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α-氨基酸各官能團對其Co(Ⅱ)配合物可逆氧合性能的影響

2016-11-02 02:01:41魏雅娜王吉德
高等學校化學學報 2016年10期
關鍵詞:研究

薛 鵬, 魏雅娜, 岳 凡, 張 翼, 王吉德

(1. 新疆大學化學與化工學院, 石油天然氣精細化工教育部和自治區共建重點實驗室, 烏魯木齊 830046;2. 中南大學化學與化工學院, 生物傳感與表面分析研究所, 長沙 410083;3. 新疆應用職業技術學院石油與化學工程系, 奎屯 833200)

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α-氨基酸各官能團對其Co(Ⅱ)配合物可逆氧合性能的影響

薛鵬1,2, 魏雅娜1,3, 岳凡1, 張翼2, 王吉德1

(1. 新疆大學化學與化工學院, 石油天然氣精細化工教育部和自治區共建重點實驗室, 烏魯木齊 830046;2. 中南大學化學與化工學院, 生物傳感與表面分析研究所, 長沙 410083;3. 新疆應用職業技術學院石油與化學工程系, 奎屯 833200)

選擇氧合性能良好的組氨酸(His)-Co(Ⅱ)作為研究對象, 分別掩蔽—NH2、 取代—O-和去除—COO-, 得到短肽、 偽肽和多胺等類組氨酸結構. 采用UV-Vis光譜法研究了α-氨基酸中的3個官能團對其Co(Ⅱ)配合物氧合性能的影響. 對比研究表明:α-氨基酸中—NH2對其Co(Ⅱ)配合物的吸氧性具有決定作用; —COO-對其Co(Ⅱ)配合物氧合作用的可逆性起關鍵作用; 而—O-對其Co(Ⅱ)配合物的吸氧性影響不大. 在前期研究結果的基礎上, 對α-氨基酸-Co(Ⅱ)配合物可逆吸收和釋放O2的機理進行了探討.

α-氨基酸; Co(Ⅱ)配合物; 可逆氧合; 組氨酸; 氧載體

天然氧載體(如血紅蛋白和肌紅蛋白)對生物體內分子O2的傳遞和貯存等生命活動起著重要的作用[1], 研究其作用方式和機理對探索生物體奧秘具有重要意義[2,3]. 但是天然氧載體結構復雜, 影響氧合作用的因素眾多, 因此常選擇結構相對簡單的過渡金屬配合物作為模型化合物來模擬研究生物的氧合作用[4~6].

在眾多人工氧載體模型化合物中, 常用的金屬離子為Co(Ⅱ), Fe(Ⅱ), Cu(Ⅰ)和Mn(Ⅲ)等[7~10], Co(Ⅱ) 由于具有良好的穩定性而被廣泛研究[11,12]. 氨基酸-Co(Ⅱ)配合物在近似生理環境(室溫、 水溶液)中表現出良好的氧合可逆性[13~16], 因此研究氨基酸-Co(Ⅱ)配合物的氧合機理有利于揭示生物氧載體的可逆載氧機理.

Hearon等[17]首先發現了His-Co(Ⅱ) 配合物在水溶液中具有很好的可逆氧合性能. Martell等[18]發現His-Co(Ⅱ)和其它氨基酸-Co(Ⅱ) 配合物室溫下在水溶液中具有不同的可逆氧合性能, 是研究氧載體很好的模型化合物.

為了研究Co(Ⅱ) 配合物可逆吸收分子O2的機理, 我們分別選擇了不同的雙官能團配體:α-氨基酸類(—NH2和—COO-)、α-氨基醇類(—NH2和—O-)、 多胺類(—NH2)和含羥基的羧酸類(—O-和—COO-)配體, 對比研究了其Co(Ⅱ)配合物在水溶液中的氧合性能[19], 發現只有氨基酸類配體的Co(Ⅱ)配合物具有可逆吸氧性能. 通過測試20多種氨基酸的氧合性能, 發現α-氨基酸Co(Ⅱ)配合物都具有可逆氧合能力, 而β-氨基酸Co(Ⅱ)配合物沒有氧合能力[20]. 因此, 確定α-氨基酸結構單元為其Co(Ⅱ)配合物具有氧合能力的關鍵單元. 為了考察α-氨基酸官能團鄰位再聯結一個官能團后對可逆吸氧性能的影響, 分別研究了2,3-二氨基丙氨酸(DAPA)和β-(2-吡啶基)-α-丙氨酸(PyA)的氧合性能, 結果發現引入的氨基[21]和吡啶基[22]使α-丙氨酸(Ala)氧合性能有明顯的提高. 對His、 組氨醇和組胺的Co(Ⅱ)配合物的對比研究表明, —COO-的共軛作用對Co(Ⅱ)配合物的可逆吸氧性能有著重要的作用[23].

