青藤外敷貼制備及質量標準研究

張燏琦，李永吉,郭玉巖，王銳

(黑龍江中醫藥大學，黑龍江 哈爾濱 150040)

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青藤外敷貼制備及質量標準研究

張燏琦，李永吉*,郭玉巖，王銳

(黑龍江中醫藥大學，黑龍江 哈爾濱 150040)

目的：優選青藤外敷貼的最佳制備工藝，建立嚴謹的質量控制方法。方法：采用聚丙烯酸鈉、聚丙烯吡咯烷酮等新型高分子材料制備成親水凝膠骨架貼，以正交試驗法考察貼片制備工藝，采用UPLC法測定青藤堿含量。結果：制備出的凝膠骨架型外敷貼具備粘性強、剝離性好、可反復揭貼的特點。結論：該制備工藝具有科學性、合理性，質量標準具有可靠性，質量控制方便可行，具有非常好的開發價值和應用前景。

青藤外敷貼；質量標準；制備工藝

防己科植物青藤[Sinomeniumacutum(Thunb)Rehd1et Wils]及毛青藤[Sinomeniumacutum(Thunb)Rehd1et Wils1Var Cinerrum Rehd1et Wils]的干燥藤莖稱為青風藤,1000多年以前就已用于風濕性疾病的治療[1]。青藤堿(sinomenine，SN)是中藥青風藤(Sinomenii Caulis)中的重要生物活性成分。具很強的抗炎、免疫抑制、鎮痛、降血壓、抗心律失常等多種藥理作用[2]。臨床上主要用于治療風濕性、類風濕性關節炎、骨性關節炎，甚至骨癌等疾病[1]。將青藤堿制成外敷貼可克服目前臨床上現有的口服片劑生物利用度低、不良反應較多以及注射劑半衰期短、需頻繁給藥等諸多缺點。青藤外敷貼以青藤堿為主藥，以聚丙烯酸鈉、聚丙烯吡咯烷酮等新型高分子材料制備成親水凝膠骨架貼，可用于具有中醫學特色的穴位給藥途徑釋放給藥。

1 材料和儀器

1.1 材料

青藤堿(藥用，廣州白云山制藥廠)；青藤堿對照品(中國衛生部生物制品藥品檢定所)；甲醇(色譜純,山東禹王實業有限公司)；聚丙烯酸鈉(PANA，廣州市化學工業研究所)；PVP -K30(聚乙烯吡咯烷酮,廣東南方化玻公司)；Carbomer -940(廣州博峰化工科技有限公司 )；PEG-400、丙二醇、甘油等均購自天津科密歐化學試劑公司。

1.2 儀器

真空干燥箱(上海一恒科學儀器有限公司)；高效液相色譜儀(美國Waters公司)；分析電子天平(上海市百典儀器廠)；超聲振蕩儀(深圳市科工達超聲設備有限公司)；多功能磁力攪拌器(安徽省天長恒運電器廠)。

2 方法與結果

2.1 粘性分析方法的建立

方法參見參考文獻[3]。

2.2 空白基質的處方[4]

空白基質處方組成為PVP:Carbomer:PANA:甘油:PEG-400:丙二醇=8:1:1:0.5:0.5:4。配方中甘油作用為保濕和防腐，丙二醇作用為保濕，PEG-400作為增塑劑。經三批產品驗證得此基質性能良好。

2.3 外敷貼的成型工藝

采用L9(34)正交試驗設計，對制備時間、溫度和各組分加入順序這三項因素進行考察，看其對載藥外敷貼質量的影響，優選出最佳制備工藝，表1中因素C為三組分加入的順序，三組分為：青藤堿(青藤堿用藥用粉碎機粉碎，過100目篩)，軟化劑(適量橄欖油)和空白基質。按L9(34)安排9次實驗。以貼劑的粘性強度優良與否為考察指標，對測定的“初粘力”“持粘力”“剝離強度”這3個客觀指標，按好差程度進行評分，最差者為1分，最高者分9分；將三項指標所得分數相加，總分即是該次實驗的綜合評分。結果見表2、表3。

表1 因素水平表

表2 L9(34)正交試驗設計及結果

表3 方差分析

方差分析結果顯示，C因素對結果的影響較明顯，為主要影響因素。而A、B兩因素可根據實際情況進行選擇。因此, 最佳工藝為A1B3C3。即藥物加入順序為空白基質先和青藤堿混合，然后再加入軟化劑，工藝參數為80℃加熱1 h并緩慢攪拌。將得到的膠漿用澆鑄法趁熱在模具上鋪展成膜厚不超過1.5 mm的凝膠貼。室溫晾干過夜后，置于真空干燥箱中50℃真空干燥0.5 h，達到表面固化而有彈性，室溫條件下放置，脫模。用醫用透明膠覆蓋表層，用PVC膜覆蓋下層，中間為貼劑；所得的青藤堿外敷貼表面呈凹凸不平狀。

2.4 驗證試驗

按上述的最佳制備工藝，重復制備三批樣品，粘性、剝離性、殘留性的指標均良好。表明該工藝可行。

3 質量標準的研究

3.1 UPLC法測定青藤堿含量的方法與結果

3.1.1 色譜條件的確定

色譜柱為Hypersil GOLD C18柱(150 mm×2.1 mm，3 μm)；流動相為水-乙腈-乙二胺(70∶30∶0.25);流速為0.3 ml/min；進樣體積為2 μL；檢測波長為262 nm。

