DC-CIK細胞聯合全身靜脈化療治療晚期結直腸癌伴彌漫性肝轉移的研究

李威威，張海萍，吳 敏

(湖北省天門市第一人民醫院，湖北 天門 431700)

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DC-CIK細胞聯合全身靜脈化療治療晚期結直腸癌伴彌漫性肝轉移的研究

李威威，張海萍，吳 敏

(湖北省天門市第一人民醫院，湖北 天門 431700)

目的 觀察DC-CIK細胞聯合全身靜脈化療治療晚期結直腸癌伴彌漫性肝轉移的療效。方法 選取晚期結直腸癌伴彌漫性肝轉移患者77例，依據治療方式的不同將患者分為2組，對照組38例行FOLFOX化療，21 d為1個周期，6個周期為1個療程；聯合組39例行FOLFOX化療聯合DC-CIK細胞治療，DC-CIK細胞治療每月1次，至患者死亡或放棄治療。檢測2組治療前后T細胞亞群(CD3+、CD4+、CD8+)、Th1細胞因子(IFN-γ、TNF-α、IL-2)、血清腫瘤標記物(CEA、CA242、CA199)水平，統計2組近期療效、不良反應情況，門診復查及電話隨訪記錄患者生存情況，隨訪截止時間2015年8月31日。結果 治療后聯合組CD3+、CD8+水平及IFN-γ、TNF-α、IL-2水平均顯著高于治療前(P均<0.05)，而CD4+水平無顯著變化(P>0.05)；對照組CD3+、CD4+、CD8+水平及IFN-γ、TNF-α、IL-2水平均顯著低于治療前(P均<0.05)；聯合組CD3+、CD8+水平及IFN-γ、TNF-α、IL-2水平均顯著高于對照組(P均<0.05)，2組CD4+水平比較差異無統計學意義(P>0.05)。治療后2組CEA水平較治療前均明顯降低(P均<0.05)，且聯合組明顯低于對照組(P<0.05)；2組CA199、CA242水平與治療前比較差異無統計學意義(P均>0.05)。2組有效率比較差異無統計學意義(P>0.05)；聯合組疾病控制率明顯高于對照組(P<0.05)，不良反應發生率明顯低于對照組(P均<0.05)。聯合組生存時間最短116 d，最長者超過16個月，中位生存時間8.5個月；對照組生存時間最短29 d，最長者超過12個月，中位生存時間6個月。 Log-rank檢驗顯示，聯合組生存率顯著高于對照組(P<0.05)。結論 DC-CIK細胞聯合全身靜脈化療是治療晚期結直腸癌伴彌漫性肝轉移較為有效的方案，可明顯提高疾病控制率，降低不良反應發生率，延長生存期。

晚期結直腸癌；DC-CIK細胞；全身靜脈化療；彌漫性肝轉移

Key words: advanced colorectal cancer; DC-CIK cells; intravenous chemotherapy; diffuse liver metastases

結直腸癌是中老年人群較為常見的消化系統惡性腫瘤，患者早期多無典型臨床表現，超過30%的患者確診時已發展至晚期(臨床分期Ⅲ～Ⅳ期)[1]，40%以上的患者發病5年即出現轉移，喪失最佳手術時機的患者正逐年增多，因此，尋求安全有效的內科療法成為眾多醫學同仁的共同責任[2]。筆者觀察了DC-CIK細胞聯合全身靜脈化療方案治療晚期結直腸癌伴彌漫性肝轉移患者的療效，現將結果報道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選取我院2010年1月—2014年1月收治的晚期結直腸癌伴彌漫性肝轉移患者77例，均符合《中國結直腸癌診療規范(2015版)》相關診斷標準[3]，且原發癌灶切除后經活組織病理檢查進一步確診為結直腸癌；術前腹部CT、MRI等影像學資料均顯示肝臟存在彌漫性轉移灶；患者功能狀態評分(PS)[4]≤2分。排除合并有心、肝、腦、腎等嚴重基礎疾病者，合并結直腸癌以外的其他腫瘤者，合并有感染性疾病、內分泌系統或免疫系統異常者，哺乳及妊娠期婦女，近6個月持續服用免疫抑制劑或激素類藥物者。其中男44例，女35例；年齡34～73(52.48±13.85)歲。依據治療方式的不同將患者分為聯合組和對照組，2組年齡、性別、腫瘤部位、體質量指數、病理類型、分化程度比較差異均無統計學意義(P均>0.05)，具有可比性。見表1。

