歸菊祛白方劑煎煮條件優選

呂紅葉，呂海花，楊帆，劉偉

(1 山東省榮軍總醫院，濟南 250013；2 山東省中藥質量控制技術重點實驗室)

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歸菊祛白方劑煎煮條件優選

呂紅葉1，呂海花2，楊帆2，劉偉2

(1 山東省榮軍總醫院，濟南 250013；2 山東省中藥質量控制技術重點實驗室)

目的 優選歸菊祛白方劑的煎煮條件。方法 ①設A1、A2、A3組。每組各取7份歸菊祛白方置于煎藥鍋中，按料液比1∶10加水浸泡2 h，用武火加熱待開鍋后改用文火加熱，開鍋后計時，A1、A2、A3組分別煎煮20、30、40 min，均煎煮1次。濾取藥液。②設B1、B2、B3組。每組各取7份歸菊祛白方置于煎藥鍋中，B1、B2、B3組分別按料液比1∶8、1∶10、1∶15加水浸泡2 h，用武火加熱待開鍋后改用文火加熱，開鍋后計時，均煎煮30 min，煎煮1次。濾取藥液。③設C1、C2、C3組。每組各取7份歸菊祛白方置于煎藥鍋中，按料液比1∶10加水浸泡2 h，用武火加熱待開鍋后改用文火加熱，開鍋后計時，煎煮30 min，C1、C2、C3組分別煎煮1、2、3次。濾取藥液。用高效液相色譜法檢測上述各組藥液中補骨脂素和異補骨脂素。結果 在料液比1∶10、煎煮1次的條件下，煎煮30 min獲得的藥液中補骨脂素和異補骨脂素水平最高，與煎煮20、40 min者相比，P均<0.05。在煎煮30 min、煎煮1次的條件下，料液比1∶10煎煮獲得的藥液中補骨脂素和異補骨脂素水平最高，與料液比1∶8、1∶15者相比,P均<0.05。在料液比1∶10、每次煎煮30 min的條件下，煎煮1次獲得的藥液中補骨脂素和異補骨脂素水平最高，與煎煮2、3次者相比，P均<0.05。結論 煎煮時間、料液比和煎煮次數對煎煮歸菊祛白方所得藥液中補骨脂素和異補骨脂素水平有明顯影響。料液比1∶10、煎煮30 min、煎煮1次所得藥液中補骨脂素和異補骨脂素水平相對較高。

歸菊祛白復方；補骨脂；補骨脂素；異補骨脂素

歸菊祛白方由補骨脂、菟絲子、沙苑子、旱蓮草等中藥組成，主要用于白癜風的治療。補骨脂為豆科植物補骨脂的干燥成熟果實，具有溫腎助陽、納氣平喘、溫脾止瀉的功效，外用可消風祛斑[1]，其有效成分主要為補骨脂素和異補骨脂素。現代藥理研究表明，補骨脂具有免疫調節、抗炎、抗免疫的作用，對肝腎具有較強的靶向性[2，3]，臨床上主要用于治療腎虛腰酸、腎虛作喘、遺尿尿頻、腹痛泄瀉、白癜風、出血熱等[4，5]。中藥湯劑作為中藥最原始的劑型在中醫藥的發展中發揮著重要的作用，但其在煎煮過程中會受到諸多因素的影響，包括煎煮容器、藥材質量、煎煮時間、料液比等，這些因素直接影響藥液中有效成分的浸出量，進而影響中藥的治療效果[6，7]。2015年8～10月，我們觀察了煎煮時間、料液比和煎煮次數對煎煮歸菊祛白方所得藥液中補骨脂素和異補骨脂素水平的影響，優選歸菊祛白方劑的最佳煎煮條件。現報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 煎藥鍋(浙江愛仕達電器股份有限公司)；Agilent 1120高效液相色譜儀；Agilent DAD檢測器；Agilent Chemstation 工作站(美國安捷倫公司)；AE240分析天平分析天平(METTLER公司)；萬分之一電子天平(賽多利斯科學儀器北京有限公司)。甲醇(色譜純)；娃哈哈純凈水(杭州娃哈哈集團有限公司)；補骨脂素、異補骨脂對照品(山東省分析測試中心制備，純度≥98%)。歸菊祛白方組成：旱蓮草30 g，苦參30 g，女貞子10 g，菊花10 g，熟地 30 g，雞血藤 20 g，丹參 20 g，補骨脂 60 g，制首烏 10 g，黑芝麻 20 g，枸杞 10 g，甘草 10 g，川芎 10 g，沙苑子 30 g，當歸 30 g，菟絲子 30 g。

