重度子癇前期患者外周血T淋巴細胞亞群分布、HLA-DR陽性白細胞百分比變化

李嬋,吳鐵軍,張麗娜,鄒秀麗,亢翠翠

(聊城市人民醫院，山東聊城 252000)

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重度子癇前期患者外周血T淋巴細胞亞群分布、HLA-DR陽性白細胞百分比變化

李嬋,吳鐵軍,張麗娜,鄒秀麗,亢翠翠

(聊城市人民醫院，山東聊城 252000)

目的 觀察重度子癇前期患者外周血T淋巴細胞亞群分布、人類組織相容性抗原DR(HLA-DR)陽性白細胞百分比變化。方法 將30例重度子癇前期患者作為觀察組、30例正常妊娠婦女作為正常妊娠組、18例健康未孕婦女作為對照組，比較三組外周血CD4+、CD8+T淋巴細胞比例及HLA-DR陽性白細胞百分比。結果 觀察組、正常妊娠組、對照組外周血CD4+T淋巴細胞比例比較差異無統計學意義。觀察組、正常妊娠組、對照組外周血CD8+T淋巴細胞比例分別為32.1%±7.4%、26.9%±7.7%、25.4%±7.6%，觀察組與正常妊娠組、對照組相比，P均<0.01。觀察組、正常妊娠組、對照組HLA-DR陽性白細胞百分比分別為43.7%±12.7%、58.3%±13.9%、70.41%±11.3%，觀察組與正常妊娠組、對照組相比，P均<0.01。結論 重度子癇前期患者外周血CD4+T淋巴細胞比例未見明顯變化，CD8+T淋巴細胞比例升高，HLA-DR陽性白細胞百分比降低。

妊娠并發癥；重度子癇前期；免疫功能；T淋巴細胞；人類組織相容性抗原

子癇前期/子癇屬于妊娠期高血壓疾病的范疇，多于孕期20周以后出現，以高血壓和蛋白尿為主要特征，也常累及肝、腎和胎盤等重要器官，是孕產婦及圍生兒發病及死亡的重要原因[1]，我國的發病率為2%～6%[2]，且隨著我國二胎政策的放開，子癇致孕產婦病死率持續升高[3,4]。子癇前期的病因和發病機制尚不完全清楚，比較公認的病因有胎盤淺著床和氧化應激[5,6]。目前的研究集中在免疫因素與子癇前期/子癇的相互關系上，發現T淋巴細胞亞群與人類組織相容性抗原DR(HLA-DR)與子癇前期發生發展有關[7,8]。因此，本研究觀察了重度子癇前期患者外周血T淋巴細胞亞群分布、HLA-DR陽性白細胞百分比變化，現將結果報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 將2014年3月～2015年12月入住聊城市人民醫院ICU的重度子癇前期患者30例作為觀察組，患者年齡(29.6±7.0)歲，孕(33.9±4.5)周。重度子癇前期診斷標準參照2002年美國婦產科醫師學會(ACOG)公布的妊娠期高血壓疾病的診斷指南標準[9]。以同期入院的30例正常妊娠婦女作為正常妊娠組，年齡(29.2±5.3)歲，孕(37.1±3.9)周；同時選擇18例健康未孕婦女作為對照組，年齡(26.8±2.6)歲；兩組婦女均無產科并發癥，無高血壓、糖尿病、心臟病、腎功能不全，近期未服用任何藥物，無感染，無過敏性疾病，無自身免疫疾病，無腫瘤。三組年齡無統計學差異。觀察組與正常妊娠組均以剖宮產結束妊娠。本研究經本院臨床倫理委員會批準，所有入組對象均簽署知情同意書。

1.2 外周血T淋巴細胞亞群比例、HLA-DR陽性白細胞百分比檢測 所有入組研究對象采集標本前均未服用免疫抑制藥物，于清晨8點消毒后于肘正中靜脈采血2 mL并置于肝素抗凝管，所取血樣均于4 h內進行檢測。取抗凝全血100 μL加入CD3-FITC、CD4-FITC和CD8-PE單克隆熒光抗體各10 μL混勻后避光常溫染色15 min，裂解紅細胞后離心棄上清，PBS重懸細胞離心棄上清后加鞘液上機檢測，計算CD4+、CD8+T淋巴細胞比例。取肝素抗凝血100 μL加入CD14-PE 10 μL和HLA-DR-FITC 10 μL避光常溫染色15 min，裂解紅細胞后離心棄上清，PBS重懸細胞離心棄上清后加鞘液上機檢測，計算外周血HLA-DR陽性白細胞百分比。

2 結果

三組外周血T淋巴細胞亞群分布比較見表1。觀察組、正常妊娠組、對照組HLA-DR陽性白細胞百分比分別為43.7%±12.7%、58.3%±13.9%、70.41%±11.3%，觀察組與正常妊娠組、對照組相比，P均<0.01。

表1 三組外周血T淋巴細胞亞群分布比較±s)

