急性腦梗死患者血清miR-181c水平與認知功能受損的關系

張仕娟，劉月華，李乃坤，陳傳磊，孫錫波，李炳選

(1濰坊醫學院附屬益都中心醫院，山東青州262500；2青州市人民醫院)

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急性腦梗死患者血清miR-181c水平與認知功能受損的關系

張仕娟1，劉月華2，李乃坤1，陳傳磊1，孫錫波1，李炳選1

(1濰坊醫學院附屬益都中心醫院，山東青州262500；2青州市人民醫院)

目的 分析與急性腦梗死患者血清微小RNA-181c(miR-181c)水平與認知功能受損的關系。方法 收集158例急性腦梗死患者，其中梗死后存在認知功能受損67例(受損組)，認知功能正常91例(正常組)。采用實時熒光定量PCR技術檢測血清miR-181c，用多元線性回歸分析法分析認知功能受損發生的影響因素，以受試者工作特征曲線(ROC曲線)評估血清miR-181c預測認知功能受損的價值。結果 受損組及正常組血清miR-181c相對表達量為1.57±0.19、1.32±0.15，兩組比較P<0.05。多元線性回歸分析顯示，血清miR-181c、年齡、HbA1c、血Hcy、相關腦功能區梗死是急性腦梗死患者發生認知功能受損的獨立影響因素(P均<0.05)。ROC曲線分析顯示，當血清miR-181c截斷值為1.33時，其預測急性腦梗死患者發生認知功能受損的曲線下面積為0.813(95%CI：0.746～0.880)，靈敏度為91.0%，特異度為58.2%。結論 急性腦梗死后認知功能受損患者血清miR-181c水平升高，血清miR-181c水平升高是急性腦梗死后認知功能受損的獨立危險因素和預測指標。

急性腦梗死；微小RNA-181c；認知功能受損

急性腦梗死作為腦卒中的主要類型，具有發病率高、致殘率高、致死率高等特點，且呈現發病年齡年輕化趨勢[1]。認知功能受損是急性腦梗死后患者常見并發癥，發病率高，不利于患者康復，且對患者生存質量造成嚴重影響[2]。微小RNA(miRNA)作為廣泛存在于生物體內的高度保守的短小RNA，在調控細胞增殖、分化、凋亡及免疫、炎癥反應等多種生物學功能中發揮重要作用[3～5]。miR-181c是miRNA的重要類型，其過表達可導致線粒體復合物Ⅳ重構及功能紊亂[6]，增加活性氧的產生。文獻[7]報道，缺氧預處理可通過下調miR-181c表達而減少大鼠腦缺血損傷[7]。本研究對急性腦梗死患者血清miR-181c水平進行檢測，并探討其與急性腦梗死后認知功能障礙發生的關系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 納入標準：①符合第四屆全國腦血管病學術會議修訂的《各類腦血管疾病診斷要點》中急性腦梗死診斷標準[8]；②首次發病，發病時間<7 d；③年齡36～78歲。排除標準：①合并精神異常及昏迷者，腦梗死前已合并認知功能受損者；②合并有感染、惡性腫瘤、代謝性疾病、神經系統退行性病變者；③言語交流障礙及視聽功能障礙者；④入院第14天漢密爾頓抑郁量表(HAMD)評分>6分者。選取2014年3月～2015年4月益都中心醫院收治的符合標準的急性腦梗死患者158例，男83例、女75例，年齡(58.3±8.5)歲。發病后第28天利用中文版蒙特利爾認知評估量表(MoCA)[9]評估患者認知功能，其中MoCA評分≥26分91例(正常組)，<26分67例(受損組)。

1.2 血清miR-181c檢測方法 采用實時熒光定量PCR技術。所有患者于入院后次日抽取空腹靜脈血6 mL，室溫條件下，30 min內用離心機取3 500 r/min離心10 min，留取血清，保存于-30 ℃冰箱以備檢。取血清，加入細胞裂解液進行裂解后，用TRIzol總RNA提取試劑盒提取總RNA，利用紫外分光光度計檢測總RNA純度，取A260/A280≥1.80樣品作為合格樣品。用逆轉錄試劑盒將總RNA逆轉錄為模板單鏈cDNA，以cDNA為模板用PCR試劑盒進行PCR。引物序列：miR-181c上游引物為5′-AACAUUCAACCUGUCGGUGAGU-3′，下游引物為5′-UCACCGACAGGUUGAAUGUUUU-3′；U6上游引物為5′-TCAGTTTGCTGTTCTGGGTG-3′，下游引物為5′-CGGTTGGCTGGAAAGGAG-3′。PCR反應條件：92 ℃ 1 min，92 ℃ 30 s，56 ℃ 30 s，74 ℃ 30 s，連續進行40次循環。每個樣品均設置3個反應復孔，用2-ΔΔCt法計算血清miR-181c相對表達量。