1.2 方法

1.2.1 煎煮時間優選 設A1、A2、A3組。每組各取7份歸菊祛白方置于煎藥鍋中，按料液比1∶10加水浸泡2 h，用武火加熱待開鍋后改用文火加熱，開鍋后計時，A1、A2、A3組分別煎煮20、30、40 min，均煎煮1次。煎煮后過濾藥液。取10 mL藥液，濃縮干燥后甲醇溶解并定容于25 mL容量瓶中，取上清液過0.45 μm微孔濾膜備用。

1.2.2 料液比優選 設B1、B2、B3組。每組各取7份歸菊祛白方置于煎藥鍋中，B1、B2、B3組分別按料液比1∶8、1∶10、1∶15加水浸泡2 h，用武火加熱待開鍋后改用文火加熱，開鍋后計時，均煎煮30 min，煎煮1次。煎煮后過濾藥液。取10 mL藥液，濃縮干燥后甲醇溶解并定容于25 mL容量瓶中，取上清液過0.45 μm微孔濾膜備用。

1.2.3 煎煮次數優選 設C1、C2、C3組。每組各取7份歸菊祛白方置于煎藥鍋中，按料液比1∶10加水浸泡2 h，用武火加熱待開鍋后改用文火加熱，開鍋后計時，煎煮30 min，C1、C2、C3組分別煎煮1、2、3次。煎煮后過濾藥液。取10 mL藥液，濃縮干燥后甲醇溶解并定容于25 mL容量瓶中，取上清液過0.45 μm微孔濾膜備用。

1.2.4 歸菊祛白方劑中補骨脂素和異補骨脂素檢測 采用高效液相色譜法。 色譜條件：YMC-Pack ODS-A (250×4.6 mmlD，5 m)，( B ) 乙腈-0.3%三乙胺 ( A )，梯度洗脫，檢測波長246 nm，流速1.0 mL/min，柱溫25 ℃，進樣體積50 L。對照品為補骨脂素和異補骨脂素的甲醇溶液，濃度均為0.02 mg/mL取上述對照品溶液，補骨脂素分別進樣5、10、15、25、30 、35 L，異補骨脂素分別進樣5、10、15、20、30 、35 L，繪制高效液相色譜圖，測定峰面積，以對照品進樣量為橫坐標(X)、峰面積為縱坐標(Y)繪制標準曲線，得2種標準樣品的回歸方程。補骨脂素回歸方程Y=2 450.1X-14.093，R2=0.999 8，線性范圍0.10～0.70 g；異補骨脂素回歸方程Y=1 685.9X-4.300，R2=0.999 8，線性范圍0.10～0.70 g。取上述各組藥液行高效液相色譜，進樣量50 L，測量補骨脂素和異補骨脂素峰面積，用標準曲線和回歸方程計算進樣藥液中補骨脂素和異補骨脂素的量。

2 結果

2.1 煎煮時間優選結果 A1、A2、A3組藥液中補骨脂素和異補骨脂素水平見表1。在料液比1∶10、煎煮1次的條件下，煎煮30 min獲得的藥液中補骨脂素和異補骨脂素水平最高，與煎煮20、40 min者相比，P均<0.05。

