卵母細胞培養時間對單精子胞漿內注射胚胎質量及妊娠結局的影響分析

曹森楊，李采霞，王杜娟，溫開群，畢 紅

（鹽城市婦幼保健院，江蘇 鹽城 224002）

卵母細胞培養時間對單精子胞漿內注射胚胎質量及妊娠結局的影響分析

曹森楊，李采霞，王杜娟，溫開群，畢 紅

（鹽城市婦幼保健院，江蘇 鹽城 224002）

目的 分析探討卵母細胞培養時間對單精子胞漿內注射胚胎質量及妊娠結局的影響，探尋最佳單精子胞漿內注射時機。方法 選取2012年1月～2015年12月我院收治的接受單精子胞漿內注射治療的患者63例為研究對象，根據取卵結束到開始進行單精子胞漿內注射將患者分為兩組，Ⅰ組30例為2～3 h內注射，Ⅱ組33例為4～5 h內注射，對比觀察兩組胚胎質量及妊娠結局。結果 Ⅱ組患者卵母細胞核成熟率90.4%、胚胎植入率24.7%、妊娠率42.4%均顯著高于Ⅰ組卵母細胞核成熟率80.7%%、胚胎植入率12.1%、妊娠率23.3%，差異有統計學意義（P＜0.05）。結論 卵母細胞體外培養4～5 h然后進行單精子胞漿內注射治療，可獲得理想的胚胎質量與臨床結局。

卵母細胞；單精子胞漿內注射；培養時間；胚胎質量；妊娠結局

單精子胞漿內注射被廣泛地應用到輔助生殖領域中，是男性不育的一種重要方法。當獲得卵母細胞后何時進行單精子胞漿內注射并無統一的標準[1]，基于此，本研究分析探討了卵母細胞培養時間對單精子胞漿內注射胚胎質量及妊娠結局的影響，探尋最佳單精子胞漿內注射時機。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2012年1月～2015年12月我院收治的接受單精子胞漿內注射治療的患者63例為研究對象，納入標準：單純因男方因素實施單精子胞漿內注射，年齡均在35歲以下，基礎內分泌無異常，根據取卵結束到開始進行單精子胞漿內注射將患者分為兩組，Ⅰ組為2～2 h內注射（30例），Ⅱ組為4～5 h內注射（33例）。Ⅰ組平均年齡（30.5±3.3）歲，平均獲卵數為（9.5±3.8）個，平均移植胚胎數（2.2±0.5）個；Ⅱ組平均年齡（30.3±3.8）歲，平均獲卵數為（9.5±4.2）個，平均移植胚胎數（2.2±0.4）個；兩組患者年齡、平均獲卵數、移植胚胎數，差異均無統計學意義（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 超促排卵

使用達必佳（促性腺激素釋放激素的類似物）進行垂體降調節，實施果納芬（注射用重組人促卵泡激素）促排卵，并根據患者情況給予hMG（人絕經期促性腺激素），采用B超檢測患者情況結合血清E2水平對藥物的用量進行調節，在目標卵泡直徑達到18～20 mm時給予5000～10000 IU hCG（人絨毛膜促性腺激素）肌肉注射，于34～36 h后取卵（取卵當天視為0 d）。將獲得的卵冠丘復合體移植到G-IVF（受精）培養基進行體外培養，培養時間為2～5 h。

1.2.2 單精子胞漿內注射

取卵后2 h～5 h將冠丘復合體置于80 IU/mL透明質酸酶清洗，除去顆粒細胞，然后將卵母細胞轉移到新鮮G-MOPS（操作培養基）微滴中，然后根據標準方法[2]進行單精子胞漿內注射，完成單精子胞漿內注射后講卵母細胞轉移到G1（卵裂）培養基中，培養到第3 d。

1.2.3 胚胎培養

胚胎體外培養采用G5系列，第0 d脫顆粒、單精子胞漿內注射采用G-MOPS培養基，0 d胚胎培養采用G-IVF培養基，1～3 d胚胎培養采用G1培養基，胚胎移植采用G1培養基。培養溫度為37℃，6%CO2與5%O2。各種培養基中均添加10%人血清替代蛋白，覆蓋石蠟油，置于培養箱提前平衡過夜。

