正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選海杞咀嚼片的提取工藝

◎羅海燕，申雨薇，毛彩霓，盛 琳（海南醫(yī)學(xué)院，海南 海口 571101）

正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選海杞咀嚼片的提取工藝

◎羅海燕，申雨薇，毛彩霓，盛 琳
（海南醫(yī)學(xué)院，海南 海口 571101）

為優(yōu)化海杞咀嚼片的提取工藝，根據(jù)處方藥物所含成分的理化性質(zhì)及處方的功能主治，確定合理的提取工藝路線：以多糖含量及出膏率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，通過(guò)單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)，篩選出枸杞子和山藥的提取工藝。結(jié)果表明：用水提法合提山藥和枸杞子，提取條件為6倍量溶劑提取3次，每次1.5 h。該工藝流程方法簡(jiǎn)單，操作簡(jiǎn)便，藥材的利用度高。

海杞咀嚼片；多糖；干膏收率；正交試驗(yàn)

海杞咀嚼片由海馬、枸杞子、山藥等藥物組成，具有補(bǔ)腎補(bǔ)脾、生津益肺、益精明目的作用[1，2]。該試驗(yàn)以干膏收率、多糖含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)選提取工藝，為制劑成型工藝研究提供試驗(yàn)依據(jù)。本文以多糖含量及出膏率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，通過(guò)單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)法，篩選出枸杞子和山藥的提取工藝。

1　材料

紫外分光光度計(jì)。試劑均為分析純。枸杞子購(gòu)自海口市廣安堂藥品超市連鎖經(jīng)營(yíng)有限公司，生產(chǎn)公司為濟(jì)南綠色中藥飲片有限公司，生產(chǎn)批號(hào)為15032611；山藥購(gòu)自海口市廣安大藥堂連鎖經(jīng)營(yíng)有限公司，生產(chǎn)公司為海南壽南山參業(yè)有限公司，生產(chǎn)批號(hào)為15081505。

2　方法與結(jié)果

2.1苯酚-硫酸法測(cè)定總多糖含量

2.2.1對(duì)照品溶液的制備

取無(wú)水葡萄糖對(duì)照品25.0 mg，精密稱定，置250 mL量瓶中，加水適量溶解，稀釋至刻度，搖勻即得（每l mL中含無(wú)水葡萄糖0.l mg)。

2.2.2吸收波長(zhǎng)的選擇

用0.006 mol／L的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品和空白對(duì)照品，在紫外分光光度計(jì)上測(cè)量最大吸收峰，吸收波長(zhǎng)為490 nm。

2.2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密量取對(duì)照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8 mL和1.0 mL，分別置于試管中，分別加水補(bǔ)至2.0 mL，各精密加入5%苯酚溶液1.0 mL搖勻，迅速精密加入硫酸5.0 mL搖勻，放置10 min，置于40 ℃水浴中保溫15 min，取出后迅速冷卻至室溫，以相應(yīng)的試劑為空白對(duì)照，采用紫外-可見(jiàn)分光光度法（通則0401)，在490 nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程y=6.29x-0.026，R2=0.997 1。

2.2提取工藝研究

2.2.1枸杞子和山藥合提、分提的篩選實(shí)驗(yàn)

試驗(yàn)考察了2種提取工藝，即全方飲片合提、枸杞子和山藥飲片分提后按處方比例混合[3，4]。提取液按苯酚-硫酸法測(cè)定總糖含量和干膏收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

結(jié)果表明，若先分提再混合，所得多糖含量不如直接合提多，而出膏率雖比直接合提大，但多糖含量為首要考慮因素，故選用合提法來(lái)提取枸杞子和山藥。

2.2.2提取溫度的選擇

根據(jù)預(yù)試驗(yàn)，山藥多糖的提取最佳溫度和枸杞多糖提取最佳溫度不一致。對(duì)枸杞子和山藥合提溫度做篩選，分別為60、80、100 ℃，結(jié)果見(jiàn)表2。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果和生產(chǎn)需要，選擇80 ℃為枸杞子和山藥合提溫度。