表1 A1、A2、A3組藥液中補骨脂素和異補骨脂素水平比較

注：與A1、A3組相比，*P<0.05。

2.2 料液比優選結果 B1、B2、B3組藥液中補骨脂素和異補骨脂素水平見表2。在煎煮30 min、煎煮1次的條件下，料液比1∶10煎煮獲得的藥液中補骨脂素和異補骨脂素水平最高，與料液比1∶8、1∶15者相比，P均<0.05。

2.3 煎煮次數優選結果 C1、C2、C3組藥液中補骨脂素和異補骨脂素水平見表3。在料液比1∶10、每次煎煮30 min的條件下，煎煮1次獲得的藥液中補骨脂素和異補骨脂素水平最高，與煎煮2、3次者相比，P均<0.05。

表2 B1、B2、B3組藥液中補骨脂素和異補骨脂素水平比較

注：與B1、B3組相比，*P<0.05。

表3 C1、C2、C3組藥液中補骨脂素和異補骨脂素水平比較

注：與C1、C3組相比，*P<0.05。

3 結論

白癜風是一種常見的后天性局限或泛發的色素脫失性皮膚病，發病率為0.5%～1.0%[8]，成人和兒童均可罹患，嚴重影響患者的美容與社交活動。發病表現為皮損區域表皮和(或)毛囊黑色素細胞的免疫性損傷，由此導致病變區域黑色素細胞脫失。其免疫發病機制與體液免疫、細胞免疫、細胞因子有關[9]。患者血清中存在抗黑色素細胞抗體，機體對自身的抗原產生免疫，通過免疫復合物產生補體和抗體介導的細胞毒作用，破壞黑色素細胞[10]。目前治療白癜風的方法多種多樣，其目的都是增加皮膚中黑色素細胞的數量，使皮膚顏色恢復正常。中藥作為一種重要的白癜風治療手段，近年來受到廣泛關注。其中，用于治療白癜風的單味中藥主要有補骨脂、白芷、紅花、丹參、旱蓮草、梔子、黃連、蛇床子、赤芍、川芎、菟絲子、刺蒺藜、夏枯草等[11～13]，成藥有消白顆粒、白凈沖劑等[14，15]。

歸菊祛白方作為一種治療白癜風的中藥湯劑，骨脂素和異補骨脂素是其主要的藥效成分。科學的煎制方法是保證其湯劑中有效成分含量的重要因素[16]。本研究通過控制料液比和煎煮次數觀察不同煎煮時間對煎煮歸菊祛白方所得藥液中補骨脂素和異補骨脂素含量的影響，結果顯示煎煮30 min所得藥液中補骨脂素和異補骨脂素的濃度最高，這也提示，煎藥時間過長，則會造成某些揮發性物質的逸散和有效成分的破壞。本研究通過控制煎煮時間為30 min、煎煮1次，觀察不同料液比對煎煮歸菊祛白方所得藥液中補骨脂素和異補骨脂素含量的影響，結果顯示，料液比為1∶10時所得藥液中的補骨脂素和異補骨脂素含量最高。料液比過高，中藥中的有效成分不能完全轉移到藥湯中，從而降低了藥效，料液比過低，患者飲用不便，而且影響療效。本研究結果顯示，煎煮歸菊祛白方的最佳料液比是1∶10。另外本研究在控制煎煮時間和料液比的情況下觀察煎煮次數對煎煮歸菊祛白方所得藥液中補骨脂素和異補骨脂素濃度的影響，結果顯示煎煮1次的藥液中補骨脂素和異補骨脂素的含量最高，增加煎煮次數并不能增加藥用成分含量。故筆者認為歸菊祛白方劑的最佳煎煮條件為，1∶10料液比，浸泡2 h后，煎煮30 min，煎煮1次。

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山東省民政廳科研計劃項目(MZ2015-0003)。

劉偉(E-mail： liuwei0074@163.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.35.011

R925

A

1002-266X(2016)35-0036-03

2015-12-22)