LC-MS測定豆芽中的無根豆芽素的應(yīng)用

◎趙麗燕（浙江華才檢測技術(shù)有限公司，浙江 諸暨 311800）

LC-MS測定豆芽中的無根豆芽素的應(yīng)用

◎趙麗燕
（浙江華才檢測技術(shù)有限公司，浙江 諸暨 311800）

超高效液相色譜儀LC-30A和三重四極桿質(zhì)譜儀LCMS-8050聯(lián)用快速準(zhǔn)確測定豆芽中無根豆芽素的分析方法。樣品經(jīng)適當(dāng)樣品前處理后，用超高效液相色譜分離，三重四極桿質(zhì)譜儀進(jìn)行定性定量分析。結(jié)果表明：無根豆芽素在0.50～50.00 ng/mL濃度范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)為0.999，儀器檢出限為0.01 ng/mL，定量限為0.04 ng/mL。實際樣品加標(biāo)不同濃度所得回收率范圍為100.10%～112.20%，精密度R SD%范圍為3.22%～6.53%。

豆芽；無根豆芽素；超高效液相色譜儀；三重四極桿質(zhì)譜

6-芐基腺嘌呤是一種人工合成的植物生長調(diào)節(jié)劑，主要用于促進(jìn)細(xì)胞分裂，促進(jìn)果實生長，促進(jìn)細(xì)胞增大，促進(jìn)種子發(fā)芽等，是常說的“無根豆芽素”的最主要成分，在國際上被廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)園藝，包括葡萄、蘋果、水稻、西瓜等作物。但在我國，6-芐基腺嘌呤在豆芽生產(chǎn)上的應(yīng)用，卻經(jīng)歷了從“允許”到“禁止”的轉(zhuǎn)變過程。目前，在國家已登記的農(nóng)藥目錄中，找不到一款明確規(guī)定可在豆芽培育中使用的農(nóng)藥，這就意味著目前培育豆芽不能使用任何農(nóng)藥；而在6-芐基腺嘌呤嚴(yán)禁作為食品添加劑使用后，則意味著加工豆芽不能使用任何食品添加劑。國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局早在2011年就發(fā)布了《關(guān)于食品添加劑對羥基苯甲酸丙酯等33種產(chǎn)品監(jiān)管工作的公告》，公告中明確指出，包括6-芐基腺嘌呤等33種產(chǎn)品，禁止作為食品添加劑出廠銷售，食品生產(chǎn)企業(yè)禁止使用。添加含有6-芐基腺嘌呤的添加劑后，豆芽不僅產(chǎn)量會大為提高，生產(chǎn)周期也會大幅縮短，而且生產(chǎn)出來的豆芽更具賣相。人們?nèi)绻L期食用添加了6-芐基腺嘌呤的食品，對生理機(jī)能和內(nèi)分泌系統(tǒng)都會造成損害，并面臨致癌、致畸形等危險。

1　試驗部分

1.1儀器和試劑

LCMS-8050聯(lián)用系統(tǒng)；高速冷凍離心機(jī)；超聲波振蕩器；勻質(zhì)器；超純水儀（密理博）；甲醇（色譜純），甲酸（質(zhì)譜級），6-芐基腺嘌呤（標(biāo)準(zhǔn)品）；豆芽購買自菜市場。

1.2分析條件

1.2.1液相色譜條件

分析儀器：LC-30A系統(tǒng)；色譜柱：Shim-pack XR-ODS Ⅲ；流動相：A-水（含0.1%甲酸），B-甲醇；洗脫方式：梯度洗脫；流速：0.4 mL/min；柱溫：40 ℃。

1.2.2質(zhì)譜條件

分析儀器：LCMS-8050；離子源：ESI，正離子掃描；離子源接口電壓：4.5 kV；霧化氣：氮?dú)? L/min；干燥氣：氮?dú)?8 L/m in；掃描模式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）。

1.3標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

1.3.1標(biāo)準(zhǔn)儲備液

精密稱取6-芐基腺嘌呤對照品0.01 g置于10 mL容量瓶中，加入甲醇溶解并定容至刻度即得標(biāo)準(zhǔn)儲備液1.0 mg/mL，于-18 ℃下保存。

1.3.2標(biāo)準(zhǔn)中間液

取100 μ L 6-芐基腺嘌呤標(biāo)準(zhǔn)儲備液于10 m L容量瓶中，用水稀釋配制成濃度為10 μ g/m L的中間儲備液。

1.3.3標(biāo)準(zhǔn)工作液

用水稀釋上述標(biāo)準(zhǔn)中間液，配成5個不同濃度的系列標(biāo)準(zhǔn)工作液，濃度分別為0.50、1.00、5.00、 10.00 ng/mL和50.00 ng/mL，采用外標(biāo)法進(jìn)行定量。

