原發性肝細胞癌組織中NLK蛋白表達與患者臨床病理特征的關系

陳宏偉，李宗鋒，張紅娟，裴柳，劉洪偉，金亮，王東，李軍良

(秦皇島市第一醫院，河北秦皇島066000)

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原發性肝細胞癌組織中NLK蛋白表達與患者臨床病理特征的關系

陳宏偉，李宗鋒，張紅娟，裴柳，劉洪偉，金亮，王東，李軍良

(秦皇島市第一醫院，河北秦皇島066000)

目的 觀察原發性肝細胞癌(HCC)組織中nemo樣激酶(NLK)蛋白的表達，并探討其與患者臨床病理特征的關系。方法 以自身配對法分別留取HCC患者腫瘤切除后肝癌及癌旁肝組織各136例，采用免疫組化法檢測NLK蛋白，分析NLK蛋白表達與HCC臨床病理特征的關系。結果 在HCC及癌旁肝組織NLK蛋白陽性表達率分別為96.32%、5.15%，兩者比較P<0.01；HCC組織中NLK蛋白表達與腫瘤Edmondson-Steiner分級(P=0.002)、腫瘤直徑(P=0.022)、結節數目(P<0.001)有關，但與患者其他臨床病理參數不相關(P均﹥0.05)。結論 在HCC組織中NLK蛋白表達明顯升高，NLK可能在HCC的發生發展過程中起重要作用。

原發性肝細胞癌；絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶超家族；nemo樣激酶

Nemo樣激酶(NLK)屬于絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶超家族成員，是細胞周期蛋白依賴性激酶和絲裂原活化蛋白激酶/胞外信號調節激酶同源性成員之一[1]。盡管NLK蛋白在原發性肝細胞癌(HCC)組織中的表達情況已有所研究[2]，但有關NLK蛋白與HCC患者臨床病理特征的關系，尚未見相關文獻報道。本研究觀察了HCC及配對癌旁肝組織中NLK蛋白的表達水平，并分析其與患者臨床病理特征的關系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2008年4月～2010年8月秦皇島市第一醫院收治的136例HCC患者，術前均未行放化療，術中留取肝癌及癌旁肝組織，術后均經病理科2位以上的資深醫師確診。其中，男108例，女28例；年齡31～76歲，中位年齡45.0歲；腫瘤直徑>5 cm 36例，腫瘤直徑≤5 cm 100例；多發腫瘤結節60例，單發腫瘤結節76例；Edmondson-SteinerⅠ級39例，Ⅱ級63例，Ⅲ、Ⅳ級34例；HBsAg陰性29例，HBsAg陽性107例；無肝硬化76例，合并肝硬化60例；116例無轉移，20例有轉移(包括門靜脈癌栓、淋巴結轉移及遠處轉移)。本研究由醫院倫理委員會審核批準，并征得患者及家屬知情同意。

1.2 NLK蛋白檢測方法 將肝癌及癌旁肝組織標本用石蠟包埋，4 μm連續切片。免疫組化染色采用SP法，試劑盒購于北京中杉金橋公司，嚴格按照試劑盒說明書操作。NLK蛋白陽性定位于細胞質和細胞核，以出現棕黃或棕褐色顆粒作為陽性反應。陽性細胞百分數>75%、>50%～75%、>25%～50%、≤25%分別計4、3、2、1分，染色程度強染色、中等強度染色、弱染色、無染色分別計4、3、2、1分。兩項得分相乘>4為陽性表達，≥9為高表達，≤8為低表達[3]。

1.3 統計學方法 采用SPSS18.0統計軟件。計數資料以率表示，比較采用χ2檢驗、Fisher確切概率法。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HCC癌組織及癌旁肝組織中NLK蛋白表達比較 NLK在HCC癌組織及癌旁肝組織陽性表達率分別為96.32%(131/136)、5.15%(7/136)，兩者比較差異有統計學意義(χ2=226.167，P<0.01)。