表1　枸杞子和山藥合提和分提的篩選考察表

表2　枸杞子和山藥合提提取溫度的篩選表

2.2.3正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

按處方比例分別稱取藥材210 g，共9份，以加水量、提取時(shí)間、提取次數(shù)等因素為考察對(duì)象，選用L9（34）正交設(shè)計(jì)表，具體試驗(yàn)安排見(jiàn)表3。提取液靜置后取上清液，濃縮至稠浸膏，減壓干燥，測(cè)定水提取物的出膏率及度糖含量，綜合評(píng)分=多糖含量×0.6+干膏收率×0.4。結(jié)果見(jiàn)表4，方差分析結(jié)果見(jiàn)表5。

表3　山藥、枸杞子水提正交試驗(yàn)因素表

結(jié)果表明，枸杞子和山藥合提的最佳提取工藝為A2B3C3（8倍量溶劑提取3次，每次2.0 h），其中各因素的影響順序由大到小依次為A＞B＞C。從提取時(shí)間來(lái)看提取1.5 h和提取2.0 h次以及6倍量水和8倍量水對(duì)提取結(jié)果沒(méi)有多大影響，結(jié)合實(shí)際生產(chǎn)中的生產(chǎn)周期和成本，可以考慮優(yōu)選提取枸杞子和山藥工藝為：A3B2C2（6倍量溶劑提取3次，每次1.5 h）。

表4　山藥、枸杞子水提正交試驗(yàn)結(jié)果表

表5　水提枸杞子和山藥的正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果方差分析表

2.2.4工藝驗(yàn)證

枸杞子、山藥采用水提取正交試驗(yàn)優(yōu)選的工藝，提取3批，每批投藥量為210 g，進(jìn)行工藝驗(yàn)證。驗(yàn)證結(jié)果與正交試驗(yàn)結(jié)果吻合，表明此工藝合理，結(jié)果見(jiàn)表6。

3　討論

苯酚-硫酸法測(cè)多糖含量操作復(fù)雜，耗時(shí)長(zhǎng)，對(duì)操作精準(zhǔn)度要求高。需要注意的是操作的準(zhǔn)確性，包括到每個(gè)細(xì)節(jié)，并做增加平行試驗(yàn)，減少誤差。

表6　最佳工藝的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)表

[1]洪美華.海馬的藥理作用研究進(jìn)展[J].中國(guó)醫(yī)療前沿，2009，4（6）：9-10.

[2]朱苗，謝勇，盧忠英，等.海馬活性成分提取技術(shù)研究進(jìn)展[J].廣州化工，2015，43（10）：19-20.

[3]陳慶偉，陳志桃.枸杞多糖藥理作用研究進(jìn)展[J].海峽藥學(xué)，2005，17（4）：4-7.

[4]滕俊，袁佳，葉莎莎.枸杞子化學(xué)成分及藥理作用相關(guān)性概述[J].海峽藥學(xué)，2014，26（6）：36-37.

Technique Optimization of Extraction Process of Haiqi Chewable Tablets

Luo Haiyan，Shen Yuwei，Mao Caini，Sheng Lin
（School of Pharmacy，Hainan Medical University，Haikou 571199，China）

To optimize the extraction process for Haiqi Chewable Tablets，the appropriate extraction process was determined according to the physical and chemical properties of the drugs in the prescription and the function and symptoms of the prescription. The extraction processes of Chinese yam and wolfberry fruit were screened and determined by single-factor and orthogonal tests with the content of polysaccharide and extraction rate as the evaluation indexes. The results showed that Chinese yam and wolfberry fruit were extracted together by water and the extraction parameters werw as follows： six times amount of solvent，extraction 3 times and 1.5 h each time. This process method is simple，easy to operate and of a higher medicinal utilization ratio.

Haiqi Chewable Tablets；Polysaccharide；Orthogonal test；Preparation process

TQ461

10.16736/j.cnki.cn41-1434/ts.2016.04.035

海南省科技興海專項(xiàng)（編號(hào)：XH201310）。

羅海燕（1971-），女，漢族，四川重慶人，博士，教授，主要研究方向：熱帶藥用動(dòng)植物的研究與開(kāi)發(fā)。

毛彩霓（1977-），女，漢族，黑龍江哈爾濱人，副教授，主要研究方向：中藥制劑研究；盛琳（1975-），女，漢族，四川成都人，在讀博士，副教授，主要研究方向：藥物制劑及熱帶藥用植物的研究與開(kāi)發(fā)。