α-氨基酸中包含3種官能團(—NH2, —O-和—COO-), 為了弄清α-氨基酸結構單元中各官能團本身及其之間的協同作用對氧合作用的貢獻, 本文選擇氧合性能良好的組氨酸(His)為研究對象, 分別利用Fmoc保護基掩蔽—NH2、 甲酯基(—OMe)取代—O-和去除—COO-氧合結構單元后研究其氧合性能. 通過紅外表征、 氧電極測試和質譜分析等方法均可以判斷配合物配位、 氧合前后的形態變化[24,25]. 但由于Co(Ⅱ)配合物吸氧前后的UV-Vis光譜差異明顯, 因此UV-Vis光譜法是實時表征Co(Ⅱ)配合物氧合反應最簡單、 可靠的手段[23]. 本文通過UV-Vis光譜在室溫下考察了His和幾種類His物質的氧合可逆性和氧合動力學性質, 對比評價了其氧合性能, 從而確定了各官能團對氧合作用的影響. 本文研究結果對探討α-氨基酸單元中各官能團對可逆氧合作用的貢獻、 發現并合成具有良好可逆吸氧的模型化合物及揭示生物氧載體的可逆載氧機理提供了重要實驗依據.

1 實驗部分

1.1試劑與儀器

組氨酸、 苯丙氨酸(Phe)、N,1-二-Fmoc-L-組氨酸[Fmoc-His(Fmoc)]、 組氨酸甲酯(His-OMe)和Fmoc-L-苯丙氨酸(Fmoc-Phe)購于吉爾生化(上海)有限公司; 組胺(Hist)和四水合醋酸鈷[Co(OAc)2·4H2O, Co(Ⅱ)]購于成都西亞化工股份有限公司;N,N-二甲基甲酰胺(DMF)購于天津市致遠化學試劑有限公司; N2和O2的純度均為99.9%.

UV2550型紫外-可見光譜儀(日本Shimadzu公司); XS105DU型高精度天平(瑞士Mettler Toledo公司); PHS-3C型pH計(上海盛磁公司).

1.2氨基酸Co(Ⅱ)配合物氧合可逆性測試

移取10.0 mL配體溶液于樣品池中, 在N2氣保護下加入10.0 mL Co(Ⅱ)水溶液(表1), 用NaOH調節溶液pH值, 在300~600 nm波長范圍內測定N2氣氛下配合物的吸收光譜; 然后通O2氣10 min, 在O2氣氛下測定氧合配合物的吸收光譜. 此前先分別測定配體溶液與Co(Ⅱ)溶液的吸收光譜.

Table 1 Concentration of Co(Ⅱ) and ligands, volume ratio of the solvent and pH value of the reaction

1.3 Co(Ⅱ)配合物氧合動力學測試

在pH=7.3~9.0和Co(Ⅱ)氧合配合物最大吸收波長條件下, 分別在通入O2和N2時測定吸光度隨時間的變化. 以一次交替充入N2/O2的測試為1個可逆氧合循環, 通過測試吸光度的變化來評價配合物的可逆氧合性能.

Fig.1 Treatment of different functional groups of histidine

2 結果與討論

為確定α-氨基酸各官能團在氧合過程中的貢獻, 以His作為母體, 分別選擇掩蔽—NH2、 取代—O-和去除—COO-后的類His化合物進行氧合性能研究(圖1).

2.1α-氨基酸結構單元中—NH2對氧合性能的影響

2.1.1His-Co(Ⅱ)與Fmoc-His(Fmoc)-Co(Ⅱ) 配合物氧合性能及動力學性能研究由UV-Vis光譜[圖2(A)]可見, 室溫下, Co(Ⅱ)(譜線a)在520 nm附近處有微弱的吸收峰, His配體(譜線b)溶液在300~600 nm波長范圍內沒有明顯的特征吸收峰. N2氣氛下混合Co(Ⅱ)和His溶液, 譜線發生變化(譜線c), 表明兩者配位形成His-Co(Ⅱ)配合物, 此時溶液呈淺粉色(圖3). 用O2代替N2, 在320和384 nm處出現2個新的較強的吸收峰(譜線d), 溶液顏色迅速由淺粉色變為黃色, 表明His-Co(Ⅱ)與O2發生作用, 生成氧合配合物. 再通入N2時氧合吸收峰會明顯降低, 光譜曲線與初始曲線重合(譜線c′), 黃色溶液又會變成淺粉色, 表明His-Co(Ⅱ)氧合配合物發生脫O2作用. 重復通入O2時光譜曲線又會增加至初始通O2附近位置(譜線d′), 表明His-Co(Ⅱ)配合物具有良好的可逆吸收-釋放O2性能.

