延邊地區朝鮮族和漢族人群MTRR A66G基因多態性與腦梗死的關系

安海蓮，吳兆洋，吳光，崔松彪

(延邊大學附屬醫院,吉林延吉133000)

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延邊地區朝鮮族和漢族人群MTRR A66G基因多態性與腦梗死的關系

安海蓮，吳兆洋，吳光，崔松彪

(延邊大學附屬醫院,吉林延吉133000)

目的 觀察延邊地區朝鮮族和漢族人群腦梗死與蛋氨酸合成酶還原酶(MTRR) A66G基因多態性的關系及民族差異。方法 采用PCR-RFLP法檢測352例腦梗死患者(病例組)和315例健康人群(對照組)MTRR A66G基因多態性，并分析基因型和等位基因在不同民族的分布情況。結果 病例組和對照組均具有MTRR A66G的AA、AG和GG基因型, 兩組3種基因型及A和G等位基因分布均無差異(P均>0.05)；對照組中朝、漢兩民族間MTRR A66G基因AA、AG和GG基因型及A和G等位基因分布均無差異(P均>0.05)，但病例組中朝鮮族患者GG基因型分布頻率(11.11%)高于漢族(5.03%),有統計學差異(P<0.05)。結論 MTRR基因A66G多態性與延邊地區人群腦梗死不相關，但是朝鮮族人群中MTRR基因66位A突變為G患腦梗死風險高于漢族。

腦梗死；蛋氨酸合成酶還原酶；同型半胱氨酸；基因多態性；朝鮮族；漢族；延邊

高同型半胱氨酸(Hcy)血癥與腦梗死的發生密切相關[1,2]，而蛋氨酸合成酶還原酶(MTRR)是Hcy代謝過程中的主要輔酶，其基因多態性可引起相應的酶缺陷或活性下降。MTRR基因錯義突變是導致該酶缺乏或活性降低的主要機制，而MTRR A66G位點中AA基因型可突變為AG或GG基因型，可使殘基22處蛋氨酸被異亮氨酸取代，進而導致Hcy水平升高。近年來研究[3～5]表明，MTRR A66G基因多態性與腦血管疾病密切相關，但具有地區和種族差異。2014年6月～2015年5月，我們觀察了延邊地區朝鮮族和漢族腦梗死患者中MTRR A66G基因多態性分布，探討MTRR A66G基因多態性與腦梗死的相關性及民族間差異。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 遵循知情自愿原則，選擇延邊大學附屬醫院神經內科住院的352例腦梗死患者為病例組。其中男212例、女140例，年齡(62.59±10.89)歲，漢族199例、朝鮮族153例，均符合1996年中華醫學會第四次全國腦血管學術會議制定的腦血管病診斷標準，均經CT或MRI證實。同時，選取與病例組性別、年齡、民族等分布無差異的315例健康體檢者為對照組。其中男179例、女136例，年齡(58.05±11.58)歲，漢族178例、朝鮮族137例，均無腦血管疾病史。兩組人群均為長期居住延邊地區的朝鮮族和漢族。

1.2 MTRR A66G基因多態性檢測方法 留取兩組血樣，利用全血基因組DNA提取試劑盒(北京艾德萊生物科技有限公司)提取基因組DNA，并用核酸定量分析儀進行DNA含量及純度檢測。參考文獻[6]設計引物序列，上游引物5′-CAGGCAAAGGCCATCGCAGAAGACAT-3′，下游引物5′-CACTTCCCAACCAAAATTCTTCAAAG-3′。PCR擴增體系為30 μL，其中DNA模板2 μL、上下引物各2 μL、Taq PCR Premix 15 μL、雙蒸水9 μL。PCR反應條件：94 ℃預變性4 min、94 ℃變性 1 mim、58 ℃退火 1 min、72 ℃延伸 1 min ，共40個循環；末次循環后72 ℃延伸 5 min。以2.5%的瓊脂糖凝膠電泳鑒別后，加入1 μL限制性內切酶NdeⅠ在37 ℃過夜。以5%瓊脂糖電泳分析酶切產物，判斷基因型并攝像。MTRR A66G位點PCR產物長度為151 bp，NdeⅠ的酶切后含124、27 bp片段為AA型，含124、151、27 bp片段為AG型，含151、27 bp片段為GG型。

