廣西地區不同壯族人群Kell血型系統抗原基因分布特征的研究*

周　燕，申衛東，周先果，劉金蓮，莫秋紅

(南寧輸血醫學研究所/南寧中心血站，南寧 530007)

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·調查報告·doi:10.3969/j.issn.1671-8348.2016.27.027

廣西地區不同壯族人群Kell血型系統抗原基因分布特征的研究*

周燕，申衛東，周先果，劉金蓮，莫秋紅

(南寧輸血醫學研究所/南寧中心血站，南寧 530007)

目的了解廣西地區不同地域壯族人群Kell血型系統k和K、Jsa和Jsb抗原的分布和基因多態性特征。方法采用聚合酶鏈反應-序列特異性引物法(PCR-SSP)方法對1 025名廣西地區不同壯族人群的Kell血型系統進行基因分型。結果廣西地區不同壯族人群Kell血型系統基因頻率為K=0.000 0，k=1.000 0；Jsa=0.000 0，Jsb=1.000 0。結論廣西地區不同壯族人群Kell基因頻率分布呈單態性分布，與文獻報道的中國其他的人群分布特點一致。

Kell血型系統；基因頻率；廣西[壯族自治區]；PCR-SSP

在目前國際輸血協會已確認的33個紅細胞血型系統中，Kell血型系統是僅次于ABO和Rh的第三大血型系統[1]；抗-Kell血型系統抗原的抗體能介導免疫輸血反應和新生兒溶血癥。 Kell血型系統抗原發現于1946年，源自于患者Kelleher檢測出抗-Kell抗體而導致她的新生兒產生溶血性疾病，該抗體相應抗原即為Kell血型系統的第1個抗原K；1949年Levine發現了Kell系統的第2個抗原k。1958年Giblett在黑人中發現了Kell血型系統中的新抗原Jsa，1963年Walker發現了Jsa的對偶抗原Jsb，迄今已發現了25個Kell血型系統的抗原。k和K抗原是Kell血型系統中最具有臨床意義的Kell抗原，在不同人群中有不同的頻率分布。在大多數人群中，k抗原較K抗原常見,黑人人群中98%是K-k+表型，高加索人群中為91%[2]；而Jsb則為高頻抗原。目前國內有關Kell血型系統的研究多建立在漢族人群的k和K抗原基礎之上，對Jsa和Jsb抗原的研究甚為稀少。廣西是壯族人口主要聚集地，迄今國內少見無壯族人群Kell血型系統的研究，壯族人群Kell血型系統是否與中國其他民族人群或白種人等人群存在差異？本研究采用聚合酶鏈反應-序列特異性引物法(PCR-SSP)對9個廣西壯族人口分布較密集地區的人群進行Kell血型系統基因分型，以期了解廣西壯族人群Kell血型系統k和K抗原，Jsa和Jsb的分布和基因多態性特征。

1　資料與方法

1.1一般資料2010～2013年間分別從廣西壯族人口聚集地武鳴、上林、隆安、賓陽、平果、大化、都安、巴馬、大新共9個地區采集無血緣關系血液樣本[3]。本研究在采集血液樣本之前均經受試對象本人的知情同意，并與之簽訂臨床研究知情同意書。其中武鳴地區采集110份樣本，上林地區采集109份樣本，隆安地區采集110份樣本，賓陽地區采集96份樣本，平果地區采集120份樣本，大化地區采集120份樣本，都安地區采集120份樣本，巴馬地區采集120份樣本，大新地區采集120份樣本，共1 025份樣本。每份樣本均采集EDTA抗凝血5 mL，置于-20 ℃冰箱保存。

