UPA和MMP-9在子宮內膜癌組織中的表達情況及臨床意義

龐 嵐，鄭彥強，時志民，孫秀敏，劉石萍，楊俊英，張 婕

(1.河北省邯鄲市婦幼保健院，河北 邯鄲 056000；2.河北工程大學，河北 邯鄲 056000；3.河北省邯鄲市中心醫院，河北 邯鄲 056001；4.五礦邯邢礦業有限公司職工總醫院，河北 邯鄲 056000；5.河北省成安縣人民醫院，河北 成安 056000)

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UPA和MMP-9在子宮內膜癌組織中的表達情況及臨床意義

龐 嵐1，鄭彥強1，時志民2，孫秀敏1，劉石萍3，楊俊英4，張 婕5

(1.河北省邯鄲市婦幼保健院，河北 邯鄲 056000；2.河北工程大學，河北 邯鄲 056000；3.河北省邯鄲市中心醫院，河北 邯鄲 056001；4.五礦邯邢礦業有限公司職工總醫院，河北 邯鄲 056000；5.河北省成安縣人民醫院，河北 成安 056000)

目的 觀察子宮內膜癌組織中尿激酶型纖溶酶原激活劑(UPA)和金屬蛋白酶-9(MMP-9)的表達情況及與病理學指標的關系，探討UPA和MMP-9表達水平的相關性。方法 收集子宮內膜癌組織68例和正常子宮內膜組織32例，采用微波EliVisionTM免疫組織化學方法觀察UPA和MMP-9在子宮內膜癌組織和正常子宮內膜組織中的表達水平，Spearman相關分析法分析二者有無相關性，分析二者表達與子宮內膜癌臨床病理指標之間的關系。結果 子宮內膜癌中UPA和MMP-9表達定位于細胞漿；UPA和MMP-9在子宮內膜癌組織的陽性表達率明顯高于正常子宮內膜組織(P<0.05)。Spearman相關分析檢測UPA和MMP-9表達水平存在正相關性(r=0.261,P=0.000)；UPA和MMP-9高表達均與組織學分級、cTNM分期、淋巴結轉移有關(P均<0.05)。結論 UPA和MMP-9的表達在子宮內膜癌的發生、發展和淋巴結轉移中發揮重要作用，提示臨床檢測二者有可能為評估子宮內膜癌病變程度提供參考。

子宮內膜癌組織；UPA蛋白；MMP-9蛋白；EliVisionTM免疫組化

女性生殖系統的惡性腫瘤包括宮頸癌、卵巢癌和子宮內膜癌，其中子宮內膜癌發病率占到女性惡性腫瘤的第二位，且發病率呈逐年上升趨勢[1]。子宮內膜癌的浸潤轉移是其預后較差的主要原因，在腫瘤浸潤轉移過程中有多種因子共同參與，尿激酶型纖溶酶原激活劑(UPA)和金屬蛋白酶-9(MMP-9)通過降解細胞外基質(ECM)和促進血管生成等作用，在腫瘤浸潤轉移中發揮作用。本研究采用免疫組織化學SP法檢測了子宮內膜癌組織中UPA和MMP-9的表達情況，探討二者在子宮內膜癌的發生、發展的作用，現將結果報道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選取2011年1月—2014年12月邯鄲市婦幼保健院和邯鄲市中心醫院收集的68例子宮內膜鱗癌組織蠟塊為實驗組，年齡56～71歲，中位年齡62.9歲；絕經年齡47～62歲，中位年齡55歲。根據國際婦產科聯盟(FIGO，2000)病理分期標準：Ⅰ期22例，Ⅱ期17例，Ⅲ期20例，Ⅳ期9例；組織學分級：高分化(G1)38例，中分化(G2)22例，低分化(G3)8例；病理類型：子宮內膜樣腺癌52例，腺鱗癌2例，透明細胞癌7例，漿液性乳頭狀腺癌7例；肌層浸潤深度：肌層浸潤深度≥1/2 28例，1/2 以內及無肌層浸潤40例；淋巴結轉移：術后證實有淋巴結轉移33例，無淋巴結轉移35例。另選癌旁正常子宮內膜癌組織標本32例作為對照組。