1.3 統計學方法 采用SPSS16.0統計軟件。數據比較行χ2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組MTRR A66G基因多態性比較 兩組MTRR A66G基因的AA、AG和GG基因型及A、G等位基因分布均無統計學意義(P均>0.05)。見表1。

表1 兩組MTRR A66G基因多態性比較(例)

2.2 兩組朝鮮族人群MTRR A66G基因多態性比較 兩組朝鮮族人群MTRR A66G基因AA、AG、GG基因型及A、G等位基因分布均無統計學意義(P均>0.05)。見表2。

表2 兩組朝鮮族人群MTRR A66G基因多態性比較(例)

2.3 兩組漢族人群MTRR A66G基因多態性比較 兩組朝鮮族人群MTRR A66G基因AA、AG、GG基因型及A、G等位基因分布均無統計學意義(P均>0.05)。見表3。

表3 兩組漢族人群MTRR A66G基因多態性比較(例)

2.4 病例組中漢族和朝鮮族MTRR A66G基因多態性比較 病例組朝鮮族GG基因型分布頻率為11.11%，高于漢族的5.03%(P<0.05)；朝鮮族和漢族MTRR A66G基因AA、AG基因型及A、G等位基因分布均無統計學意義(P均>0.05)。見表4。

表4 病例組中朝鮮族與漢族的MTRR A66G基因多態性比較(例)

注：與朝鮮族比較，*P<0.05。

3 討論

高Hcy血癥是腦血管疾病的獨立危險因子，而葉酸代謝通路介導的一碳單位代謝影響Hcy水平[7]。MTRR基因多態性會影響蛋氨酸代謝，導致其濃度升高。Wilson等[8]報道，MTRR基因66位A基因突變為G基因在人群中很常見，G等位基因頻率在健康對照中達51%。杜子明等[9]檢測人MTRR A66G基因突變頻率為49%，本研究顯示G等位基因在健康對照中達46.98%,可見MTRR基因66位A基因突變為G基因確實比較普遍。由于MTRR基因A66G突變率很高，此基因位點易受環境因素的影響。對國內10個地域漢族成年人MTRR A66G基因多態性分布的研究[10～13]結果表明，G等位基因和GG型基因頻率從我國低水平的山東(23.7%和5.4%)升高到海南(29.2%和8.6%)，表明MTRR A66G基因多態性具有地區差異性。本研究結果顯示，G等位基因和GG基因型頻率分別為46.98%和6.35%,表明延邊地區G等位基因頻率比我國其他已報到的地區平均水平更高，甚至高于最高的海南地區。

國內外對MTRR A66G與腦梗死的相關性研究有不同的結果。Bosco等[14]報道，MTRR A66G基因多態性與缺血性腦卒中沒有關系；徐恩等[15]選取急性腦梗死患者136例與70例正常人進行對照研究，結果表明MTRR A66G基因多態性不是腦梗死的獨立遺傳危險因素。但是，國內病例對照研究[16]結果表明，MTRR A66G基因多態性與腦梗死發病相關，且GG基因型可能為其易感基因。本研究結果顯示，腦梗死患者MTRR基因A66G基因型及等位基因分布情況與健康對照之間無差異，與其他國內外學者研究相一致。盡管病例組中朝鮮族和漢族A66G等位基因分布無差異性，但是病例組GG基因型分布頻率朝鮮族高于漢族2.21倍。說明漢族人群中MTRR A66G的GG基因型比朝鮮族人群比例低，而且MTRR基因A66G的分布具有民族差異性。我們認為，MTRR A66G基因多態性與腦梗死關聯性的研究結論不一，這可能與MTRR A66G基因多態性具有地區和種族差異性、基因的突變對甲硫氨酸的影響尚不明確以及腦梗死的發生與環境和基因多因素共同作用等有關。但是能從基因水平篩查腦梗死高危人群，無疑會對腦梗死的一級預防起到重要作用。因此，分析葉酸代謝相關基因對腦梗死發生發展的影響，確定MTRR基因多態性是否為腦梗死的遺傳易感因素進而進行早期干預具有深遠意義。

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基金項目：河南省科技攻關計劃項目(152102310192)。

通信作者：祁相煥(E-mail: qixianghuanhuan@126.com)

國家自然科學基金資助項目(81260179)。

崔松彪(E-mail： sbcui@ybu.edu.cn)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.42.014

R743.3

B

1002-266X(2016)42-0046-03

2016-08-22)