1.2 治療方法 對照組給予FOLFOX方案化療：奧沙利鉑(江蘇恒瑞醫藥股份有限公司，國藥準字H20000337)85 mg/m2靜脈滴注，第1天；亞葉酸鈣(江蘇恒瑞醫藥股份有限公司，國藥準字H20000584)200 mg/m2靜脈滴注，第1天；5-氟尿嘧啶(上海旭東海普藥業有限公司，國藥準字H31020593)400 mg/m2靜脈注射，第1—2天；5-氟尿嘧啶600 mg/m2靜脈滴注(22 h滴完)，第1—2天。21 d為1個周期，6個周期為1個療程。聯合組在化療前2 d采集50 mL左右的外周血單核細胞(PBMCs)，用于培養DC-CIK細胞(14～16 d)。于采血后的第3天給予FOLFOX方案化療(具體同對照組)。培養細胞符合免疫功能、細菌、真菌等檢測后，用0.9%氯化鈉溶液洗滌，然后將其與含2%白蛋白的100 mL 0.9%氯化鈉溶液混合，均分成2份回輸給患者，1次/月，至患者死亡或放棄治療。

表1 2組基線資料比較

1.3 觀察指標 2組于化療前后定期行血常規、肝腎功能、T細胞亞群(CD3+、CD4+、CD8+)、Th1細胞因子(IFN-γ、TNF-α、IL-2)、血清腫瘤標記物(CEA、CA242、CA199)、腹部CT等檢查，統計2組治療前及治療1個療程后的T細胞亞群、Th1細胞因子、血清腫瘤標記物水平及近期療效、不良反應情況；門診復查及電話隨訪記錄患者生存情況，隨訪截止時間2015年8月31日。

1.4 療效評定標準[5]完全緩解：癌灶完全消除持續30 d；部分緩解：最長徑癌灶之和減少≥30%持續30 d；進展：最長徑癌灶之和增加≥20%持續30 d；穩定：介于進展與部分緩解之間。有效=完全緩解+部分緩解；疾病控制=有效+穩定；每2個化療周期評定1次，如首次評定為完全緩解或部分緩解，30 d后再次評定以確認。

1.5 統計學方法 采用SPSS 20.0軟件包對收集的數據進行統計學分析。計數資料用百分率(%)表示，組間比較采用卡方檢驗；計量資料用均數±標準差表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗，組內比較采用配對t檢驗；繪制2組患者的Kaplan-Meier生存曲線，生存率比較采用Log-rank檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 2組治療前后T細胞亞群水平比較 治療前2組T細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+水平比較差異均無統計學意義(P均>0.05)。治療后聯合組CD3+、CD8+水平均顯著高于治療前(P均<0.05)，而CD4+無顯著變化(P>0.05)；對照組CD3+、CD4+、CD8+水平均顯著低于治療前(P均<0.05)；且聯合組CD3+、CD8+水平均顯著高于對照組(P均<0.05)，而2組CD4+水平比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 2組治療前后T細胞亞群水平比較±s,%)

2.2 2組治療前后Th1細胞因子水平比較 治療前2組IFN-γ、TNF-α、IL-2水平比較差異均無統計學意義(P均>0.05)。治療后聯合組IFN-γ、TNF-α、IL-2水平均明顯高于治療前(P均<0.05)，對照組IFN-γ、TNF-α、IL-2水平均顯著低于治療前(P均<0.05)，且聯合組各指標水平均顯著高于對照組(P均<0.05)。見表3。