1.4樣品前處理方法

稱取2.00 g事先粉碎好的豆芽樣品（精確到0.01 g），加入10 mL含體積分?jǐn)?shù)為0.1%乙酸的乙腈溶液，渦旋30 s，混勻，超聲15 min，加入2.00 g無水硫酸鎂，再加入0.50 g無水乙酸鈉，渦旋混勻，以1萬r/min離心5 min，移出上清液，60 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，加入2 mL甲醇水溶液（3∶7，v/v）溶解，用0.45 μ m濾膜于進(jìn)樣小瓶中，待LC-MS/MS測定。

2　結(jié)果分析

2.1標(biāo)準(zhǔn)品的MRM色譜圖

6-芐基腺嘌呤0.50 ng/mL的MRM色譜圖（見圖1），6-芐基腺嘌呤的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線（見圖2）。

圖1　6-芐基腺嘌呤0.50 ng/mL的MRM色譜圖

圖2　6-芐基腺嘌呤的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線圖

2.2線性關(guān)系

按標(biāo)準(zhǔn)系列工作液進(jìn)行測定，建立外標(biāo)定量法，線性相關(guān)性良好，相關(guān)系數(shù)為0.999。由軟件算出信噪比，按照3倍信噪比和10倍信噪比分別作為儀器檢出限和定量限結(jié)果，計算所得結(jié)果為6-芐基腺嘌呤儀器檢出限為0.01 ng /mL，定量限為0.04 ng/mL。

2.3基質(zhì)加標(biāo)實驗

圖3為市售豆芽按照1.4中樣品制備方法所得MRM檢測色譜圖，由圖3可知該市售豆芽檢出含有無根豆芽素6-芐基腺嘌呤含量為3.20 μ g/kg。豆芽基質(zhì)加標(biāo)0.50 μ g/kg的6-芐基腺嘌呤MRM色譜圖如圖4所示。豆芽基質(zhì)加標(biāo)不同濃度標(biāo)樣，所得回收率范圍為100.10%～112.20%，精密度RSD%范圍為3.22%～6.53%（見表1）。

表1　豆芽加標(biāo)6-芐基腺嘌呤所得回收率結(jié)果表（n=3）

圖3　市售豆芽MRM檢測色譜圖圖

圖4　豆芽加標(biāo)0.5 μ g/kg MRM檢測色譜圖

3　結(jié)論

LCMS-8050聯(lián)用測定豆芽中無根豆芽素的分析方法。6-芐基腺嘌呤在0.50～50.00 ng/mL濃度范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)為0.999，實際樣品加標(biāo)所得回收率范圍為100.10%～112.20%，精密度RSD%范圍為3.22%～6.53%。結(jié)果表明液質(zhì)聯(lián)用儀建立無根豆芽素分析方法具有簡便、快速、靈敏度高的特點，可以滿足檢測需求。

[1]中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局，中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會.食品中6-芐基腺嘌呤的測定高效液相色譜法（GB/T 23381-2009）[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2009.

[2]浙江省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局.無公害豆芽 第3部分：6-芐基腺嘌呤殘留量和4-氯苯氧乙酸鈉殘留量的測定（DB33/T 625.3-2007）[S]，2007.

[3]北京市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局.DB11/T 379-2006 豆芽中4-氯苯氧乙酸鈉、6-芐基腺嘌呤、2，4-滴、赤霉素、福美雙的測定[S]，2006.

Application of LC-MS in the Determination of Bean Sprout in Bean Sprouts

Zhao Liyan
（Zhejiang Huacai Detection Technology Co.，Ltd.，Zhuji 311800，China）

Using ultra high performance liquid chromatography LC-30A and three mass quadrupole mass spectrometer LCMS-8050 to quickly and accurately determine the bean sprouts in the analysis method without root，samples were treated before the appropriate sample，qualitative and quantitative analysis was performed by using ultra performance liquid chromatography and three quadrupole mass spectrometer. The results showed that there was a good linearity in the concentration range of 0.50～50.00 ng/mL，the correlation coefficient was 0.999，the detection limit of the instrument was 0.01 ng/mL，and the limit of quantification was 0.04 ng/mL. The recovery rate of the actual samples spiked with different concentration ranged from 100.10% to 112.20%，and the precision of RSD% ranged from 3.22% to 6.53%.

Bean sprouts； No root bean sprouts； Ultra high performance liquid chromatography； Three quadrupole mass spectrometry

O657.63

10.16736/j.cnki.cn41-1434/ts.2016.04.028