1.2 試劑與方法 S-P試劑盒、DAB顯色液及兔抗人UPA單克隆抗體、兔抗人MMP-9多克隆抗體。采用微波EliVisionTM免疫組織化學方法,先行抗原修復，抗體為兔抗人UPA、兔抗人MMP-9(1∶100)，取已知切片作為陽性對照，以PBS緩沖液代替一抗作為陰性對照，DAB顯色，蘇木素復染，鏡下觀察UPA和MMP-9在子宮內膜癌組織和正常子宮內膜組織中的表達水平。Spearman相關分析法分析UPA和MMP-9有無相關性，并分析二者表達與子宮內膜癌臨床病理指標之間的關系。

1.3 結果判斷標準 以在陽性細胞內出現棕黃色顆粒為陽性,UPA陽性表達定位于細胞漿，MMP-9陽性表達定位于細胞膜和細胞漿。每張切片均隨機觀察5個高倍視野(×400)，陽性細胞數<5%為(-)，5%～25%為(+)，26%～50%為()，>50%為()。+～為陽性表達。

1.4 統計學方法 數據采用SPSS 19.0軟件進行統計學處理，計數資料采用2檢驗,相關性分析用Spearman等級相關分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 UPA和MMP-9在正常子宮內膜組織和子宮內膜癌組織中的表達 UPA蛋白在正常子宮內膜組織中表達率為15.63%(5/32)，在子宮內膜癌組織中表達率為70.59%(48/68)，二者比較差異有統計學意義(P<0.05)；MMP-9蛋白在正常子宮內膜組織中表達率為25.00%(8/32)，在子宮內膜癌癌中的表達率為80.88%(55/68)，二者比較差異有統計學意義(P<0.05)。

2.2 UPA和MMP-9在子宮內膜癌組織中的表達與臨床病理參數的關系 UPA和MMP-9陽性表達與組織學分級、cTNM分期、淋巴結轉移均有關(P均<0.05)。見表1。

表1 UPA和MMP-9在子宮內膜癌組織中的表達與臨床病理參數的關系 例

2.3 UPA和MMP-9二者表達的相關性分析 UPA和MMP-9在子宮內膜癌中的表達呈明顯正相關(r=0.261，P<0.05)。見表2。

表2 UPA和MMP-9在子宮內膜癌組織中表達的相關性分析 例

3 討 論

UPA是一種絲氨酸蛋白水解酶，具有激活纖溶酶原(PLG)作用，在組織改建、細胞遷移、腫瘤侵襲轉移及腫瘤血管形成等病理、生理過程中發揮重要作用[2]。腫瘤發生侵襲性成長基本需要幾步來完成，首先要對ECM進行黏附，接著對ECM進行降解，最后腫瘤細胞通過ECM后遷徙到新的部位[3]。其中降解ECM是關鍵，多種蛋白酶能降解ECM，UPA是重要的ECM降解蛋白酶，除了可以直接降解ECM外，作為激活物還可以通過激活纖溶酶原轉化成纖溶酶；還可以激活金屬蛋白酶，刺激血管生成。UPA具有的生物學作用最終目的是降解ECM成分。研究也證實，在乳腺癌、胃癌、大腸癌、非小細胞肺癌等惡性腫瘤組織中UPA呈現高表達，UPA參與腫瘤的發生、發展的同時也參與了這些腫瘤的浸潤、轉移[4-7]。本研究也證實，UPA在子宮內膜癌組織中呈高表達，提示其在子宮內膜癌組織中有促癌作用；且UPA在子宮內膜癌中的表達與cTNM分期及淋巴結轉移相關，在分化程度較差、cTNM分期晚、淋巴結轉移的病例中UPA呈明顯高表達，其水平高低預示著子宮內膜癌的惡性程度，原因為UPA與其生物學功能密切相關，通過降解腫瘤組織的ECM和促進血管生成等作用實現其促癌功能。故檢測UPA在子宮內膜癌組織中的水平，可以正確認識和判斷子宮內膜癌的進展情況，對臨床工作具有一定實用價值。

金屬蛋白酶家族(MMPs)包括26個成員，金屬蛋白酶在破壞腫瘤細胞侵襲的組織學屏障中扮演主要角色，其中MMP-9是MMPs家族中最重要的一員，由巨噬細胞、纖維母細胞、內皮上皮細胞分泌產生，其作用為通過降解、破壞ECM中Ⅳ、Ⅴ、Ⅸ、Ⅺ型膠原，破壞ECM和基底膜的結構，使腫瘤細胞可以沿著受損的基底膜向周圍組織浸潤[8-10]；還可以降低腫瘤細胞之間的黏附性，使腫瘤細胞容易脫離原發灶，提高腫瘤細胞的浸潤和游走能力，最終達到惡性腫瘤浸潤及轉移的目的[11-12]。同時MMP-9在降解ECM過程中釋放促血管生成因子，提高血管內皮生長因子(VEGF)水平，促進血管生成，血管生成是腫瘤生長、浸潤和轉移的基本條件，在為其提供途徑同時也為腫瘤提供養分等新陳代謝。本研究結果發現其表達與子宮內膜癌發生關系密切，且與cTNM分期、淋巴結轉移密切相關，提示MMP-9在子宮內膜癌的淋巴轉移途徑中產生了重要作用，其高表達直接證明預后差，值得臨床醫生關注。