2 結果

2.1 兩組血清miR-181c相對表達量比較 受損組及正常組血清miR-181c相對表達量為1.57±0.19、1.32±0.15，兩組比較P<0.05。

2.2 急性腦梗死患者發生認知功能受損的影響因素 結果顯示血清miR-181c、年齡、HbA1c、Hcy、相關腦功能區梗死是急性腦梗死患者MoCA評分的獨立影響因素(P均<0.05)。詳見表1。

表1 急性腦梗死患者發生認知功能受損的相關影響因素

2.3 血清miR-181c預測急性腦梗死患者發生認知功能受損的價值 ROC曲線分析顯示，當血清miR-181c截斷值為1.33時，其預測急性腦梗死患者發生認知功能受損的曲線下面積為0.813(95%CI：0.746～0.880)，其靈敏度為91.0%，特異度為58.2%。

3 討論

急性腦梗死占全部腦卒中的70%～85%，是由于腦部供血血管狹窄甚至閉塞引起腦供血不足所致?；颊咴诮獬芄Ｗ杌謴脱┖?，有45%～76%的患者會出現不同程度認知功能受損[10]，然而目前腦梗死后發生認知功能受損的相關機制尚未完全清楚。

研究表明[11]，miRNA與神經系統發育及功能密切相關。亦有研究指出[12]，急性腦梗死患者血清miRNA表達譜發生改變。常虹等[13]認為，急性腦梗死患者血清miR-151a-3p水平顯著升高，且與炎癥反應相關，有可能成為急性腦梗死診斷的潛在生物學標志物。Zhou等[14]研究指出，急性腦梗死患者血清miR-21和miR-24有望成為早期診斷急性腦梗死的潛在指標。研究[15]發現，miR-181c是在細胞核內完成編碼，在細胞質中進行組裝，最后移至線粒體并結合至mt-cox1 mRNA的3′非編碼片段上，對線粒體功能進行調控。miR-181c表達失調可抑制mt-cox1蛋白表達而使mt-cox2和mt-cox3蛋白表達上調，從而導致線粒體復合物Ⅳ重構及線粒體功能紊亂。亦有研究[16]指出，miR-181c是心肺復蘇后大鼠皮質區凋亡相關miRNA，可出現表達上調。研究[17]表明，急性腦梗死所致神經元凋亡與線粒體功能紊亂密切相關。而miR-181c參與并影響線粒體基因組蛋白編碼，過表達可影響線粒體功能，降低其表達可減少神經元損傷[18]。胡瀟方等[7]指出，缺氧預處理可降低卒中大鼠腦組織內miR-181c表達，而提高mt-cox1蛋白表達。

本研究顯示，認知功能受損的患者血清miR-181c相對表達量均高于認知功能正常患者。說明血清miR-181c水平可能與急性腦梗死所致神經元損傷嚴重程度有關，從而影響患者認知功能。本研究還顯示，血清miR-181c是急性腦梗死患者發生認知功能異常的獨立影響因素，說明除了目前已知的年齡、HbA1c和相關腦功能區梗死這些指標外，血清miR-181c水平亦可影響患者MoCA評分。其原因可能是miR-181c與缺血區神經元凋亡有關，miR-181c水平升高則預示神經元損傷嚴重。本研究還發現，急性腦梗死患者血清miR-181c在預測發生認知功能受損時，曲線下面積為0.813(95%CI：0.746～0.880)，當血清中miR-181c相對表達量為1.33時，靈敏度為91.0%，特異度為58.2%。說明血清miR-181c對急性腦梗死患者發生認知功能受損具有一定的預測價值，是潛在的預測急性腦梗死患者發生認知功能受損的生物學指標。

綜上所述，急性腦梗死患者血清miR-181c水平升高，且與腦梗死后認知功能受損有關；血清miR-181c水平升高是急性腦梗死后認知功能受損的獨立因素和預測指標，有望成為早期識別和預測急性腦梗死后認知功能受損的指標。

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山東省濰坊市科技局科研課題自助項目(2015WS109)。

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.38.033

R743.33

B

1002-266X(2016)38-0090-03

2016-05-12)