1.2設備與試劑Magcore Nucleic Acid Extraction Kit(中國臺灣RBC Bioscience，批號：PM-K14-11332)，人類Kell紅細胞血型系統基因分型檢測試劑盒(美國G&T Biotech公司產，批號：#RB06)，rTaq DNA聚合酶[TaKaRa Biotechnology(Dalian)，批號：CK7601AA)]，瓊脂糖凝膠(西班牙Biwest，批號111860)，DNA green綠如藍核酸染料(北京天恩澤基因科技有限公司，批號：108111)。MagCore?HF16全自動核酸提取儀(中國臺灣RBC Bioscience)，GeneAmp9700型PCR擴增儀(美國ABI)，Runone全套水平電泳儀(美國Embitec)，BIO-BEST凝膠成像儀(德國Simen)。

1.3DNA提取使用MagCore?HF16全自動核酸提取儀，按照MagCore?Nucleic Acid Extraction Kit試劑說明書進行。

1.4PCR擴增采用PCR-SSP，使用序列特異性引物，通過PCR 反應，特異性擴增Kell基因片段。PCR擴增條件為：95 ℃ 5 min 30個；95 ℃ 30 s，60 ℃ 30 s，72 ℃ 90 s，循環30次；72 ℃再延伸5 min，降溫至4 ℃，完成擴增。

1.5電泳配制2%瓊脂糖凝膠(每100 mL凝膠中含5 μL DNA green綠如藍核酸染料)，取5 μL PCR產物直接點樣到凝膠孔中，使用0.5×TBE緩沖液在100 V電壓下電泳20 min，然后在凝膠成像分析系統下拍照記錄實驗結果。

表2　Kell血型系統等位基因在不同人群中的分布

NA：無法評估；-：無法提取數據。

1.6統計學處理采用SPSS17.0統計學軟件進行統計分析，不同人群基因頻率分布比較采用χ2檢驗，以顯示基因頻率分布的差異性。以P<0.05為差異有統計學意義。

2　結　果

2.1廣西壯族人群Kell血型系統抗原基因頻率分布情況廣西9個壯族聚集地的1 025份血樣中均未發現K(+)及Jsa(+)樣本，K和Jaa基因頻率為0，而к與Jsb基因頻率則為1，即廣西壯族人群Kell血型系統呈單態性分布，見表1。

2.2廣西壯族人群與其他人群Kell血型系統基因多態性比較西藏藏族、成都漢族、青海土族及蒙古族與本組壯族相似，在人群中均未發現K抗原；而歐美人群中K抗原基因頻率要明顯高于中國人群。此外，Jsa抗原目前也僅在非洲黑人中發現,見表2。

3　討　論

K抗原在所有人群中的頻率較低，而k抗原在所有人群中都有較高的存在率。本研究中采用PCR-SSP方法對本組1 025名壯族人群Kell血型系統的K、k抗原進行基因分型，本組壯族人群均為kk，提示k基因頻率為1，Kell血型系統呈單態性分布，這與國內漢族、西藏藏族及青海土族、蒙古族的研究一致；另據賈嫈[6]報道在青海地區的撒拉族中發現1例Kk雜合子，推測與當地撒拉族人群與居住在印度北部人群通婚有關。但總體而言，我國人群K抗原的基因頻率非常低，正是由于中國人群中K抗原頻率十分低，因此產生抗-K抗體并且再次遇到K陽性血輸注的概率基本為零，所以在我國K抗原鑒定并沒有納入常規檢測范圍。由于紅細胞血型系統的分布有種族和地區差異，因此所介導的免疫輸血反應及新生兒溶血病的主要特征也有所差別。從表2中可發現，白種人群中K抗原基因頻率要明顯高于中國人群(P<0.05)，白種人群中因輸血或妊娠等免疫因素而產生抗-K抗體的概率較高，是除ABO和Rh系統以外最常見的紅細胞抗體。鑒于抗-K抗體能引起嚴重的免疫性輸血反應和新生兒溶血病[14-15]，因此在歐美國家的輸血治療工作中，K抗原的鑒定成為獻血者和患者血型檢查的常規項目。同時，對該組1 025名壯族人群Kell血型系統的Jsa和Jsb抗原進行基因分型檢測，廣西壯族人群與臺灣漢族、北京漢族類似，均未發現Jsa抗原存在。由于全球對Jsa和Jsb抗原的分布研究尚少，目前僅在非洲黑人中報道過Jsa抗原的存在，故而本研究結果豐富了國內Jsa和Jsb抗原分布的研究，且結果也與文獻報道相一致。