2.2 NLK蛋白表達與HCC患者臨床病理特征的關系 NLK蛋白表達與HCC患者Edmondson-Steiner分級(P=0.002)、腫瘤直徑(P=0.022)和腫瘤結節數目(P<0.001)有關，而與其他的臨床病理因素無關。見表1。

3 討論

NLK是一種進化上保守的促分裂原活化蛋白激酶類似的激酶，也是經典的Wnt/β-catenin信號通路中的一個非常重要的調節因子[4]。最近研究表明，NLK表達失調在多種人類惡性腫瘤的發生、發展和預后評估方面都有重要作用，有望成為腫瘤基因治療的新靶點。NLK在多條通路中起著不同的調控作用，在人類腫瘤發生發展過程中也扮演著不同的角色。在一些人類腫瘤中，NLK發揮抑癌基因作用。一項關于神經膠質瘤的研究[5]顯示，低級別的星形細胞瘤(Ⅱ級)中NLK表達明顯高于間變性星形細胞瘤(Ⅲ級)和多形性膠質母細胞瘤(Ⅳ級)，低表達NLK患者預后較差；Cox多因素分析顯示，NLK可作為神經膠質瘤患者獨立的預后指標。同時發現，神經膠質瘤細胞株U87MG、U251、LN229和T98G過表達NLK后Caspase-3表達水平也升高，表明NLK通過活化Caspase-3而誘導神經膠質瘤細胞凋亡。Lv等[4]研究發現，與正常肺組織相比，NLK在非小細胞肺癌組織中的表達明顯降低，且與非小細胞肺癌的病理組織學分級、臨床分期、淋巴結轉移與否、Ki-67表達明顯相關；并且，證實NLK可通過抑制Wnt信號通路下游靶基因c-myc、Cyclin D1而參與非小細胞肺癌的調控。Huang等[6]研究發現，NLK在乳腺癌組織中的表達低于正常乳腺組織，且與c-myb、Ki-67的表達呈負相關。在MCF-7乳腺癌細胞株中，NLK可能與c-myb直接結合并使其降解，引起其靶基因c-myc和Bcl-2的表達下調，從而阻滯細胞周期的進程，誘導乳腺癌細胞凋亡。Han等[7]證實，NLK在結腸癌組織中的表達明顯低于相應癌旁組織，NLK低表達與結直腸患者淋巴結轉移、靜脈侵襲、肝轉移、TNM分期明顯相關，且NLK低表達者預后較差。Yasuda等[8]研究證實，過表達NLK能夠誘導結腸癌DLD-1細胞凋亡，抑制細胞增殖。Zhang等[1]研究表明，NLK表達在卵巢癌組織中低于正常卵巢組織，且隨著卵巢癌病理組織學分級增加，NLK表達也逐漸降低；而且，NLK表達與卵巢癌細胞的增殖呈負相關，能夠增加化療藥順鉑誘導的卵巢癌細胞的凋亡。Emami等[9]研究表明，與正常的前列腺上皮和原發性前列腺癌相比，前列腺癌轉移灶中NLK的核定位表達程度明顯減弱；而且，過表達NLK能夠抑制前列腺癌細胞增殖，誘導其凋亡，尤其對雄激素受體陽性的前列腺癌細胞作用更加明顯。

表1 NLK蛋白表達與HCC患者臨床病理 參數的關系

另一方面，NLK在一些腫瘤中發揮癌基因作用。Chen等[10]研究證實，NLK陽性的鼻咽癌患者無瘤生存率和總體生存率更低，而復發率更高。Zhang等[11]發現，在口腔鱗癌CAL-27細胞中，敲低內源性NLK表達能夠明顯抑制CAL-27細胞的增殖及集落形成能力，阻滯細胞周期從G0/G1期到S期的轉變。Li等[12]研究表明，NLK在膽囊癌組織中的表達高于正常膽囊組織，且NLK過表達與膽囊癌的組織學分級、TNM分期、神經周圍侵襲與否密切相關。而且，高表達NLK的膽囊癌患者預后更差。Tan等[13]也證實，在膽囊癌細胞中沉默NLK基因可以抑制其增殖、腫瘤形成和遷移能力。本研究表明，NLK蛋白在HCC癌組織中的表達明顯高于癌旁肝組織，且與HCC腫瘤直徑、Edmondson-Steiner分級以及腫瘤結節數有關。可能與NLK高表達能上調Cyclin D1和CDK2轉錄水平，從而促進腫瘤細胞增殖有關[2]。因此，NLK蛋白可能在HCC的發生發展過程中扮演著重要角色，有望成為HCC治療的新靶點。

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河北省秦皇島市科學技術研究與發展計劃項目(201502A158)。

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.38.032

R735.7

B

1002-266X(2016)38-0088-03

2016-05-10)