宮頸癌組織Krüppel樣轉(zhuǎn)錄因子4表達(dá)變化及其意義

張玉虹，孫喜斌，劉曉娟，劉博，管超楠，邱波，李寶亮，焦桂青

(河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院，河北張家口 075000)

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宮頸癌組織Krüppel樣轉(zhuǎn)錄因子4表達(dá)變化及其意義

張玉虹，孫喜斌，劉曉娟，劉博，管超楠，邱波，李寶亮，焦桂青

(河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院，河北張家口 075000)

目的 觀察宮頸癌組織Krüppel樣轉(zhuǎn)錄因子4(KLF4)表達(dá)變化，并探討其意義。方法 選擇宮頸癌標(biāo)本121例份、慢性宮頸炎組織標(biāo)本35例份、正常宮頸組織標(biāo)本35例份。采用組織微陣列和免疫組織化學(xué)法檢測以上組織中的KLF4、Ki-67，通過電話及門診復(fù)查的方式對宮頸癌患者進(jìn)行隨訪，記錄患者無病生存期(PFS)、總生存期(OS)。采用Spearman秩相關(guān)分析宮頸癌組織中KLF4與Ki-67表達(dá)的關(guān)系；用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析OS、PFS與KLF4陽性表達(dá)的關(guān)系。結(jié)果 宮頸癌組織、慢性宮頸炎組織、正常宮頸組織中KLF4陽性表達(dá)率分別為26.44%、80.00%、91.43%，宮頸癌組織與慢性宮頸炎組織、正常宮頸組織比較，P均<0.05。宮頸癌組織中KLF4陽性表達(dá)率與Ki-67陽性表達(dá)率呈負(fù)相關(guān)(rs=-0.284，P<0.05)。宮頸癌病理分級越差，KLF4陽性表達(dá)率越低(P<0.05)；宮頸癌臨床分期越高，KLF4陽性表達(dá)率越低(P<0.05)。Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析發(fā)現(xiàn)，患者的OS、PFS與KLF4陽性表達(dá)有關(guān)(HR分別為0.682、0.521,P均<0.05)。結(jié)論 宮頸癌組織中KLF4低表達(dá)，與Ki-67表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，陽性表達(dá)率越高預(yù)后越好。

宮頸腫瘤；宮頸癌；Krüppel樣轉(zhuǎn)錄因子4；增殖細(xì)胞核抗原Ki-67

Krüppel樣轉(zhuǎn)錄因子(KLF)在不同腫瘤中功能不同，其中KLF4在腫瘤的發(fā)生與發(fā)展中具有重要作用[1～3]。但有關(guān)KLF4與宮頸癌的相關(guān)報(bào)道比較少見。增殖細(xì)胞核抗原Ki-67是反映組織中細(xì)胞增殖活性比較穩(wěn)定的特異性指標(biāo)，臨床上常用其來鑒別良惡性腫瘤或觀察惡性腫瘤程度。多項(xiàng)研究[4～6]顯示，Ki-67參與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程，并影響預(yù)后。本研究觀察了宮頸癌組織中KLF4表達(dá)變化，并分析其與Ki-67表達(dá)及患者預(yù)后的關(guān)系，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 選擇2012年1月～2015年1月我院病理科保存的宮頸癌標(biāo)本121例份，慢性宮頸炎標(biāo)本35例份，正常宮頸組織標(biāo)本35例份。121例宮頸癌患者均為鱗癌，年齡27～65(50.21±10.37)歲，高分化31例、中分化63例、低分化27例，F(xiàn)IGO分期Ⅰ期63例、Ⅱ期24例、Ⅲ期30例、Ⅳ期4例。慢性宮頸炎患者年齡25～61(50.54±9.81)歲。正常宮頸女性年齡27～65(50.21±10.37)歲。三者年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 宮頸組織KLF4、Ki-67檢測 篩選HE染色的病理切片，找出腫瘤組織中有代表性的區(qū)域，在相應(yīng)石蠟塊上作標(biāo)記。制作組織微陣列標(biāo)本，常規(guī)石蠟切片(厚4 μm)。石蠟切片脫蠟、水化，PBS沖洗3次，用EDTA煮沸高熱抗原修復(fù)3～5 min，PBS振蕩沖洗3次，置于45 ℃恒溫箱10 min;PBS沖洗3次，每次3～5 min；滴加羊血清，置于45 ℃恒溫箱10 min；去除血清，滴加一抗，4 ℃冰箱過夜；室溫下復(fù)溫30～40 min，取出用PBS振蕩沖洗3次，每次3～5 min；滴加增強(qiáng)劑，置于45 ℃恒溫箱20 min；取出后PBS沖洗3次,每次3～5 min，滴加二抗，置于45 ℃恒溫箱10 min；PBS振蕩沖洗3次，每次3～5 min，滴加DAB顯色液，于顯微鏡下觀察。KLF4主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)和少量細(xì)胞核，Ki-67表達(dá)于細(xì)胞核。結(jié)果判定采用半定量評分法，用染色強(qiáng)度結(jié)合陽性細(xì)胞百分比對結(jié)果進(jìn)行判定。染色強(qiáng)度無染色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，深褐色為3分；每個(gè)標(biāo)本取5個(gè)視野，每視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，陽性細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)百分比≤10%為0分，>10%～25%為1分，>25%～50%為2分，>50%為3分。以上兩項(xiàng)的乘積為0則為表達(dá)-，1～3為+，4～6為++，7～9為+++。將+、++、+++定為陽性，計(jì)算KLF4、Ki-67陽性表達(dá)率。