表3 2組治療前后Th1細胞因子水平比較

2.3 2組治療前后血清腫瘤標記物水平比較 治療前2組CEA、CA199、CA242水平比較差異均無統計學意義(P均>0.05)。治療后2組CEA水平均明顯低于治療前(P均<0.05)，且聯合組顯著低于對照組(P<0.05)；2組CA199、CA242水平均無明顯變化(P均>0.05)。見表4。

2.4 2組近期療效比較 2組有效率比較差異無統計學意義(P>0.05)，聯合組疾病控制率明顯高于對照組(P<0.05)。見表5。

表4 2組治療前后血清腫瘤標記物水平比較±s)

表5 2組近期療效比較 例(%)

注：①與對照組比較，2=1.143，P=0.094；②與對照組比較，2=8.547，P=0.012。

2.5 2組不良反應發生情況 聯合組不良反應發生率明顯低于對照組(P<0.05)。見表6。

2.6 2組生存情況 聯合組患者生存時間最短116 d，長者超過16個月，中位生存時間8.5個月；對照組患者生存時間最短29 d，長者超過12個月，中位生存時間6個月。Log-rank檢驗顯示，聯合組患者的生存率顯著高于對照組(2=5.361，P=0.039)，見圖1。

3 討 論

結直腸癌起病隱匿，加之我國較低的健康宣教力度和醫療知識普及程度，半數以上的患者因結直腸癌嚴重影響其生活質量時才被迫就醫，這大大降低了手術治療的意義。目前，臨床應用較多的以規范化療為中心的保守治療雖能通過殺傷一定比例的腫瘤細胞來降低腫瘤負荷、緩解臨床癥狀，但難以徹底清除微小病灶，且多數化療對患者的免疫系統、神經系統、血液系統等有著較多不利的影響[6]。因此，探求科學可靠的非手術療法有重要臨床意義。

表6 2組不良反應發生情況 例(%)

注：①與對照組比較，2=11.028，P=0.007。

圖1 2組生存曲線比較

近些年，隨著腫瘤分子生物學研究的逐層深入，以DC-CIK細胞過繼免疫療法為代表的生物治療因適應證廣、不良反應輕微而成為腫瘤界研究的熱點。樹突狀細胞(dendritic cell,DC)在抵抗腫瘤細胞免疫逃逸機制的同時發揮抗原提呈功能，成熟的DC多通過Ⅱ型組織相容性抗原途徑將腫瘤抗原加工后提呈給T淋巴細胞，從而發揮免疫功能。郭杰等[7]指出，多數結直腸患者存在DC不同程度的功能缺陷或數量減少，回輸體外誘導成熟的DC對改善機體免疫功能和腫瘤免疫逃逸、促進腫瘤清除等有重要意義。細胞因子誘導的殺傷細胞(cytokine-induced killers,CIK)是誘導臍帶血或外周血中的PBMCs而制得的異質細胞群，它多以CD3+CD8+為效應細胞，不僅能在體外快速分裂增殖，而且具有較高的T淋巴細胞抗瘤活性及自然殺傷細胞廣譜殺瘤能力。另外，CIK還可通過分泌大量IFN-γ、TNF-α、IL-2等Th1類細胞因子來改變腫瘤微環境，從而增強免疫效應細胞的殺瘤作用。侯國偉等[8]認為，DC、CIK細胞共同培養具有相互促進作用，不僅能促進二者的增殖及成熟，而且可提高DC的激發免疫應答能力和CIK的細胞毒性作用。黃香等[9]研究顯示，化療一方面通過損傷調節性T細胞來降低其對免疫應答的抑制，另一方面，它對腫瘤細胞的殺傷可誘發機體免疫應答，提高免疫療法的療效。本研究結果顯示，對照組化療后T細胞亞群、Th1細胞因子水平均顯著降低，這說明化療對機體的免疫細胞因子及效應細胞具有殺傷作用，與翁海光等[10]的結論一致。而聯合組治療后CD3+、CD8+、Th1細胞因子水平反而升高，這提示DC-CIK細胞具有提高抗腫瘤免疫功能、改善化療所致免疫抑制等作用，與劉光藝[11]的結論相吻合。

