組織因子及其抑制物在妊娠期高血壓疾病患者胎盤中的表達及臨床意義

王曉丹，韓翠欣，班 玲，劉雅麗，劇蘊慧，梁 霞，田 甜

(河北省石家莊市第二醫(yī)院，河北 石家莊 050051)

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組織因子及其抑制物在妊娠期高血壓疾病患者胎盤中的表達及臨床意義

王曉丹，韓翠欣，班 玲，劉雅麗，劇蘊慧，梁 霞，田 甜

(河北省石家莊市第二醫(yī)院，河北 石家莊 050051)

目的 探討妊娠期高血壓疾病患者胎盤組織中組織因子(TF)及其抑制物——組織因子途徑抑制物(TFPI)的表達變化，探討妊娠期高血壓疾病的發(fā)生機制。方法 采用免疫組化法檢測妊娠期高血壓患者、子癇前期患者及正常妊娠婦女胎盤組織中TF和TFPI的水平。結(jié)果 與正常妊娠組相比，妊娠期高血壓組胎盤表達TF有升高趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；與正常妊娠組和妊娠期高血壓組相比，子癇前期組胎盤表達TF明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。妊娠期高血壓組與正常妊娠組相比，TFPI表達有下降趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；子癇前期組胎盤表達TFPI明顯下降，與正常妊娠組和妊娠期高血壓組相比差異均有統(tǒng)計學意義(P均<0.05)。結(jié)論 TF、TFPI值的變化及其比例失調(diào)導(dǎo)致了胎盤內(nèi)凝血功能的異常，可能與妊娠期高血壓疾病的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。

妊娠期高血壓疾病；組織因子；組織因子途徑抑制物

妊娠期高血壓疾病是妊娠期特有的疾病，主要表現(xiàn)為不同程度的血壓升高和蛋白尿。臨床發(fā)病率為5%～12%，子癇前期和子癇嚴重影響母嬰健康，是孕產(chǎn)婦和圍生兒死亡的主要原因之一。組織因子(TF)和組織因子途徑抑制物(TFPI)是體內(nèi)重要的凝血和抗凝血因子，妊娠期間，胎盤、子宮蛻膜層大量表達TF，在孕早期胚胎著床以及產(chǎn)后止血等方面發(fā)揮著重要的作用；TFPI為內(nèi)源性血漿抗凝蛋白，可通過抑制凝血因子Xa(FXa)和FVⅡa抑制凝血功能，國內(nèi)外研究認為，胎盤凝血功能異常與產(chǎn)科多種并發(fā)癥如子癇前期、早產(chǎn)、胎兒生長受限和胎膜早破等密切相關(guān)[1-4]。本研究用免疫組化方法探討不同類型妊娠期高血壓疾病患者胎盤組織中TF和TFPI的變化，從胎盤角度探討妊娠期高血壓疾病的發(fā)生機制。現(xiàn)報道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選擇2012年1月—2014年12月在我院分娩的妊娠期高血壓疾病患者87例，其中妊娠期高血壓組45例，子癇前期組42例，診斷標準按《婦產(chǎn)科學》[5]標準執(zhí)行。同時選取在我院足月分娩的孕婦48例作為正常妊娠組，采集標本和實驗過程均征得患者同意并簽署知情同意書。3組均排除有慢性高血壓疾病史、心血管疾病病史、糖尿病、癌癥、胎膜早破、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等自身免疫性疾病、出血性疾病者。3組年齡比較差異無統(tǒng)計學意義(P均>0.05)，見表1。

1.2 標本采集 胎盤娩出5 min內(nèi)，在母面近臍帶根部切取約1.0 cm×1.0 cm×1.0 cm大小，無鈣化、出血的組織。經(jīng)生理鹽水沖凈后置4%多聚甲醛溶液中4 ℃固定，固定組織常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片,供免疫組織化學檢測用。

