RP-HPLC法測定人血漿中齊拉西酮質量濃度

李熙梁

(云南省大理州第二人民醫院，云南大理 671000)

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·論 著·

RP-HPLC法測定人血漿中齊拉西酮質量濃度

李熙梁

(云南省大理州第二人民醫院，云南大理 671000)

目的 建立用反相高效液相色譜(RP-HPLC)法測定人血漿中齊拉西酮質量濃度的辦法。方法 以AcclaimTM120 C18反相柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)為色譜柱，流動相為0.2%三乙胺-甲醇(15∶85)；流速：1.1 mL/min；柱溫：35 ℃;檢測波長：230 nm，以乙酸乙酯為萃取劑。結果 齊拉西酮在8.0～300.0 ng/mL質量濃度范圍內，其質量濃度與峰面積呈良好線性關系；齊拉西酮低、中、高質量濃度(8.0、80.0、350.0 ng/mL)相對回收率均大于95%；提取回收率均大于90%。日內、日間相對標準偏差均低于10%(n=5)。分析方法的檢測限為5.0 ng/mL；齊拉西酮的曲線方程：Y=1.193X+0.013，r=0.999 7(n=7)。結論 該法靈敏、簡單、準確、快速，可用于臨床齊拉西酮血藥濃度的監測。

色譜法,高壓液相； 血藥濃度； 齊拉西酮

隨著對藥品質量的愈益重視和我國自主創新藥物研制的迫切需要，色譜分析已成為最為重要的方法，且為現代藥學發展提供了適時而有效的輔佐和動力。齊拉西酮(ziprasidone)是一種目前最新型的非典型的抗精神病藥物，其結構與吩噻類或丁酰苯類抗精神病藥物不同，臨床應用越來越廣泛。有研究表明，其抗精神分裂癥作用可能是通過對D2和5-羥色胺(5-HT2)受體的拮抗作用來發揮的，對其他相似親和力受體的拮抗作用可能是導致其他治療作用和不良反應的原因[1]。齊拉西酮口服的絕對生物利用度為60%，血漿蛋白結合率大于99%，主要經肝臟充分代謝，約20%經尿液排泄，66%經糞便排泄[2]。齊拉西酮的有效治療窗為50～20 ng/mL，中毒警戒值為400 ng/mL[3]，種族、年齡和性別對齊拉西酮藥代動力學均無影響。因此，在臨床應用中實施個體化用藥，有必要對其進行治療藥物監測，盡量減少藥物不良反應，避免醫療事故的發生。為研究齊拉西酮在人體內的藥代動力學，本研究選擇地西泮為內標，建立簡單、快速的反相高效液相色譜(RP-HPLC)法測定患者血漿齊拉西酮質量濃度，適用于臨床對齊拉西酮血藥濃度的測定及人體藥動學研究。

1 材料與方法

1.1 儀器 高效液相色譜儀[美國Ultimati3000包括在線脫氣機、自動進樣器、二極管陣列紫外檢測器(DAD)、自動調配器、可調柱溫恒溫箱和變色龍色譜化學工作站]、XK96-A旋渦混合器(姜堰市新康醫療器械有限公司)、梅特勒電子分析天平(瑞士AL204-IC)、湘儀TDZ5-WS高速離心機、MTN-2800W氮吹儀、MILLI-Q超純水儀等。

1.2 藥品與試劑 >99.4%齊拉西酮對照品(中國生物制品研究所，批號：100853-201405)，內標為大于99.6%地西泮(中國食品藥品檢定研究院，批號：100142-201308)。甲醇(美國迪馬公司)色譜級，>99.0%三乙胺(江蘇強盛功能化學股份有限公司制造，批號：20131121)，提取劑為大于99.5%乙酸乙酯(江蘇強盛功能化學股份有限公司，批號：20130315)。水為超純水，其他試劑均為分析純。

1.3 方法

1.3.1 對照品與內標 用精確到0.01 mg的電子天平準確稱取齊拉西酮10.0 mg，用甲醇與純凈水溶解并定容至10 mL棕色容量瓶中，于冰箱4 ℃放置保存。實驗時稀釋成所需質量濃度的齊拉西酮對照品溶液。用精確到0.01 mg的電子天平準確稱取地西泮2.5 mg，用甲醇與純凈水溶解并定容至10 mL棕色容量瓶中，制成質量濃度為250 ng/mL的工作內標液并放于冰箱4 ℃保存。

1.3.2 色譜條件 色譜柱為美國賽默飛世爾科技公司生產的AcclaimTM120 C18反相柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相為0.2%三乙胺-甲醇(15∶85)；流速：1.1 mL/min；柱溫：35 ℃;檢測波長：230 nm；靈敏度為0.01 AUFS，不對稱度為0.99，塔板數平均為1萬以上，相對標準差為0.62%。

1.3.3 標本處理 取800 μL標本血漿于5 mL尖底離心管中，準確加入250 ng/mL內標液20 μL，窩旋振蕩5 s，再加1.2 mL乙酸乙酯，窩旋振蕩3 min，于8 000 r/min的專用離心機內離心10 min。轉移全部上清液于2.0 mL尖底離心管中，用40 ℃氮吹儀吹干。進樣前加入40 μL流動相混勻溶解，吸取20 μL于內插管中，由儀器自動進樣分析。

1.3.4 制作標準曲線 在7個5 mL尖底離心管中分別加入相同體積不同質量濃度齊拉西酮對照品20 μL，再加空白血漿800 μL，窩旋振蕩5 s，使血漿藥物質量濃度分別為8.0、16.0、32.0、64.0、128.0、256.0、350.0 ng/mL。然后按“1.3.3”項處理后經HPLC分析，測得齊拉西酮峰面積Ai、內標峰面積As，以Ai/As值為橫坐標(X)，以血漿標本所對應各點齊拉西酮質量濃度為縱坐標(Y)繪制標準曲線。經加權最小二乘法線性回歸。

