高血壓性心功能不全患者中性粒細胞、T淋巴細胞中CyP-A與CyP-B水平表達的臨床意義

王群立,黃 燕

(江蘇省常州市第一人民醫院,江蘇 常州 213000)

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高血壓性心功能不全患者中性粒細胞、T淋巴細胞中CyP-A與CyP-B水平表達的臨床意義

王群立,黃 燕

(江蘇省常州市第一人民醫院,江蘇 常州 213000)

目的 研究高血壓性心功能不全患者中性粒細胞、T淋巴細胞中CyP-A與CyP-B水平表達的臨床意義。方法 選取原發性高血壓(2～3級)住院患者120例，按照伴發心臟疾病程度的不同分為3組：高血壓無心臟病組(Ⅰ組，38例)、高血壓伴發輕度高血壓性心臟病(Ⅱ組，心功能為Ⅰ和Ⅱ級，41例)、高血壓伴發中重度高血壓性心臟病(Ⅲ組，心功能為Ⅲ和Ⅳ級，41例)，另外選取同期經檢查確定健康人員40例為健康組。觀察4組患者的心臟超聲指標情況、血清中炎癥因子水平與抗氧化的能力，應用反轉錄-聚合酶鏈式反應法以及蛋白質免疫印跡法檢測4組患者中性粒細胞、T淋巴細胞中的CyP-A與CyP-B水平以及mRNA、蛋白表達情況。結果 心臟超聲檢查顯示Ⅱ組和Ⅲ組的左房內徑、室間隔厚度、舒張末期左室內徑、收縮末期左室內徑均較健康組、Ⅰ組明顯增大(P均<0.05)，而LVEF值均較健康組、Ⅰ組明顯下降(P均<0.05)。Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組患者血清中ET-1、TNF-α、血管緊張素Ⅱ、介白素-1β水平均較健康組明顯上升(P均<0.05)，而T-AOC水平較健康組明顯下降(P均<0.05)；Ⅱ組、Ⅲ組各炎癥因子水平均明顯高于Ⅰ組(P均<0.05)，而T-AOC水平則明顯低于Ⅰ組(P均<0.05)。Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組患者T淋巴細胞以及中性粒細胞中CyP-A與CyP-B mRNA表達、蛋白表達水平均較健康組明顯增高(P均<0.05)。結論 對于原發性高血壓2～3級患者，臨床應早期降低血清中的CyP-A與CyP-B水平，對減少原發性高血壓所致的心臟功能損傷具有重要臨床意義。

心功能不全；親環素；高血壓；心臟功能損傷

親環素(cyclophilins,CyP)是近幾年來臨床研究較多的一種多功能蛋白家族，以中性粒細胞與T淋巴細胞中含量最高，其中CyP-A與CyP-B是親環素中最為重要的兩種，其在血清中的含量和心腦血管疾病發病率有著緊密的關聯[1]。通常，人類機體內的CyP-A與CyP-B的含量是穩定的，其主要功能是幫助大分子發生結構解體，促進蛋白質的折疊。同時，CyP-A與CyP-B還能夠在機體細胞外面作為一種細胞之間傳訊分子發揮作用，與心肌室肥厚、心室重建以及高血壓過氧化損害關系緊密。本組研究應用反轉錄-聚合酶鏈式反應法(RT-PCR)與蛋白質免疫印跡法(Western blot)測定心功能不全患者外周血中性粒細胞以及T淋巴細胞中的CyP-A與CyP-B水平，以研究二者在臨床慢性心力衰竭發生、發展中的作用機制。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選取我院心內科2010年7月—2014年6月收治的原發性高血壓(2～3級)住院患者120例，按照患者伴發心臟疾病程度的不同分為3組：①高血壓無心臟病組(Ⅰ組)，共38例，其中男21例，女17例，年齡48～76(62.2±12.3)歲；②高血壓伴發輕度高血壓性心臟病(Ⅱ組)，心功能分級(NYHA)為Ⅰ和Ⅱ級，共41例，其中男22例，女19例，年齡47～78(63.8±10.5)歲；③高血壓伴發中重度高血壓性心臟病(Ⅲ組)，NYHA分級為Ⅲ和Ⅳ級，共41例，其中男23例，女18例，年齡48～78(65.7±8.6)歲。另外，在我院體檢中心選取經檢查確定健康人員40例為健康組，其中男22例，女18例，年齡45～79(68.3±8.1)歲。4組年齡、性別比較差異無統計學意義(P>0.05)，可比性好。