表1 正常妊娠組、妊娠期高血壓組和子癇前期組臨床特征

注：①與正常妊娠組比較，P<0.05；②與正常妊娠組和妊娠期高血壓組比較,P<0.05。

1.3 試驗方法 采用免疫組化法檢測正常產(chǎn)婦、妊娠期高血壓患者和子癇前期患者胎盤組織中TF、TFPI的水平。兔抗人TF多克隆抗體、鼠抗人TFPI單克隆抗體購自美國圣克魯斯生物技術(shù)公司。

1.4 實驗結(jié)果判定 顯微鏡下觀察切片中滋養(yǎng)細胞免疫染色情況，TF和TFPI染色陽性反應(yīng)為細胞有棕黃色顆粒沉著。根據(jù)陽性細胞顯色強度進行分級：0分為細胞內(nèi)無染色或染色不清或呈均勻一致淡黃色，與背景一致(陰性)；1分為少量淡黃色顆粒，明顯高于背景(弱陽性)；2分為較多深棕色顆粒(陽性)；3分為大量深棕色或褐色顆粒(強陽性)。同時，根據(jù)染色陽性細胞百分率進行分級：陽性細胞數(shù)0～1%=0、陽性細胞數(shù)1%～10%=1、陽性細胞數(shù)10%～50%=2、陽性細胞數(shù)50%～80%=3、陽性細胞數(shù)80%～100%=4。IHS=陽性細胞顯色強度×陽性細胞百分率[6]。

2 結(jié) 果

2.1 妊娠期高血壓組、子癇前期組和正常妊娠組胎盤TF比較 妊娠期高血壓組與正常妊娠組相比，胎盤TF表達差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。與正常妊娠組和妊娠期高血壓組相比子癇前期組胎盤TF表達明顯增加(P均<0.05)。見圖1～3。

圖1 TF在正常妊娠組胎盤中的表達

2.2 妊娠期高血壓組、子癇前期組和正常妊娠組胎盤TFPI比較 妊娠期高血壓組與正常妊娠組相比，胎盤TFPI的表達差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。子癇前期組胎盤表達TFPI降低，與正常妊娠組和妊娠期高血壓組相比差異有統(tǒng)計學意義(P均<0.05)。見圖4～6及表2。

圖2 TF在妊娠期高血壓組胎盤中的表達

圖3 TF在子癇前期組胎盤中的表達

圖4 TFPI在正常妊娠組胎盤中的表達

圖5 TFPI在妊娠期高血壓組胎盤中的表達

圖6 TFPI在子癇前期組胎盤中的表達

項目正常妊娠組妊娠期高血壓組子癇前期組TF評分3.64±0.32①4.21±0.68①8.79±1.89TFPI評分4.87±0.76①3.36±0.59①1.88±0.13