3.1.2 對照品溶液的制備

精密稱取減壓干燥至恒重的青藤堿對照品，用甲醇配置成每1 ml中約含0.42 mg的溶液10 ml,搖勻，即得對照品溶液。

3.1.3 供試品溶液的制備

取供試品貼片2.5 g，置于超聲振蕩儀上作用30 min，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，濾液置于10 mL容量瓶中，加甲醇溶液定容，即得到了供試品溶液。

3.1.4 標準曲線的制備

取青藤堿對照品適量，精密稱定，加甲醇制成含青藤堿0.446 mg/mL的對照品貯備液，精密吸取1 ml、2 ml、7 ml、8 ml置10 ml量瓶中，甲醇溶稀釋定容，得到濃度為0.0446、0.0892、0.3122、0.3568 mg/ml的對照品溶液及濃度為0.446 mg/ml的儲備液，分別進樣10 μl，以對照品濃度(C)對峰面積(A)進行線性回歸。Y=9E+06x+102803 (R=0.9999)線性范圍為0.0446～0.446 mg/ml，線性關系良好。

3.1.5 空白試驗

取未加青藤堿的樣品，依照上述方法制成溶液，置于10 ml容量瓶中，精密吸取2.0 μL注入氣相色譜儀中，經氣相色譜方法分析繪制色譜圖，結果顯示，未有相應的干擾峰出現，說明除青藤堿外的其他基質對青藤堿含量測定無干擾。

3.1.6 精密度實驗

分別精密稱取5個樣品適量(約60 mg)，置25 ml量瓶中，甲醇溶解定容,濾過，在選定色譜條件下連續重復進樣5次，以峰面積比值計算青藤堿含量，RSD分別為1.34%，結果表明本方法精密度良好。

3.1.7 重復性試驗

精密吸取5份供試液，各進樣5 μL測定青藤堿含量，RSD分別為1.04%，結果顯示本方法重復性良好。

3.1.8 穩定性試驗

精密吸取濃度為0.42 mg/mL的青藤堿對照品2 μL，分別在0，2，4，6，8 h五個時間點測定一次，以峰面積比值計算青藤堿含量，RSD為1.17%，結果表明樣品溶液放置8 h以內穩定。

3.1.9 加樣回收率試驗

取已知含量為6.23 mg/g的樣品2.5 g，取青藤堿對照品適量，精密稱定，加入樣品中，超聲不少于30 min，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，棄雜質，得供試品溶液。測青藤堿含量，計算得回收率為100.25%，RSD為1.09%。

3.1.10 樣品含量測定

取3批成品，分別測定其中青藤堿含量并計算，得青藤堿含量在6.20～6.28 mg/g，平均為6.24 mg/g,確定貼中青藤堿含量為不得低于6.0 mg/g。

3.2 粘性標準的制定

按粘性評定標準對所制得的三批樣品進行檢測，初粘力在10.0～10.5 cm之間，平均值為10.31 cm；持粘力在3.0～3.4 min之間，平均值為3.19 min；剝離強度在16.3～16.9 s之間，平均值為16.67 s，確定指標為：“初粘力”距離<15 cm；“持粘力”>3 min；“剝離強度”>16 s。

4 討論

本文通過正交實驗優選出了青藤堿外敷貼的最佳制備工藝，制備出一種粘性特質優良、剝離性良好、可反復揭貼的凝膠骨架控釋穴位貼。且該制備工藝具有可靠性、可行性、科學性及合理性，所建立的質量標準可用于質量控制。但在制備過程中，也存在一些問題，包括對藥物青藤堿的溶解后制備出的外敷貼表面不平整，會出現表面凹凸不平狀等一些細小問題，是本課題需要進一步優化的一部分。

將青藤堿制成骨架型貼劑可有效的避免上述臨床上遇到的問題，且將青藤堿外敷貼用于關節給藥,可更直接、更有效、更方便的治療各類關節炎,也為以后用青藤堿醫治各類關節炎的研究奠定了堅實的基礎。將凝膠骨架型貼片用于中藥關節穴位給藥，對中藥靶向給藥、經皮給藥研究來說，也是很好的探索，具有深遠的實踐意義,為以后中藥穴位給藥奠定了基礎,開辟了新天地,具有較好的開發價值和應用前景。

[1] 江蘇新醫學院.中藥大辭典(上冊)[M].上海:上海科學技術出版社,1982:12341.

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京：中國醫藥科技出版社，2005.

[3] 王銳,呂邵娃,王艷宏,等.清腦醒神貼制備及質量標準的研究[J].時珍國醫國藥,2011,22(3):651-653.

[4] 王銳,呂邵娃,李永吉,等.清腦醒神貼基質的研究[J].黑龍江醫藥,2009,22(2):139．

國家自然科學基金項目(No.81473359)

張燏琦(1989-)，女,黑龍江中醫藥大學2012級藥劑學專業碩士研究生。

李永吉*(1957-)，男，博士，教授，博士研究生導師,主要研究方向:經皮給藥、中藥注射劑及新藥開發。

2015-08-26

R28

A

1002-2406(2016)05-0055-03

修回日期：2015-09-20