1.3.5 回收率及精密度 取齊拉西酮低、中、高質量濃度(8.0、80.0、350.0 ng/mL)含藥血漿標本，經色譜分析儀工作站自動計算結果。齊拉西酮低、中、高質量濃度的峰面積與標準曲線所對應點的峰面積之比為相對回收率；而與相同質量濃度未經提取獲得的色譜峰面積之比為提取回收率。同時在1 d內重復5次和1周內重復5次測定其質量濃度，計算日內、日間誤差及方法回收率。

1.3.6 標本穩定性 按標準曲線方法分別配制低、中、高質量濃度(8.0、80.0、350.0 ng/mL)3組18個標本(雙樣平行測定)，分別在室溫(20～24 ℃)放置4、6 h，-20 ℃凍存24 h及-20 ℃凍存1、3周后進行色譜分析。

1.3.7 標本的質控 按標準曲線方法分別配制低、中、高質量濃度(8.0、80.0、350.0 ng/mL)36個血漿標本(每質量濃度12份)置-20 ℃凍存備用，此即為質控標本。批次實驗中同時檢測質控標本，如果中、高質量濃度相對回收率為85%～110%，低質量濃度為80%～120%，即可認為儀器運轉正常，否則須檢查整個檢測流程及進行儀器原因分析。

2 結 果

2.1 齊拉西酮標準曲線 經加權最小二乘法線性回歸得齊拉西酮8.0～300.0 ng/mL的標準曲線。曲線回歸方程：Y=1.193X+0.013，r=0.999 7(n=7)；當信噪比：S/n=3，權重系數W=1/X2時齊拉西酮的檢測限可達5.0 ng/mL。

2.2 回收率及精密度 齊拉西酮相對回收率大于95%，提取回收率大于90%。并滿足生物標本分析要求。見表1。

表1 齊拉西酮日內、日間精密度及回收率(n=5)

*：RSD中文為相對標準偏差。

A：空白血漿；B空白血漿、齊拉西酮對照品、內標(地西泮)；1：齊拉西酮；2：內標(地西泮)。

圖1 齊拉西酮的高效液相色譜圖

2.3 方法學的專屬性 在本實驗條件下空白血漿、齊拉西酮標準品血漿及內標物經RP-HPLC法測定得到的色譜圖見圖1。齊拉西酮和內標物的色譜峰能完全分離，無明顯的內生雜質峰干擾，可見本法具有較高的專屬性。齊拉西酮和內標物的保留時間分別為5.100、6.087 min。

2.4 標本穩定性 經檢測未見凍存標本藥物的損耗和降解。

3 討 論

齊拉西酮人體藥代動力學性質無人種差異，主要藥理活性來自原型，口服齊拉西酮后經胃腸道吸收良好，分布廣泛，6～8 h達血漿峰濃度，1～3 d達到穩態血濃度[4]，因此，20～80 mg口服每天2次能夠滿足治療需要[5-6]。

齊拉西酮在180～400nm的波長范圍內進行紫外掃描，發現在230nm處有一最大吸收峰，而且溶劑峰和其他雜質的干擾較少，故選擇230nm為檢測波長。齊拉西酮的血藥濃度檢測方法國內外已有報道[7-8]。另外在實驗中使用乙酸乙酯一次性提取，提取率達到要求，且乙酸乙酯經濟、實惠，該法萃取效率較高且穩定，萃取物以用甲醇復溶后取上清液進樣，進樣20μL即可滿足實驗要求。雖然齊拉西酮血藥濃度與患者臨床用藥劑量呈顯著正相關，但從患者病歷資料來看也存在一定程度的個體差異，治療劑量不一定適用于所有患者，應密切監控其血藥濃度，做到用藥劑量科學化和個體化。齊拉西酮單藥物的TDM國內外已有報道，相比之下，本研究所建立的方法，簡化了標本處理過程，具有操作簡單、成本低、精密度好和回收率高等特點，能批量進行治療藥物的監測，適用于藥物分析實驗和臨床藥代動力學研究。

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Determination of the concentration of ziprasidone in human plasma by using RP-HPLC

LiXiliang

(TheSecondPeople′sHospitalofDaliPrefecture，Dali,Yunnan671000，China)

Objective To develop a method for determining the concentration of ziprasidone in human plasma by using HPLC.Methods The drug concentration of plasma was analyzed in a reverse phase HPLC system C18column(250 mm×4.6 mm，5 μm);mobile phase consisted of 0.2% ammonium triethyamine-methanol(15∶85);the flow rate was1.1 mL/min;the column temperature was 35°C.The detection wavelength was at 230 nm.Ethyl acetate was used as extracting solvent.Results A good linearity range was 8.0-300.0 ng/mL concentration of ziprasidone in plasma.The average recoveries of ziprasidone in low，middle and high concentrations(8.0，80.0，350.0 ng/mL) over 95% respectively;the extraction recovery over 90%.The intra-day and inter-day variation(RSD)was less than10%(n=5).The minimum detectable concentration of ziprasidone was 5 ng/mL.The regression equation wasY=0.089 9X+0.021 5.r=0.999 7(n=7).Conclusion The method is fast，accurate，，sensitive and simple for clinical monitoring of ziprasidone in plasma.

chromatography,high pressure liquid； plasma concentration； ziprasidone

李熙梁，男，主管檢驗技師，主要從事治療藥物監測的研究。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.02.024

A

1673-4130(2016)02-0202-03

2015-07-28)