1.2.4 胚胎評估、移植及妊娠確認

在受精后16～18 h（第1 d），按照Scott原核評分對卵母細胞受精情況進行評估，此次研究中的所有胚胎均來源于正常受精卵。于第3 d按照Veeck胚胎評分標準評估胚胎卵裂球數、形態與碎片化比例，達到胚胎卵裂球數6個及以上，形態基本對稱具有折光性；胚胎碎片比例在10%以下則為優質胚胎。在第3 d，將2～3枚胚胎連同G1培養基10～15 μL一起移植到導管中，然后移入患者子宮。所有患者從取卵當天開始給予黃體酮支持，于移植后第14 d進行血hCG檢查，對陽性結果者于移植后28 d行B超監測孕囊，以確定是否臨床妊娠。

1.3 統計學方法

運用SPSS 19.0統計學軟件對數據進行分析，計量資料以“±s”表示，采用t檢驗，計數資料以百分數（%）表示，采用x2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 卵母細胞體外培養時間對單精子胞漿內注射胚胎質量的影響

Ⅰ組、Ⅱ組患者卵母細胞核成熟率分別為80.7%，90.4%，Ⅱ組患者卵母細胞核成熟率顯著高于Ⅰ組，差異有統計學意義（x2=10.86，P＜0.05）；兩組間受精率、卵裂率與優質胚胎率比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 卵母細胞體外培養時間對單精子胞漿內注射胚胎質量的影響 [n（%）]

2.2 三組患者胚胎植入率與妊娠結局比較

Ⅱ組胚胎植入率顯著高于Ⅰ組，差異有統計學意義（x2=4.92，P＜0.05）；Ⅱ組妊娠率顯著高于Ⅰ組，差異有統計學意義（x2=4.78，P＜0.05）。見表2。

表2 三組患者胚胎植入率與妊娠結局比較 [n（%）]

3 討 論

人卵母細胞經核成熟、胞質成熟才能夠完成受精與胚胎發育。臨床上輔助生殖治療促排卵藥物使用目的是改變卵泡幕集模式，取卵泡后將獲得不同程度的卵母細胞，其細胞核、細胞質成熟度可能存在差異[3]。當前，針對卵母細胞體外培養時間對單精子胞漿內注射治療結局的影響有不同的報道，相關研究指出，通過卵母細胞體外培養可對單精子胞漿內注射受精率、胚胎質量、妊娠結局起到改善作用[4]，也有研究指出卵母細胞體外培養時間并不會影響胚胎質量與妊娠結局[5]。

本次研究結果顯示，Ⅰ組、Ⅱ組患者卵母細胞核成熟率分別為80.7%，90.4%，Ⅱ組患者卵母細胞核成熟率顯著高于Ⅰ組，由于卵母細胞體外培養細胞質遲于細胞核成熟，這可能是造成Ⅰ組患者植入率、妊娠率下降的原因。兩組間受精率、卵裂率與優質胚胎率比較無顯著性差異，而Ⅰ組患者植入率、妊娠率顯著更低，這預示著卵母細胞體外培養時間對單精子胞漿內注射治療的影響，并非在胚胎發育早期階段產生顯著作用，而是在囊胚形成、胚胎植入（后期階段）發揮顯著的作用[5]。結果提示，卵母細胞需要體外培養4 h然后進行單精子胞漿內注射治療，可獲得理想的胚胎質量與臨床結局，且4～5 h可維持較為理想的水平。

[1] 顧亦凡,陸長富,龔 斐,等.卵母細胞體外培養時間對單精子胞漿內注射臨床結局的影響[J].中國現代醫學雜志,2010,20(22): 3364-3367.

[2] 乜照燕,吳海峰,張 娜,等.卵母細胞培養時間對單精子胞漿內注射胚胎質量及妊娠結局影響[J].中國男科學雜志,2015(1):28-31.

[3] 粱 琳,陳秀娟.觀察體外受精中卵泡液的抗氧化能力及其對卵母細胞質量和胚胎發育的影響[J].生殖醫學雜志,2015,24(7):532-537.

[4] 張 巍,周 瑋,趙軍招,等.自然周期未成熟卵體外培養卵母細胞成熟率與臨床結局的關系[J].浙江醫學,2012(17):1420-1423.

[5] 鹿 群,陳 曦,沈 浣,等.卵母細胞激活技術在卵細胞質內單精子注射受精失敗或低下患者中的應用[J].中國婦產科臨床雜志,2014(2):109-113.

本文編輯：魯守琴

R321-33

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ISSN.2095-8803.2016.13.084.02