Fig.2    UV-Vis spectra of His-Co(Ⅱ)(A) and Fmoc-His(Fmoc)-Co(Ⅱ)(B) complexes (A) a. Co(Ⅱ); b. His; c/c′. His-Co(Ⅱ)-N2 1st/2nd; d/d′. His-Co(Ⅱ)-O2 1st/2nd; (B) a. Co(Ⅱ); b. Fmoc-His(Fmoc); c/d. Fmoc-His(Fmoc)-Co(Ⅱ)-N2/O2.

Fig.3 Color variations of His-Co(Ⅱ) complex during reversible oxygenation reaction

由圖2(B)可知, 室溫下, Co(Ⅱ)(譜線a)在510 nm附近處有微弱的吸收峰, Fmoc-His(Fmoc)配體(譜線b)溶液在300~600 nm波長范圍內沒有明顯的特征吸收峰. N2氣氛下混合Co(Ⅱ)和Fmoc-His(Fmoc)溶液, 譜線發生變化(譜線c), 表明兩者配位形成Fmoc-His(Fmoc)-Co(Ⅱ)配合物. 用O2代替N2, 譜線未發生變化(譜線d), 溶液顏色未變, 表明Fmoc-His(Fmoc)-Co(Ⅱ)配合物不能吸收O2.

His-Co(Ⅱ)具有良好的可逆吸收-釋放O2性能, 而Fmoc-His(Fmoc)-Co(Ⅱ)配合物沒有吸收O2的能力. 這證明了—NH2在可逆吸O2中的重要作用. 但也不排除雙Fmoc-基團引起的空間位阻阻礙O2分子進入配位所起的作用, 因此選擇單Fmoc基苯丙氨基酸(Fmoc-Phe)進一步驗證—NH2在結構單元吸O2過程中的作用.

2.1.2Phe-Co(Ⅱ)與Fmoc-Phe-Co(Ⅱ)配合物氧合性能及動力學性能研究為了進一步確定—NH2對氧合作用的影響, 同時選擇了Phe和Fmoc-Phe 2種氨基酸進行對比研究. 由UV-Vis光譜[圖4(A)]可見, 室溫下Phe配體(譜線b)溶液在300~600 nm波長范圍內均未出現明顯特征吸收峰. 在N2氣氛下混合Co(Ⅱ)與Phe溶液, 譜線發生變化(譜線c). 用O2代替N2, 在385和540 nm附近出現2個新的較強的吸收峰(譜線d), 溶液顏色迅速由粉紅色變為橙黃色, 表明Phe-Co(Ⅱ)配合物與O2發生作用, 生成氧合配合物. 再次通入N2, 385 nm處的氧合吸收峰的強度減弱, 譜線下降(譜線c′), 溶液顏色由橙黃色變成淺粉色, Phe-Co(Ⅱ)氧合配合物發生脫氧作用. 重復通入O2, 溶液顏色又會變回橙黃色, 光譜曲線又會上升(譜線d′). 由此可以判定Phe-Co(Ⅱ) 配合物具有可逆的吸收-釋放O2性能.

Fig.4    UV-Vis spectra of Phe-Co(Ⅱ)(A) and Fmoc-Phe-Co(Ⅱ)(B) complexes (A) a. Co(Ⅱ); b. Phe; c/c′. Phe-Co(Ⅱ)-N21st/2nd; d/d′. Phe-Co(Ⅱ)-O21st/2nd; (B) a. Co(Ⅱ); b. Fmoc-Phe; c/d. Fmoc-Phe-Co(Ⅱ)-N2/O2.

由圖4(B)可見, 室溫下Fmoc-Phe配體(譜線b)溶液在300~600 nm波長范圍內沒有明顯的特征吸收峰. N2氣氛下混合Co(Ⅱ)和Fmoc-Phe溶液, 譜線發生微小變化(譜線c), 形成Fmoc-Phe-Co(Ⅱ)配合物. 用O2代替N2, 譜線未發生變化(譜線d與譜線c重合), 證明Fmoc-Phe-Co(Ⅱ)配合物不能吸收O2.