美國ASCO指南指出[12]，CEA可作為結直腸癌療效評估、病情檢測的強有力指標，它比大多數單一指標的檢測更具有說服力，當影像學資料缺乏典型病灶時，2次及以上(檢測間隔時間超過60 d)CEA檢測連續升高可判定疾病進展。本研究結果顯示，2組治療后CEA水平均明顯低于治療前，且聯合組明顯低于對照組，這與楊喬[13]觀點一致。本研究還顯示，2組治療后有效率接近，但聯合組的疾病控制率、生存率均明顯高于對照組，不良反應發生率明顯低于對照組，這與芮韜等[14]、尹良偉等[15]的研究并不矛盾，但該2項研究中的CD8+與CD4+百分比的變化、遲發性腹瀉的發生情況與本研究有所偏差，考慮與樣本大小、檢測方法的精度、患者體質等的差異有關，仍需具備大樣本、高精度檢測手段進一步證實。

綜上所述，DC-CIK細胞聯合全身靜脈化療在控制病情、減少不良反應、改善預后等方面效果顯著，是晚期結直腸癌伴彌漫性肝轉移較為有效的治療方式，可考慮推廣運用。

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Study on DC-CIK cells combined with intravenous chemotherapy for advanced colorectal cancer with diffuse hepatic metastasis

LI Weiwei, ZHANG Haiping, WU Min

(Tianmen First People’s Hospital, Tianmen 431700, Hubei, China)

Objective It is to observe the curative effect of DC-CIK cells combined with intravenous chemotherapy for advanced colorectal cancer with diffuse hepatic metastasis. Methods 77 cases of advanced colorectal cancer with diffuse liver metastases were divided into two groups according to the treatment of different ways. 38 cases in control group were treated with line FOLFOX chemotherapy, 21 days for a cycle, 6 cycles for a course of treatment. 39 cases in combined group were treated with line FOLFOX chemotherapy combined with DC-CIK cell treatment, DC-CIK cells treatment for once a month until the patient died or gave up treatment. The levels of T cell subsets (CD3+, CD4+, CD8+), intracellular Th1 cytokines (IFN-γ, TNF-α, IL-2), and serum tumor markers (CEA, CA242, CA199) were detected and recorded in two groups before and after treatment. The short-term efficacy and adverse reactions of the two groups were summarized, the patient's survival situation were recorded by outpatient review and telephone follow up. The follow-up deadline was 2015/8/31. Results After treatment, the levels of CD3+, CD8+, IFN-γ, TNF-α and IL-2 in combined group were significantly higher than before treatment (allP<0.05), but the level of CD4+had no obvious change (P>0.05); the levels of CD3+, CD4+, CD8+, IFN-γ, TNF-α, IL-2 were significantly lower than before treatment (allP<0.05); the levels of CD3+, CD8+, IFN-γ, TNF-α and IL-2 in combined group were significantly higher than those in control group (allP<0.05), but there was no significant difference in CD4+between the both groups (P>0.05). The levels of CEA in two groups were significantly lower than before treatment (allP<0.05), and there was significant difference between the both groups (P<0.05); there was no significant difference in CA199 and CA242 of both groups before and after treatment (allP>0.05). There was no significant difference in efficiency between the 2 groups (P>0.05), the control rate of the combined group was significantly higher than that of the control group (P<0.05), the incidence of adverse reactions was significantly lower than that of the control group (P<0.05). The survival time of the combined group was 116 days, the longest in more than 16 months, the median survival time was 8.5 months; the survival time of the control group was 29 days, the longest in more than 12 months, the median survival time was 6 months. The survival rate of the combined group was significantly higher than that of the control group (P<0.05). Conclusion DC-CIK cells combined with intravenous chemotherapy is an effective method for the treatment of advanced colorectal cancer with diffuse liver metastasis, it can significantly improve the disease control rate, reduce the incidence of adverse reactions, and prolong survival time.

李威威，女，主治醫師，研究方向為腫瘤的臨床治療。

湖北省自然科學基金項目(2012KFC143)

10.3969/j.issn.1008-8849.2016.18.002

R735.3

A

1008-8849(2016)18-1942-04

2016-01-10