1.3 隨訪方法 通過電話及門診復(fù)查的方式對宮頸癌患者進(jìn)行隨訪，隨訪時(shí)間截止至2016年2月27日。記錄患者無病生存期(PFS，從完成治療后開始至腫瘤復(fù)發(fā)或進(jìn)展導(dǎo)致患者死亡的時(shí)間)、總生存期(OS，從完成治療后開始至死亡的時(shí)間)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件。各組織中KLF4、Ki-67陽性表達(dá)情況用例表示，比較采用χ2檢驗(yàn)；宮頸癌組織中KLF4與Ki-67表達(dá)的關(guān)系采用Spearman秩相關(guān)分析；OS、PFS與KLF4陽性表達(dá)的關(guān)系分析用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組織中KLF4、Ki-67表達(dá)比較 各組織中KLF4、Ki-67表達(dá)情況見表1。宮頸癌組織、慢性宮頸炎組織、正常宮頸組織中KLF4陽性表達(dá)率分別為26.44%(32/121)、80.00%(28/35)、91.43%(32/35)，Ki-67陽性表達(dá)率分別為67.77%(82/121)、34.29%(12/35)、28.57%(10/35)，宮頸癌組織與慢性宮頸炎組織、正常宮頸組織比較，P均<0.05。

表1 各組織中KLF4、Ki-67表達(dá)情況(例)

2.2 宮頸癌組織中KLF4與Ki-67的關(guān)系 Spearman秩相關(guān)分析結(jié)果顯示，宮頸癌組織中KLF4陽性表達(dá)率與Ki-67陽性表達(dá)率呈負(fù)相關(guān)(rs=-0.284，P<0.05)。見表2。

表2 宮頸癌組織中KLF4與Ki-67的關(guān)系(例)

2.3 KLF4陽性表達(dá)與宮頸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 宮頸癌組織中KLF4表達(dá)與年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)(P均>0.05)。宮頸癌病理分級越差，KLF4陽性表達(dá)率越低(P<0.05)；宮頸癌臨床分期越高，KLF4陽性表達(dá)率越低(P<0.05)。見表3。

表3 KLF4陽性表達(dá)與宮頸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系(例)

2.4 KLF4陽性表達(dá)與宮頸癌預(yù)后的關(guān)系 隨訪時(shí)間截止時(shí)患者存活73例、死亡48例，總生存率為60.33%，OS為2～49個(gè)月、中位OS為30.5個(gè)月，PFS為2～29個(gè)月、中位PFS為19.6個(gè)月，無病存活36例，生存率為29.75%。KLF4陽性表達(dá)率越高，患者OS、PFS越長，總生存率、無病生存率越高(P均<0.05)，見表4。Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析發(fā)現(xiàn)，患者的OS、PFS與KLF4陽性表達(dá)有關(guān)(HR分別為0.682、0.521,P均<0.05)。