His-Co(Ⅱ)和Phe-Co(Ⅱ)都具有很好的可逆氧合能力, 而用Fmoc-保護基屏蔽了—NH2的Fmoc-His(Fmoc)和Fmoc-Phe, 與Co(Ⅱ)離子配位形成的配合物沒有吸收O2的能力. 這說明在α-氨基酸結構單元中—NH2起了重要配位作用, 有—NH2官能團時可以吸收O2, 缺少—NH2將不吸收O2. 這與實驗室先前工作認為含有—COO-和—O-雙官能團配體的Co(Ⅱ)配合物沒有吸氧性能的結論相符[19].

Fig.5 UV-Vis spectra(A) and dynamics test(B) of (His-OMe)-Co(Ⅱ) complexes a. Co(Ⅱ); b. His-OMe; c/c′:(His-OMe)-Co(Ⅱ)-N2 1st/2nd; d/d′:(His-OMe)-Co(Ⅱ)-O21st/2nd.

2.2α-氨基酸結構單元中—O-對氧合性能的影響

為驗證α-氨基酸結構單元羧基中—O-的作用, 用—OMe基團取代—O-, 選擇His-OMe對比His進行氧合性能測試. 由圖5(A)可見, 室溫下His-OMe配體(譜線b)溶液在300~600 nm波長范圍內沒有明顯的特征吸收峰. N2氣氛下混合Co(Ⅱ)和His-OMe溶液, 譜線發生變化(譜線c), 形成淺粉色的(His-OMe)-Co(Ⅱ)配合物. 用O2代替N2, 在320和385 nm處出現2個新的較強的吸收峰(譜線d), 溶液顏色迅速由淺粉色變為黃色, 表明(His-OMe)-Co(Ⅱ)與O2發生作用, 生成氧合配合物. 再通入N2時譜線明顯降低(譜線c′), 黃色溶液又會變成淺粉色, 表明(His-OMe)-Co(Ⅱ)氧合配合物發生脫O2作用. 重復通入O2時譜線又會增強至初始通O2附近位置(譜線d′), 證明(His-OMe)-Co(Ⅱ)配合物具有良好的可逆吸收-釋放O2性能.

為了考察配合物的可逆吸收-釋放O2速率與老化過程, 對(His-OMe)-Co(Ⅱ)配合物氧合性能進行UV-Vis光譜動力學測試, 選定吸收峰在320 nm處, 在O2/N2交替下考察吸光度隨時間的變化. 通過圖5(B)可以看出, (His-OMe)-Co(Ⅱ)配合物具有較快的氧合速率, 在400 s內即達到吸O2飽和; 脫O2過程需要350 s. 將其配合物首次吸收O2飽和值定為100%, 經過40 h反復交替通入N2/O2, 發現其氧合能力幾乎未衰減, 仍達到初始值的98%以上. 這表明(His-OMe)-Co(Ⅱ)配合物的氧合能力很穩定, 可逆氧合性能及老化壽命類似His-Co(Ⅱ)配合物.

對比His-Co(Ⅱ)和(His-OMe)-Co(Ⅱ) 2種配合物在水溶液中的吸氧性能和動力學測試, 發現用—OMe基取代His中的—O-對His可逆氧合性能沒有影響, 且對吸O2的可逆性影響不大.

2.3α-氨基酸結構單元中—COO-對氧合性能的影響

Fig.6    UV-Vis spectra of Hist-Co(Ⅱ) complexes a. Co(Ⅱ); b. Hist; c/d. Hist-Co(Ⅱ)-N2/O2 1st; d′. Hist-Co(Ⅱ)-N2 2nd.

為驗證α-氨基酸單元中的—COO-對氧合性能的影響, 選擇沒有—COO-的組胺(Hist)與His對比, 進行氧合性能研究. 由圖6可見, 室溫下Hist配體(譜線b)溶液在300~600 nm波長范圍內沒有明顯的特征吸收峰. 在N2氣氛下混合Co(Ⅱ)和Hist溶液, 光譜曲線發生微小變化(譜線c), 形成Hist-Co(Ⅱ)配合物. 用O2代替N2, 在314和371 nm處出現2個新的較強的吸收峰(譜線d), 表明Hist-Co(Ⅱ)與O2發生作用, 生成氧合配合物. 再通入N2時光譜曲線沒有變化(譜線d′), 證明Hist-Co(Ⅱ)配合物能夠吸收分子O2, 但不能釋放分子O2, 無可逆氧合性能.