相關研究顯示，在某些腫瘤組織中UPA和MMP-9相互作用，共同降解腫瘤組織的ECM，UPA激活纖溶酶原轉化為纖溶酶，MMP-9重要的功能是被激活后形成膠原酶，二者在腫瘤組織中相互配合，這種配合稱為基因協同作用假說[13-15]?；騾f同作用假說認為在腫瘤形成、發展和轉移過程中至少存在2個基因的異常激活。本研究結果顯示，在子宮內膜癌組織中UPA和MMP-9呈顯著正相關，說明在子宮內膜癌中MMP-9與UPA呈現高度的一致性，在腫瘤發生、發展和轉移過程中起到協同作用，共同參與降解ECM。對兩者的檢測有助于不良預后(侵襲和轉移)的早發現。

綜上所述，UPA和MMP-9的表達在子宮內膜癌的發生、發展和淋巴結轉移中發揮重要作用，提示臨床檢測二者有可能為評估子宮內膜癌病變程度提供參考，為今后對抗子宮內膜癌治療及預防轉移及復發提供了一個新思路。

[1] 蔡東閣,蘇文秀,趙曉桂,等.子宮內膜癌組織中GDF-15、P-MTOR蛋白的表達及相關性[J].現代腫瘤醫學,2016,24(7):1110-1114

[2] 鄒存華,王宏,宋冬冬,等.P38MAPK信號通路與uPA在卵巢癌細胞及組織中表達的相關性[J].中國癌癥雜志,2015,25(8):572-578

[3] 尚潤澤，戴斌,王德盛.uPA/uPAR系統在腫瘤中作用的研究進展[J].世界華人消化雜志,2014，22(9):1235-1240

[4] 董歡,林燕蘋,應學翔,等.乳腺癌組織中uPA和PAI-1的表達及其臨床意義[J].癌癥,2013,33(4):361-367

[5] 盧慶樂,田玫玲,趙貞香.VEGF與UPA系統在胃癌病情發展的相關性研究[J].國際檢驗醫學雜志,2013,34(17):2261-2262

[6] 東星,王晶,于波.P-P38和UPA蛋白在大腸癌中的表達及臨床意義[J].現代腫瘤醫學,2014,22(10):2374-2377

[7] 鐘安樸,許維毅,曹勇.補腎化瘀解毒方對中晚期非小細胞肺癌化療患者uPA及PAI-1的影響[J].中華中醫藥雜志,2016,31(1):316-318

[8] 沙春艷.老年宮頸鱗癌組織中COX-2和MMP-9的表達變化及意義[J].中國老年學雜志,2016,36(2):638-639

[9] 郝艷艷.MMP-9在肺癌患者血清及胸水中的表達[J].現代中西醫結合雜志,2010,19(6):673-674

[11] 曹婧.食管鱗癌組織中MMP-2和MMP-9的表達及臨床意義[J].腫瘤基礎與臨床,2016,29(1):23-25

[12] 張敏,宋殿榮,曹保利,等.SDF-1、CXCR4、MMP-9及VEGF在子宮內膜異位癥組織中的表達及意義[J].現代中西醫結合雜志,2016,25(11):1147-1520

[13] 寇有為,邵華,王強.mmp-9、UPA及CD34與胃癌侵襲和轉移及其相關性[J].現代腫瘤醫學,2011,19(8):1601-1605

[14] 李詩杰,胡軍紅,謝永錚,等.MMP-9和UPA聯合檢測對胰腺癌預后的價值[J].國際腫瘤學雜志,2015,42(3):177-181

[15] 劉剛,關英華,任小強,等.輸尿管癌中MMP-9、UPA的表達及與預后的關系[J].臨床與實驗病理學雜志,2012,28(10):1086-1090

時志民，E-mail：shizhimin1980@163.com

河北省邯鄲市科技計劃重點項目(1523108076-18)

10.3969/j.issn.1008-8849.2016.32.014

R737.33

B

1008-8849(2016)32-3577-03

2016-05-10