1.2 相關標準 ①原發性高血壓診斷是根據我國在2010年發布的高血壓防治指南中的標準[2]，即患者在靜息狀態下且不同日測量得到的3次收縮壓值≥140 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)和/或者舒張壓值≥90 mmHg；高血壓2～3級的臨床標準：收縮壓值≥160 mmHg和/或舒張壓值≥100 mmHg。②高血壓性心臟疾病診斷標準是原發性高血壓疾病診斷滿5年的患者合并下列中的1項：心臟彩色多普勒超聲檢查發現左心擴大；胸部X線影像檢查發現左心擴大；心電圖檢查顯示左室肥大或者左心室高電壓。③高血脂癥診斷根據我國成年人血脂異常防治指南(2007版)中的標準，血清總膽固醇(TC)≥5.18 mmol/L，低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)≥3.37 mmol/L。④NYHA分級標準：Ⅰ級，患者的體能活動未受到限制，日常的活動中無癥狀；Ⅱ級，患者的體能活動受到輕度制約，日常的活動中就可發生癥狀，休息狀態下無癥狀；Ⅲ級，患者體能活動受到明顯的制約，日常輕微活動就出現明顯癥狀，休息狀態下仍然無癥狀出現；Ⅳ級，患者無法進行任何日常活動，休息狀態下也有相關癥狀出現。

1.3 方法

1.3.1 血液樣本采集 入組患者采血時間均在早上8：00—10：00，血液采集之前24 h患者須清淡飲食，避免攝入脂肪、糖分以及蛋白質含量高的食物，采血前晚須禁食8 h以上。采血液采集后，取全血5 mL運用低溫低速離心機，以4 000 r/min轉速進行血清分離，離心的半徑值為3 cm。分離后將血清放在離心管內，以-80 ℃保存，用來測定血清學的有關指標。余下的血清加入小劑量肝素，4 ℃冷藏，待采集T淋巴細胞與中性粒細胞。

1.3.2 血液中性粒細胞、T淋巴細胞的采集 血清10 mL、淋巴細胞分腦液6 mL以及Hanks液10 mL充分混合均勻后，用低溫低速離心機2 000 r/min 進行離心，時間為20 min，離心半徑值為3 cm，得單核細胞層與粒細胞層。取單核細胞層放在聚乙烯管中，加4 mL的Hanks液，充分混合均勻，以1 500 r/min轉速再次進行離心，時長10 min，去除上清，再重復2次上述離心操作后，放在37 ℃的保溫箱中，靜置時間為2 h。而后，采取10%濃度的小牛血清培養液進行3次灌洗，最后洗脫液里就含有大量T淋巴細胞。粒細胞層內溶入2 mL 0.45%氯銨溶液，混合均勻，以1 500 r/min轉速進行離心，時長10 min，去除上清，用Hanks液進行3次洗滌，即可得到大量中性粒細胞。

1.3.3 彩色多普勒血流顯像診斷 超聲檢查由專業人員操作，檢查內容主要為LVEF、左房內徑、左室收縮末期內徑、左室舒張末期內徑及室間隔的厚度等。其中左心室后壁以及室間隔的厚度均超過9 mm判定為增厚；左室內徑女性大于50 mm、男性大于55 mm判定為左室擴大。LVEF降低至≤50%為左心收縮功能減低。

1.3.4 心電圖與胸X射線片的檢查 心電圖檢查采取12導聯；胸X射線片檢查采取后前位與左側位。

1.3.5 炎癥因子指標和總抗氧化能力(T-AOC)的測定 炎癥因子指標包括腫瘤壞死因子(TNF-α)、血管緊張素Ⅱ、內皮素1(ET-1)、白細胞介素-1β(IL-1β)、CyP-A與CyP-B，測定采用酶聯免疫吸附實驗法。

1.3.6 mRNA與蛋白質表達 mRNA采用RT-PCR法測定，蛋白質采用Western blot法測定。

2 結 果

2.1 4組心臟超聲檢查指標比較 Ⅰ組左房內徑、室間隔厚度、舒張末期左室內徑、收縮末期左室內徑以及LVEF等指標與健康組比較，差異均無統計學意義(P均>0.05)；Ⅱ組和Ⅲ組的左房內徑、室間隔厚度、舒張末期左室內徑、收縮末期左室內徑均較健康組明顯增大(P均<0.05)，而LVEF較健康組明顯下降(P<0.05)；Ⅱ組與Ⅲ組各指標比較差異均無統計學意義(P均>0.05)。見表1。

表1 4組心臟超聲檢查結果比較±s)

注：①與健康組比較，P<0.05；②與Ⅰ組比較，P<0.05。

2.2 4組炎癥因子水平及T-AOC比較 Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組ET-1、TNF-α、血管緊張素Ⅱ、IL-1β水平均較健康組明顯上升(P均<0.05)，而T-AOC較健康組明顯下降(P均<0.05)；Ⅱ組、Ⅲ組各炎癥因子水平均明顯高于Ⅰ組(P均<0.05)，而T-AOC明顯低于Ⅰ組(P均<0.05)。見表2。

2.3 4組血清中CyP-A及CyP-B水平比較 Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組血清CyP-A與CyP-B水平均明顯高于健康組(P均<0.05)；Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組間比較差異無統計學意義(P均>0.05)。見表3。

表2 4組炎癥因子水平及T-AOC比較

注：①與健康組比較，P<0.05；②與Ⅰ組比較，P<0.05。

2.4 4組T淋巴細胞以及中性粒細胞CyP-A與CyP-B mRNA表達比較 Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組T淋巴細胞以及中性粒細胞CyP-A及CyP-B mRNA表達水平均比健康組明顯增高(P均<0.05)。見表4。