注：①與子癇前期組比較，P<0.05。

3 討 論

妊娠期高血壓疾病以高血壓、蛋白尿、抽搐、昏迷、心腎功能衰竭、胎盤早剝、早產(chǎn)，甚至發(fā)生母嬰死亡為臨床特點。該病病因不清，公認的兩階段病因?qū)W說認為：第一階段，在遺傳易感性及免疫耐受失調(diào)等多因素作用背景下，滋養(yǎng)細胞侵襲不足，胎盤淺著床，導(dǎo)致胎盤缺氧、缺血，釋放多種胎盤因子；第二階段：胎盤源性因子大量異常釋放入母血，引起母體血管內(nèi)皮功能紊亂、全身性炎癥應(yīng)答加強，繼而出現(xiàn)高血壓、蛋白尿等子癇前期癥狀。而隨著妊娠終止，胎盤娩出，母體癥狀及實驗室改變迅速恢復(fù)正常，故學者普遍認為妊娠期高血壓疾病可能是一個胎盤源性疾病。大量研究發(fā)現(xiàn)：和正常孕婦相比，妊娠期高血壓疾病患者體內(nèi)處于異常高凝狀態(tài)，患者胎盤以及母體血管中大量微血栓形成，所以推斷：凝血功能異常和血管內(nèi)皮功能紊亂可能參與了疾病的發(fā)生和發(fā)展。一般認為：外源性凝血途徑在體內(nèi)生理性凝血反應(yīng)的啟動中起關(guān)鍵作用。TF又稱組織凝血活酶或凝血因子Ⅲ，是外源性凝血途徑的起始因子，通過與凝血因子Ⅶ結(jié)合并使其激活，形成TF-FⅦ/ FⅦa復(fù)合物，同時激活凝血因子Ⅸ、Ⅹ而啟動血液凝固級聯(lián)反應(yīng)。在生理性止血及多種血栓性疾病中發(fā)揮著重要的作用，廣泛表達于胎盤滋養(yǎng)層細胞、蛻膜等組織中，在孕早期胚胎形成、血管形成、胎盤植入以及產(chǎn)后止血等方面發(fā)揮著重要的作用[7-8]。TFPI為內(nèi)源性血漿抗凝蛋白和目前唯一已知的組織因子依賴性凝血途徑調(diào)節(jié)劑，其抗凝的主要機制為形成FXa-TFPI-TF-FⅦa四元復(fù)合物，抑制TF-FⅦa復(fù)合物的催化活性并阻止進一步激活FX[9]。主要由微血管內(nèi)皮細胞產(chǎn)生，滋養(yǎng)細胞以及絨毛血管內(nèi)皮可表達TFPI[10]。

本文HE染色發(fā)現(xiàn)：子癇前期患者胎盤血管中有大量微血栓形成，證實了子癇前期患者血液呈高凝狀態(tài)；免疫組化方法發(fā)現(xiàn)：TF主要表達于滋養(yǎng)細胞和血管內(nèi)皮細胞；與正常妊娠組相比，妊娠期高血壓組TF表達雖有升高但差異無統(tǒng)計學意義；而子癇前期組與正常妊娠組和妊娠期高血壓組相比，TF表達明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義。TFPI主要表達于絨毛血管內(nèi)皮細胞和胎盤滋養(yǎng)細胞，妊娠期高血壓組與正常妊娠組相比，TFPI表達雖有下降但差異無統(tǒng)計學意義；而子癇前期組TFPI表達明顯下降，差異有統(tǒng)計學意義。妊娠期高血壓疾病患者胎盤組織中TF表達升高，使凝血功能增強，而表達下降的TFPI不足以抑制TF的功能，從而可能導(dǎo)致了凝血功能的異常和胎盤中大量微血栓形成。本研究發(fā)現(xiàn)：隨著妊娠期高血壓疾病的進展，TF表達量上升，而TFPI表達量下降，說明TF和TFPI的表達水平可能在反映妊娠期高血壓疾病的輕重及疾病的進展上有一定的意義。

Chris等[11]和Lara等[12]發(fā)現(xiàn)：胎盤可釋放TF、TFPI入血，由此推斷胎盤TF、TFPI的表達變化可影響血漿中TF、TFPI的量。之前筆者研究發(fā)現(xiàn)妊娠期高血壓疾病患者血漿中TF、TFPI變化和胎盤基本一致。血漿中TF、TFPI的變化除了與血管內(nèi)皮表達異常有關(guān)外[13]，也可能與胎盤源性因子異常釋放入母血有關(guān)。總之，胎盤內(nèi)TF、TFPI的變化及其比例失調(diào)可導(dǎo)致凝血功能的異常，在妊娠期高血壓疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中可能發(fā)揮著重要的作用。

[1] Erez O,Romero R,Hoppensteadt D,et al.Tissue factor and its natural inhibitor in pre-eclampsia and SGA[J].J Matern Fetal Neonatal Med,2008,21(12):855-869

[2] Erez O,Romero R,Vaisbuch E,et al.High tissue factor activity and low tissue factor pathway inhibitor concentrations in patients with preterm labor[J].J Neonatal Med,2010,23(1):23-33

