探討產婦子宮平滑肌組織中MAPK信號轉導通路及CX43表達與產后出血的相關性

魏海云　黃素然　蔡鵬宇

【摘要】 目的 探討產婦子宮平滑肌組織中絲裂原激活蛋白激酶（MAPK）信號轉導通路及連接蛋白43（CX43）表達與產后出血的相關性。方法 30例行剖宮產產后宮縮乏力出血的產婦作為實驗組， 30例行剖宮產無產后出血的產婦作為對照組。利用等長張力測定的方式對產婦離體子宮下段平滑肌收縮功能以及縮宮素誘導的收縮潛能進行檢測；利用熒光定量反轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）技術對產婦子宮下段平滑肌組織中的CX43 mRNA表達進行檢測；利用蛋白免疫印跡技術對產婦子宮下段平滑肌組織中MAPK信號轉導通路中細胞外信號調節激酶1/2（ERK1/2）、p38磷酸化蛋白、c-Jun氨基端激酶1/2（JNK1/2）以及CX43蛋白水平進行檢測。結果 實驗組產婦離體子宮平滑肌自發性收縮活動力以及收縮頻率均低于對照組（P<0.05）；實驗組收縮幅度低于對照組， 但差異無統計學意義（P>0.05）；在使用縮宮劑之后， 實驗組產婦離體子宮平滑肌的收縮活動力、收縮幅度、收縮頻率以及收縮潛能均低于對照組（P<0.05）。實驗組CX43 mRNA（0.72±0.33）、p-ERK1/2（2.18±0.41）、p-p38（0.77±0.19）、p-JNK1/2（0.81±0.20）、CX43蛋白（0.08±0.02）均低于對照組（1.02±0.73）、（13.10±4.51）、（0.93±0.23）、（1.10±0.50）、（0.12±0.05）（P<0.05）。結論 子宮乏力性產后出血產婦離體子宮平滑肌收縮功能以及收縮潛能顯著衰退， 子宮平滑肌組織中MAPK信號轉導通路水平及CX43表達水平顯著下降， 并且兩者之間關系密切， 宮縮乏力性產后出血很大程度上是由于提示MAPK信號通路活化受阻以及CX43表達下降造成的， MAPK信號轉導通路及CX43表達相互調節以及共同作用之下產婦產后出血形成以及發展。

【關鍵詞】 子宮平滑肌組織；絲裂原激活蛋白激酶信號；連接蛋白43；產后出血；相關性

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.26.070

產后出血是導致產婦死亡的重要原因， 我國孕產婦死亡最主要的原因便是產后出血造成的；若不能及時進行治療， 嚴重時甚至會導致不孕以及垂體功能衰弱。根據目前研究結果表明， 在子宮平滑肌收縮中， 子宮平滑肌組織中MAPK信號轉導通路的級聯磷酸化有著重要作用[1]。近年來研究表明妊娠子宮平滑肌組織中CX43表達多樣并且與產程調整以及分娩發動關系密切， CX43蛋白有可能是激活MAPK之后的靶物質， 在功能機制中它們之間可能相互輔助[2]。本次研究探討產婦子宮平滑肌組織中MAPK信號轉導通路及CX43表達與產后出血的相關性。現報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 本次研究以2015年1月～2016年1月在東莞常安醫院婦產科因胎位異常、胎兒窘迫、羊水過少、頭盆不稱、社會因素采取剖宮產術的未臨產、無胎膜早破的30例宮縮乏力性產后出血產婦作為實驗組， 并且選擇同期進行剖宮產無產后出血的產婦30例作為對照組。產后出血診斷標準：自胎兒娩出后24 h內總失血量達1000 ml即診斷為產后出血。實驗組平均年齡（28.73±2.94）歲， 平均孕周（39.31±1.47）周， 平均產次（0.80±0.54）次， 產前平均體質量指數（27.92±3.80）kg/m2， 新生兒平均體重（3373.00±513.89）g；對照組平均年齡（27.76±3.24）歲， 平均孕周（39.71±0.97）周， 平均產次（0.69±0.64）次， 產前平均體質量指數（25.62±3.05）kg/m2， 新生兒平均體重（3352.10±441.03）g。兩組研究對象均無高血壓、糖尿病、心臟病以及腎病等， 且無急慢性感染性疾病， 飲食和生活習慣無特殊， 無抽煙、飲酒。兩組一般資料比較差異無統計學意義（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 方法

1. 2. 1 采集樣本 兩組產婦均在胎兒娩出后， 預防性采用縮宮劑之前， 避開夾鉗位置， 橫行切取子宮下段切口處上方平滑肌組織約 15 mm×5 mm×5 mm ， 放已備好的 0℃ K-H液中， 將血跡洗盡， 并放入 0℃ K-H 液中保存并迅速帶回實驗室。在<4 h測定子宮平滑肌肌條張力。再取1.0～2.0 g平滑肌組織， 利用0.9%氯化鈉液進行清洗再利用2.0 ml凍存管進行保存， 迅速將液氮放入進行速凍， 接著將其保存于-70℃的冰箱中， 以此來檢測蛋白、提取總RNA以及檢測基因。

1. 2. 2 測定子宮平滑肌肌條張力 利用電極刺激肌條使其有活性， 再與10 g肌肉張力換能器進行連接， 采取等長張力測定方法， 利用RM6240生物信號收集系統將其規律收縮后的波形極進行記錄， 持續20 min， 接著利用5×10-7 mol/L縮宮劑誘導肌條進行收縮， 并做好記錄， 對其收縮活動力、收縮幅度以及收縮頻率進行計算。