表3 4組血清CyP-A與CyP-B水平比較

注：①與健康組比較，P<0.05。

表4 4組T淋巴細胞以及中性粒細胞CyP-A與CyP-B mRNA表達比較

注：①與健康組比較，P<0.05。

2.5 4組T淋巴細胞以及中性粒細胞CyP-A與CyP-B蛋白表達比較 Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組T淋巴細胞以及中性粒細胞CyP-A及CyP-B蛋白質表達水平均較健康組明顯增高(P均<0.05)。見表5。

表5 4組T淋巴細胞以及中性粒細胞CyP-A及CyP-B蛋白表達比較±s)

注：①與健康組比較，P<0.05。

3 討 論

臨床心功能不全主要因為多方面因素對心臟產生影響致使出現諸如排血量嚴重不足、排血的功能下降等一系列病理特征[3]。近年來，我國高血壓的臨床病發率不斷上升，而導致高血壓性心功能不全的發生率也在不斷上升，至2012年，該類患者已經超過1 300萬。在心力衰竭患者人群中，2年病死率達37%，6年病死率可高達82%，其病死率已經超過常見的一些惡性腫瘤[4]。因而，臨床對原發性高血壓所致的心臟功能損傷進行早期干預的意義重大。

在CyP家族中，CyP-A與CyP-B是其中較為重要的兩種，二者均與機體細胞中的炎性因子以及血管細胞因子有著緊密的關聯。在機體出現血管受損以及氧化應激的狀態，CyP-A及CyP-B在體內的水平則有明顯的上升。而CyP-A與CyP-B水平的上升，則會促進受損因子聚攏于炎癥病發部位，從而致使機體內的IL-1β、ET-1以及TNF-α等指標水平出現異常，另外也會促進內皮細胞的快速增殖以及遷移，從而導致機體的抗氧化能力出現下降。臨床對CyP-A與CyP-B的深入性研究起步較晚，Satoh[5]研究發現親環素中的S蛋白可能在心腦血管病的發生、發展過程中起著至關重要的作用。而Zuern等[6]對227例心功能不全患者檢測血清中的CyP-A時發現，患者血清中的CyP-A水平較正常水平顯著提高，這可能和心力衰竭患者機體異常的炎性反密切有關，并且因此推測出CyP-A可以作為一個心功能不全的獨立高危因素。然而，由于心功能不全的病因有很多，包括病毒性心肌炎、高血壓、冠心病等，均能夠引發心功能不全，因而不同臨床分型，特點也可能不同。基于這一點，本研究著眼于高血壓性心功能不全患者體內CyP-A與CyP-B的蛋白與MRNA表達，并分析與CyP-A及CyP-B有關的氧化能力和抗氧化能力，探尋高血壓性心功能不全患者機體中CyP-A與CyP-B的特點與對疾病的作用機制。結果顯示，Ⅰ組、Ⅱ組及Ⅲ組血清中CyP-A與CyP-B水平均顯著高于健康組，但Ⅱ組與Ⅲ組比較差異無統計學意義；T細胞與中性粒細胞中，Ⅰ組、Ⅱ組及Ⅲ組CyP-A與CyP-B mRNA、蛋白表達也同樣顯著高于健康組，而Ⅱ組與Ⅲ組比較差異無統計學意義。此外，Ⅱ組、Ⅲ組患者的各炎癥因子水平、T-AOC均明顯異常于Ⅰ組。提示CyP-A與CyP-B水平增高有可能成為一個發生心功能不全的危險因素。然而，本研究還存一些不足，如樣本量小、未能夠完全排除患者個體因素等，期待在以后的研究中作進一步的完善。

總之，在高血壓患者以及高血壓性心功能不全患者T細胞和中性粒細胞中，CyP-A與CyP-B都有較高水平，二者可成為心功能不全病情進展的重要危險因素。同時，對于原發性高血壓2～3級患者，臨床應早期降低血清中的CyP-A與CyP-B含量，對減少原發性高血壓所致的心臟功能損傷具有重要臨床意義。

[1] 張鷗，張維君，馬涵英. 高血壓性心力衰竭的預防與治療[J]. 中國醫刊，2012，47(7)：6-9

[2] 中國高血壓防治指南修訂委員會. 中國高血壓防治指南2010[J]. 中華心血管病雜志，2011，39(7)：579-616

[3] 郭靜，孔一慧，李為民. 心力衰竭.腎上腺素能受體相關炎癥機制的研究進展[J]. 中華老年醫學雜志，2012，31(3)：257-260

[4] 邢作英，王永霞，朱明軍. 慢性心力衰竭流行病學研究現狀及其病因[J]. 中華實用診斷與治療雜志，2012，26(10)：937-938

[5] Satoh K. Cyclophilin A in cardiovascular homeostasis and diseases[J]. Tohoku J Exp Med,2015,78(235):1-15

[6] Zuern CS,Muller KA,Seizer P,et al. Cyclophilin A predicts clincal outcome in patients with congestive heart failure undergoing endomyocardial biopsy[J]. Eur J Heart Fail,2013,43(15):176-184

10.3969/j.issn.1008-8849.2016.31.028

R541.6

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1008-8849(2016)31-3493-03

2016-04-25