對比His-Co(Ⅱ)和Hist-Co(Ⅱ) 2種配合物在水溶液中吸收O2的性能, 發現His去掉—COO-后(Hist)具有特殊的吸O2行為: 即可吸收O2但不釋放O2, 這與多胺Co(Ⅱ)吸O2不放O2的氧合性質相似[19]. 由于Hist配體只有2個N原子配位, O2分子以過氧形式與Co(Ⅱ)發生配位, —NH2為給電子作用, 使Co-O2的電子密度增加而不易脫O2, 因此Hist-Co(Ⅱ)配合物的吸O2能力很強, 但是可逆性極差[22]. 可見吸氧單元中—COO-的作用與可逆吸放O2有關, 當存在—COO-時Co(Ⅱ)配合物具有放O2性能.

2.4α-氨基酸-Co(Ⅱ)可逆吸收-釋放O2的機理探討

關于His-Co(Ⅱ)吸收O2的機理已有文獻[15,26]報道. 但這些文獻都沒有探討Co(Ⅱ)配合物可逆吸收和釋放O2的機理. 本文在實驗結果和前期研究的基礎上, 以His-Co(Ⅱ)為模型, 對α-氨基酸-Co(Ⅱ)配合物可逆吸收和釋放O2的機理進行了探討(圖7).

Fig.7 Calculated simulation of oxygenation of His-Co(Ⅱ) complexes

通過氧合前后的密度泛函理論(DFT)計算, 氧合配合物中N—C, C—O, Co—O和Co—N鍵長變短. 如His-Co(Ⅱ)配合物中Co—O, Co—N和Co—N(咪唑)的鍵長分別為0.22723, 0.20113, 0.20775, 0.22847和0.19847, 0.19910 nm, 氧合后變為0.19519, 0.19286, 0.19361, 0.20006, 0.19632和0.19580 nm[27]. 結果表明氧合反應中α-氨基和—COO-發生了共軛作用. 由于—COO-與鈷離子配位的能力弱于—NH2, 使Co-O2的電子密度適中. O2分壓降低時, —COO-重新取代O2發生脫O2反應, 又變回His-Co(Ⅱ)配合物(圖7結構Ⅱ). 當O2和N2(使O2分壓降低)氣氛交替時, 隨著電子的轉移和共軛作用的交替, His-Co(Ⅱ)配合物與O2的結合構型也隨之發生可逆轉變(圖7結構Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ)[20].

隨著可逆氧合反應的進行, His-Co(Ⅱ)配合物逐漸發生老化, 結構轉變為(圖7結構Ⅴ), 此時His-Co(Ⅱ)配合物氧合能力減弱.

3 結  論

通過UV-Vis分光光度法研究了α-氨基酸結構單元中各官能團對氧合性能的影響, 發現—NH2在氧合配合物中起到重要作用, 為α-氨基酸-Co(Ⅱ)吸收O2的核心官能團. 在α-氨基酸-Co(Ⅱ)配合物中存在—NH2即可發生氧合反應吸收O2, 沒有—NH2則無法發生氧合作用; —COO-對α-氨基酸-Co(Ⅱ)配合物可逆吸放氧性能影響很大, 沒有—COO-不能釋放O2; —O-對α-氨基酸-Co(Ⅱ)配合物的氧合性能和可逆性無影響. 在實驗結果和前期研究的基礎上, 以His-Co(Ⅱ)為模型, 探討了α-氨基酸-Co(Ⅱ)配合物可逆吸收和釋放O2的機理. 本文研究結果初步確定了α-氨基酸結構單元中3種官能團對其Co(Ⅱ)配合物氧合性能的影響, 對發現和合成具有良好可逆吸氧性能的化合物具有參考價值.

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(Ed.: F, K, M)

Effects of Functional Groups inα-Amino Acids on Reversible Oxygenation Performance of Co(Ⅱ) Complexes?

XUE Peng1,2, WEI Yana1,3, YUE Fan1, ZHANG Yi2, WANG Jide1*

(1.KeyLaboratoryofOilandGasFineChemicals,MinistryofEducation&XinjiangUygurAutonomousRegion,CollegeofChemistryandChemicalEngineering,XinjiangUniversity,Urumqi830046,China;2.InstituteofBiosensingandSurfaceAnalysis,CollegeofChemistryandChemicalEngineering,CentralSouthUniversity,Changsha410083,China;3.PetroleumChemicalEngineeringDepartment,XinjiangCareerTechnicalCollege,Kuitun833200,China)

α-Amino acid; Co(Ⅱ) complex; Reversible oxygenation; Histidine; Oxygen carrier

10.7503/cjcu20160298

2016-04-29. 網絡出版日期: 2016-09-20.

國家自然科學基金(批準號: 21162027, 21261022)資助.

O614

A

聯系人簡介: 王吉德, 男, 博士, 教授, 主要從事配位化學和催化研究. E-mail: awangjd@sina.cn

? Supported by the National Natural Science Foundation of China(Nos.21162027, 21261022).

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