表4 KLF4陽性表達(dá)與宮頸癌預(yù)后的關(guān)系

3 討論

KLF4是鋅指型轉(zhuǎn)錄因子，在人類組織中廣泛表達(dá)。KLF4基因定位于染色體9q31，是一個(gè)位于負(fù)鏈的單拷貝基因，其編碼蛋白含有513個(gè)氨基酸。KLF4蛋白是一個(gè)具有特定結(jié)合位點(diǎn)的轉(zhuǎn)錄因子，近年來在誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(iPS)研究領(lǐng)域備受關(guān)注，其參與細(xì)胞增殖、生長、分化和正常組織穩(wěn)態(tài)維持等生理活動(dòng)[7]。KLF4是一個(gè)雙重功能轉(zhuǎn)錄因子，其功能的發(fā)揮主要依賴于對下游靶基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用，根據(jù)不同的靶基因，通過不同的機(jī)制，KLF4既可對下游靶基因起到抑制作用，也可起到激活作用，日益成為腫瘤研究中的熱點(diǎn)分子。KLF4可以通過與不同的靶基因作用，在不同的腫瘤組織中發(fā)揮癌基因或抑癌基因兩種完全相反的功能[8]。研究[9～11]表明，KLF4在70%乳腺癌和口腔鱗癌組織中表達(dá)上調(diào)，而在胃癌、結(jié)直腸癌、卵巢癌等組織中表達(dá)下調(diào)，證明其在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展等多個(gè)環(huán)節(jié)發(fā)揮作用。體外研究[12]證明，KLF4過表達(dá)可抑制前列腺癌的形成、轉(zhuǎn)移和浸潤，降低其對裸鼠的致瘤性。KLF4蛋白結(jié)構(gòu)具有高度保守性，決定了KLF4是一個(gè)雙向調(diào)節(jié)的轉(zhuǎn)錄因子，也可結(jié)合自身的啟動(dòng)子激活自身表達(dá)。有研究[13]發(fā)現(xiàn)，KLF4可抑制食管癌組織survivin基因表達(dá)，且促進(jìn)癌細(xì)胞凋亡。

本研究結(jié)果顯示，KLF4在宮頸癌組織中的陽性表達(dá)率低于慢性宮頸炎組織、正常宮頸組織，可見KLF4在宮頸癌組織中低表達(dá)。這與相關(guān)研究結(jié)果一致。Ki-67可反映組織中細(xì)胞增殖活性，本研究以其作為對照，結(jié)果顯示Ki-67在宮頸癌組織中的陽性表達(dá)率高于慢性宮頸炎組織、正常宮頸組織，提示宮頸癌組織中Ki-67高表達(dá)。采用Spearman秩相關(guān)分析顯示宮頸癌組織中KLF4與Ki-67表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，進(jìn)一步證明KLF4參與了宮頸癌的發(fā)生發(fā)展過程。

本研究對KLF4表達(dá)與宮頸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系進(jìn)行分析，結(jié)果顯示宮頸癌病理分級越差、臨床分期越高，KLF4陽性表達(dá)率越低。KLF4主要表達(dá)于分化較好的宮頸癌組織中，隨著臨床分期的進(jìn)展KLF4陽性表達(dá)率降低，提示我們，宮頸癌的發(fā)生發(fā)展與KLF4表達(dá)下降或缺失關(guān)系密切，KLF4可能發(fā)揮抑癌作用。有研究[3]發(fā)現(xiàn)，KLF4在宮頸鱗癌組織中表達(dá)下調(diào)，低于正常宮頸組織與宮頸原位癌組織，并認(rèn)為KLF4通過上調(diào)p27Kip1蛋白表達(dá)使細(xì)胞周期停滯在G1/S期，從而發(fā)揮抑制宮頸癌細(xì)胞增殖的作用。

本研究通過隨訪發(fā)現(xiàn)，KLF4陽性表達(dá)率越高，患者OS、PFS越長，總生存率、無病生存率越高。經(jīng)Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析發(fā)現(xiàn)，患者的OS、PFS與KLF4陽性表達(dá)有關(guān)。提示KLF4可以作為預(yù)測宮頸癌預(yù)后的指標(biāo)，可作為宮頸癌早期診斷的一個(gè)候選基因，并對宮頸癌靶向治療方案的制定提供有利依據(jù)。

總之，KLF4在宮頸癌組織中低表達(dá)，與Ki-67表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，陽性表達(dá)率越高預(yù)后越好。

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河北省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究重點(diǎn)課題計(jì)劃項(xiàng)目(20160376)。

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.35.017

R737.3

B

1002-266X(2016)35-0054-03

2016-04-25)