三種熒光染料SYBR GreenⅠ、LCGreen PLUS、EvaGreen在實時定量PCR應用中的比較

邵曉青，呂　申，馮　璐，李　梅

(1.大連醫科大學附屬第二醫院 科研中心，遼寧 大連 116027；2.大連醫科大學附屬第一醫院 病理科，遼寧 大連 116011)

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三種熒光染料SYBR GreenⅠ、LCGreen PLUS、EvaGreen在實時定量PCR應用中的比較

邵曉青1，呂申1，馮璐2，李梅1

(1.大連醫科大學附屬第二醫院 科研中心，遼寧 大連 116027；2.大連醫科大學附屬第一醫院 病理科，遼寧 大連 116011)

目的探討定量PCR中三種熒光染料SYBR GreenⅠ、LC Green PLUS、EvaGreen定量效果的差異。方法以三個樣品基因組DNA為模板，應用巢氏PCR法先擴增G6PDH大片段，純化回收產物，定量，并分別以10倍、5倍和2倍倍比稀釋，作為定量PCR制作標準曲線的模板。應用real-time PCR儀指定試劑盒檢測模板質量，再分別以含有相同Taq酶并分別含有SYBR GreenⅠ、LC Green PLUS、EvaGreen染料的試劑進行小片段定量PCR擴增，每個濃度3復孔。標準曲線擬合，結果分析用儀器自帶分析軟件完成。結果應用三種熒光染料獲得的標準曲線回歸系數≥0.98(除1個樣品為0.97)，10倍、5倍梯度稀釋標準曲線PCR效率為0.8～1.0，2倍稀釋標準曲線PCR效率應用SYBR GreenⅠ有2/3樣品>1.2，而后兩種染料為0.9～1.2。應用SYBR GreenⅠ較另兩種染料的標準曲線誤差較大，且樣品間分散度也較大。結論在定量PCR中飽和染料LC Green PLUS、EvaGreen的定量效果好于SYBR GreenⅠ。

定量PCR；SYBR GreenⅠ；LC Green PLUS；EvaGreen

[引用本文]邵曉青，呂申，馮璐，等.三種熒光染料SYBR GreenⅠ、LCGreen PLUS、EvaGreen在實時定量PCR應用中的比較[J].大連醫科大學學報，2016,38(5)：428-431.

實時定量PCR(quantitative real-time PCR, qPCR)是重要的生物、醫學研究方法之一，廣泛應用于mRNA、miRNA等基因表達定量分析，基因拷貝數變異(CNV)分析，線粒體DNA檢測，基因甲基化分析，異源基因檢測等[1-2]。探針法和染料法是進行實時定量PCR定量分析的兩種基本方法。探針法雖然定量分析相對敏感，但熒光探針設計較復雜，依據目的片段序列不同有時需要設計多條探針進行條件優化，另外探針合成費用較高，探針保存條件要求比較嚴格。染……