注：與正常妊娠組、對照組相比，▲P<0.05，★P<0.01。

3 討論

正常妊娠時，母體高度介導免疫耐受，母體外周血中淋巴細胞表達減少[10,11]。T淋巴細胞亞群是人體最重要的免疫防御系統組成部分之一，CD3+是T淋巴細胞表面表達的分化抗原，CD3+T細胞包括CD4+T淋巴細胞亞群(輔助性T淋巴細胞亞群)和CD8+T淋巴細胞亞群(抑制性T淋巴細胞亞群)。CD4+T淋巴細胞主要負責調節免疫反應活性,通過其分泌的淋巴因子增強和擴大免疫應答過程，誘導輔助性B細胞、殺傷性T淋巴細胞等免疫細胞共同發揮作用。CD8+T淋巴細胞主要抑制B細胞產生抗體，抑制細胞毒性T淋巴細胞的殺傷功能。正常機體中，CD4+T淋巴細胞和CD8+T淋巴細胞處于穩定的動態平衡，維持機體的免疫穩態，這種穩態被打破將會導致各種免疫損傷和免疫相關疾病。大量研究[12,13]證實，T淋巴細胞亞群平衡偏向于適度免疫抑制狀態對維持正常妊娠期母胎界面免疫平衡具有重要意義。本研究結果顯示，重度子癇前期孕婦CD3+T淋巴細胞比例與正常妊娠孕婦相比無明顯差異，CD4+T淋巴細胞比例較正常妊娠孕婦稍下降，CD8+T淋巴細胞比例較正常妊娠孕婦明顯升高，與以往部分研究[14～16]結果一致，但與秦彩娟[17]、鐘曉紅等[18]的研究結果有差異。正常妊娠女性的CD8+T淋巴細胞占優勢，使母體免疫系統被輕微抑制，子癇前期CD8+T淋巴細胞比例顯著增高、CD4+/CD8+降低，提示子癇前期的發病可能與T淋巴細胞亞群的平衡失調有關。CD4+/CD8+顯著下降異常激活B細胞,刺激體液免疫產生IgG等形成膜攻擊復合物,使補體系統處于激活狀態，裂解產物如C3a、C5a等增加，造成母體免疫平衡紊亂，對異體抗原的胎兒排斥反應增強，防護反應減弱。在大量異常細胞因子的作用下，母體血管內皮細胞產生損傷，表現為高血壓、蛋白尿等。

人類白細胞抗原(HLA)是由HLA基因復合物所編碼的一組調理特殊反應和異體排斥高多態性基因復合體，是反映機體免疫功能的敏感指標，抗原提呈細胞(APC)將異體抗原提呈給CD4+T淋巴細胞，表達于單核細胞、活化T淋巴細胞、B淋巴細胞、巨噬細胞等細胞的表面，通過不同機制啟動機體適應性免疫應答。妊娠是成功的“半自體”移植，從受精起5周左右即開始表達HLA抗原，胚胎20周免疫系統形成，通過合成免疫球蛋白發揮細胞免疫功能，誘導母體與胎兒之間產生免疫耐受，使胎兒躲避母體B淋巴細胞和NK細胞的免疫排斥，阻斷母胎之間的淋巴細胞通路，進而阻斷淋巴細胞介導的細胞毒作用和移植物抗宿主反應，從而維持正常妊娠。HLA-DR表達率過低會引發免疫功能紊亂，更甚者發生免疫麻痹。正常妊娠時HLA-DR適當表達，在胎盤著床過程中增強滋養細胞的浸潤作用，誘發免疫耐受，以利于滋養細胞免受母體的識別及攻擊，完成血管重塑。而子癇前期孕婦不能利用封閉抗體的保護作用，易遭受細胞毒性T淋巴細胞和NK細胞的攻擊，使胎兒遭受排斥[19]。HLA的表達不良參與了子癇患者的胎盤形成障礙，引起子宮螺旋小動脈血管重塑異常，導致胎盤缺血缺氧。故HLA-DR是與子癇前期發生發展密切相關的因素之一。Ogge等[20]研究表明子癇前期外周血單核細胞HLA-DR的水平與健康孕婦無明顯差異。呂連崢等[21]研究顯示子癇前期孕婦中間型單核細胞HLA-DR陽性表達率顯著高于健康孕婦。本研究結果發現，重度子癇前期患者外周血中HLA-DR陽性白細胞百分比顯著降低，說明子癇前期時母體免疫耐受能力下降，在母胎界面產生炎癥反應造成病理妊娠。滋養細胞耐受免疫識別及免疫攻擊的能力減弱，從而異常浸潤子宮螺旋動脈，造成胎盤淺植入，引起子癇的一系列病理生理變化。以往的研究多集中在母胎間HLA-D、HLA-G抗原共享率與子癇前期發生發展的關系上，對子癇前期患者單核細胞HLA-DR表達情況的研究較少，我們推測造成HLA-DR水平低下的原因主要為入選研究對象病情較重，且一部分研究對象入ICU前已發生多器官功能障礙綜合征，體內免疫平衡已嚴重失衡。

綜上所述，重度子癇前期患者外周血CD4+T淋巴細胞比例未見明顯變化，CD8+T淋巴細胞比例升高，HLA-DR占白細胞百分比降低。

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吳鐵軍(E-mail: tiejunwu@hotmail.com)

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B

1002-266X(2016)35-0080-03

2016-06-12)