[3] Mastrolia SA,Mazor M,Loverro G,et al.Placental vascular pathology and increased thrombin generation as mechanisms of disease in obstetrical syndromes[J].Peer J,2014,2:e653

[4] Prochazkova J,Slavik L,Ulehlova J,et al.The role of tissue factor in normal pregnancy and in the development of preeclampsia.A review[J].Biomed Pap Med Fac Univ Palacky Olomouc Czech Repub,2015,159(2):192-196

[5] 謝幸，茍文麗.婦產(chǎn)科學[M].8版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2013:64-71

[6] Soslow RA,Dannenberg AJ,Rush D,et al.Cox-2 is expressed in human pulmonary,colonic,and mammary tumors[J].Cancer,2000,89(12):2637-2645

[7] Girardi G.Role of tissue factor in feto-maternal development:a xiphos[J].Thromb Haemost，2011,9(2):250-256

[8] Kuczynski J,Uszynski W,Zekanowska E,et al.Tissue factor (TF) and tissue factor pathway inhibitor (TFPI) in the placenta and myometrium[J].Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol,2002，105(1):15-19

[9] Peraramelli S,Thomassen S,Heinzmann A,et al.Inhibition of tissue factor:factor VⅡa-catalyzed factor IX and factor X activation by TFPI and TFPI constructs[J].Thromb Haemost，2014,12(11):1826-1837

[10] Aharon A,Brenner B,Katz T,et al.Tissue factor and tissue factor pathway inhibitor levels in trophoblast cells:implications for placental hemostasis[J].Thromb Haemost,2004,92(4):776-786

[11] Gardiner C,Tannetta DS,Simms CA,et al.Syncytiotrophoblast microvesicles released from pre-eclampsia placenta exhibit increased tissue factor activity[J].Plosone,2011,6(10):e26313

[12] Godoi LC,Gomes KB,Alpoim PN,et al.Preeclampsia:the role of tissue factor and tissue factor pathway Inhibitor[J].Thromb Thrombolysis,2012,34(1):1-6

[13] Teng Y,Jiang R,Lin Q,et al.The relationship between plasma and placental tissue factor,and tissue factor pathway inhibitors in severe pre-eclampsia patients[J].Thromb Res,2010,126(1):e41-45

Expression and clinical significance of placental tissue factor and tissue factor pathway inhibitor in pregnant women with hypertensive disorders

WANG Xiaodan,HAN Cuixin,BAN Ling,LIU Yali,JU Yunhui,LIANG Xia,TIAN Tian

(The Second Hospital of Shijiazhuang,Shijiazhuang 050051,Hebei,China)

Objective It is to explore whether hypertensive disorders complicating pregnancy was associated with changes of the maternal placental concentrations as well as its inhibitor-tissue factor pathway inhibitor (TFPI).Methods Placental tissue factor(TF) and TFPI expression from gestational hypertension patients,preeclampsia patients and healthy pregnant controls were determined by immunohystochemistry.Results Comparing to healthy pregnant women，TF placental levels in gestational hypertension patients increased but had no difference.TF placental levels were significantly higher in preeclampsia patients than that in gestational hypertension patients and the healthy controls.Comparing to gestational hypertension patients and healthy pregnant women,TFPI placental levels in preeclampsia patients were significantly lower，but the difference between the gestational hypertension patients and the healthy controls was not significantly.Conclusion The changes of plasma TF and TFPI contribute to coagulation disorders in placental which may lead to hypertensive disorders complicating pregnancy.

hypertensive disorders complicating pregnancy;tissue factor;tissue factor pathway inhibitor

王曉丹，女，碩士，主治醫(yī)師，從事產(chǎn)科臨床工作。

韓翠欣，E-mail：hcx3162@sina.com

石家莊市科技支撐計劃項目(131462583)

10.3969/j.issn.1008-8849.2016.32.003

R714.246

A

1008-8849(2016)32-3541-03

2016-05-30