體致新生兒溶血病一例[J].中國輸血雜志,1993,6(2):96.

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吉林省科技廳重點科技成果轉化項目(20150307011YY)

1007-4287(2016)11-1911-03

孫長杰，男，53歲，主管技師，研究方向：血液血清學檢驗技術對臨床輸血安全性的影響。

2016-02-18)

*共同通訊作者