1. 2. 3 測定子宮平滑肌組織中CX43 mRNA 利用TRIzol將子宮平滑肌組織中總RNA提取出來， 利用分光光度計來對它在260 nm以及280 nm位置的吸光度進行測定， 并對總RNA的純度以及濃度進行計算， 此外， 利用1%瓊脂糖凝膠電泳來對RNA的完整度進行檢測。取2 ?g總RNA逆轉錄為cDNA， 利用實時熒光定量PCR儀來對其進行檢測。利用Primer5.0軟件對CX43以及β-action基因引物與探針進行設計。

1. 2. 4 測定子宮平滑肌組織中p-ERK1/2、p-p38、p-JNK1/2以及CX43蛋白 采用免疫印跡法， 具體步驟是：利用RIPA[2]將100 mg冰凍組織中總蛋白提取取來， 勻漿， 4℃， 離心5 min 12000 g， 將清液取出并利用離心管分別裝入， 再用BCA試劑盒來對蛋白進行定量， SDS-PAGE電泳、轉膜， 免疫反應， 化學發光， 顯影， 定影以及攝片。將IOD值利用凝膠定量分析軟件讀取出來， 目的蛋白表達相對量用蛋白IOD值/內參的IOD值表示， 用p-ERK1與p-ERK2、p-JNK1與p-JNK2的表達的相對量之和表示p-ERK1/2、p-JNK1/2的表達相對量。

1. 3 統計學方法 采用SPSS20.0統計學軟件處理數據。計量資料以均數±標準差（ x-±s）表示， 采用t檢驗；計數資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2. 1 兩組產婦離體子宮下段平滑肌收縮功能以及縮宮素誘導的收縮潛能情況 實驗組自發性收縮活動力（58.28±29.29）g·次/h， 收縮幅度（4.51±1.80）g， 收縮頻率（12.00±5.95）次/h；

在縮宮劑誘導之后， 收縮活動力（161.68±35.02）g·次/h， 收縮幅度（5.91±1.40）g， 收縮頻率（31.20±12.35）次/h， 收縮潛能177.37%。對照組自發性收縮活動力（95.71±43.29）g·次/h，

收縮幅度（5.61±2.58）g， 收縮頻率（19.42±13.00）次/h；在縮宮劑誘導之后， 收縮活動力（398.00±92.12）g·次/h， 收縮幅度

（8.18±2.18）g， 收縮頻率（50.45±15.05）次/h， 收縮潛能270.47%。實驗組產婦離體子宮平滑肌自發性收縮活動力以及收縮頻率均低于對照組（P<0.05）；實驗組收縮幅度低于對照組， 但差異無統計學意義（P>0.05）；在使用縮宮劑之后， 實驗組產婦離體子宮平滑肌的收縮活動力、收縮幅度、收縮頻率以及收縮潛能均低于對照組（P<0.05）。

2. 2 兩組產婦子宮下段平滑肌組織中CX43 mRNA表達、p-ERK1/2、p-p38、p-JNK1/2以及CX43蛋白情況 實驗組CX43 mRNA（0.72±0.33）， p-ERK1/2（2.18±0.41）， p-p38（0.77± 0.19）， p-JNK1/2（0.81±0.20）， CX43蛋白（0.08±0.02）；對照組CX43 mRNA（1.02±0.73）， p-ERK1/2（13.10±4.51）， p-p38（0.93± 0.23）， p-JNK1/2（1.10±0.50）， CX43蛋白（0.12±0.05）。實驗組產婦子宮平滑肌組織中CX43 mRNA表達、p-ERK1/2、p-p38、p-JNK1/2以及CX43蛋白均低于對照組（P<0.05）。

3 討論

本次研究顯示， 實驗組產婦離體子宮平滑肌自發性收縮活動力、收縮幅度以及收縮頻率均低于對照組。在使用縮宮劑之后， 兩組產婦離體子宮平滑肌的收縮活動力、收縮幅度、收縮頻率以及收縮潛能均顯著上升， 但是實驗組各項均低于對照組（P<0.05）。據相關研究表明， 適量的縮宮劑能夠增加子宮平滑肌收縮活動力等[1]。本次研究表明兩組產婦子宮平滑肌中的CX43 mRNA和CX43蛋白表達水平與p-ERK1/2、p-p38、p-JNK1/2表達量呈正比。

綜上所述， 子宮乏力性產后出血產婦離體子宮平滑肌收縮功能以及收縮潛能顯著衰退， 子宮平滑肌組織中MAPK信號轉導通路水平及CX43表達水平顯著下降， 并且兩者之間關系密切， 宮縮乏力性產后出血很大程度上是由于提示MAPK信號通路活化受阻以及CX43表達下降造成的MAPK信號轉導通路及CX43表達相互調節以及共同作用之下產婦產后出血形成以及發展。

參考文獻

[1] 黃科華.產婦子宮平滑肌組織中MAPK信號轉導通路及CX43表達與產后出血關系的研究. 福建醫科大學， 2011.

[2] 顏建英， 黃科華， 劉青閩， 等.產婦子宮平滑肌組織中MAPK信號轉導通路及CX43表達與產后出血關系的研究//第72屆國際婦產科聯盟常務理事會暨婦產科醫師論壇論文集， 2012： 274-283.

[收稿日期：2016-07-08]