與其他血型系統類似，Kell血型也有無效型，稱為K0型，Chown于1957年在國際報道，1984年郝露萍等[16]報道了國內1例K0型；2007年上海血液中心在24 093名健康無償獻血者中發現1例K0型，其發生率與國外研究類似，約為0.004%[17]。而在本次研究中，并未發現K0型，估計與樣本數量有關。但值得注意的是，K0型個體若被免疫后能產生抗Ku抗體，該抗體能與除K0表型以外所有的紅細胞反應，同樣可引起新生兒溶血病及溶血性輸血反應。這提示在今后的臨床輸血實踐中，要警惕K0型的存在及可能引起的免疫異常性疾病的發生。

此外，以往的紅細胞血型研究多采用經典的血清學方法，雖然該方法較為直接且簡單易行，但也存在一些不足，如某些紅細胞血型系統的抗血清難以獲得、效價低、價格昂貴等，因此對該部分血型系統不適合采用血清學方法進行大規模篩選。進入21世紀以后，分子生物學技術發展迅速，使運用以DNA為基礎的基因分型技術檢測紅細胞血型成為可能。血型基因分型技術檢測結果準確、成本低，更為重要的是DNA標本容易保存，利于核查，適合大規模篩查?；蚍中偷姆肿由飳W技術的發展也使得建立稀有血型供者庫，為臨床提供稀有紅細胞成為可能，這在本文的研究工作中得到充分的認證。

廣西南寧作為東盟國際博覽會的永久舉辦地，國際交流與合作日益頻繁，且當今社會的流動性已較以前大為增加，因此在醫療實踐中遇到外籍或其他民族的獻血者、用血者的概率已大大提高，通過該研究了解了廣西地區壯族人群Kell紅細胞血型系統呈單態性分布，這對確保臨床輸血安全將起到重要作用。另外通過本研究，所獲得的廣西地區壯族人群Kell血型中K、k抗原及Jsa、Jsb抗原的基因頻率，在一定程度上豐富了本地區壯族人群紅細胞血型系統的群體遺傳學資料，也可作為中華紅細胞稀有血型庫建設的依據。

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The characteristic of gene polymorphism of Kell blood group in Zhuang population from Guangxi region in China*

Zhou Yan,Shen Weidong,Zhou Xianguo,Liu Jinlian,Mo Qiuhong

(NanningInstituteofTransfusionMedicine/NanningBloodCenter,Nanning,Guangxi530007,China)

ObjectiveTo investigate gene polymorphism of Kell blood group in different Zhuang population from Guangxi region.MethodsThe genotypes of Kell blood group of 1025 non-related individuals in different areas of Guangxi Zhuang population were analyzed by PCR-SSP.ResultsThe Kell antigen in all individuals was homozygous,the gene frequency of K and Jsa was 0,while that of k and Jsb was 1.000.ConclusionThe distribution characteristic of Kell blood group in Guangxi Zhuang population was monomorphism,which was similar to other Chinese population reported by literatures.

Kell blood-group system;gene frequency;Guangxi;PCR-SSP

廣西自然科學基金資助項目(2010GXNSFA013262)；廣西衛生廳自籌經費科研課題(Z2010196)；南寧市科學研究與技術開發計劃項目(201003048C-1)。作者簡介：周燕(1979-)，副主任醫師，碩士，主要從事輸血醫學研究。

R394.4

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1671-8348(2016)27-3827-03

2016-02-11

2016-04-06)