浙江省鴨、雞、鵝群感染坦布蘇病毒的血清學調查與分析

李劍秋，周彩琴，余　斌，吳雪軍，趙靈燕，周　蕾，張　存，徐　輝，*

(1.浙江工商大學 杭州商學院，浙江 杭州 310012; 2.浙江省動物疫病預防控制中心，浙江 杭州 311199; 3.浙江省農業科學院 畜牧獸醫研究所，浙江 杭州 310021)

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浙江省鴨、雞、鵝群感染坦布蘇病毒的血清學調查與分析

李劍秋1，周彩琴2，余斌3，吳雪軍2，趙靈燕2，周蕾2，張存3，徐輝2，*

(1.浙江工商大學 杭州商學院，浙江 杭州 310012; 2.浙江省動物疫病預防控制中心，浙江 杭州 311199; 3.浙江省農業科學院 畜牧獸醫研究所，浙江 杭州 310021)

為分析坦布蘇病毒(TMUV)在鴨、雞、鵝群中的感染情況，開展了血清流行病學調查。2010—2014年間，在浙江省11個地市采集雞、鴨、鵝血清樣品4 989份，采用ELISA方法檢測TMUV抗體水平。結果表明：鴨、鵝、雞的抗體陽性率分別為27.33%，6.94%，1.11%。按年度分析，在2010—2011年鴨TMUV引起的產蛋下降疫情流行期間，鴨感染群的TMUV抗體陽性率為54.83%，鵝、雞未采樣檢測；2012年鴨、鵝TMUV感染群的抗體陽性率分別為33.88%，20.00%，雞未檢測到抗體陽性群；2013年鴨、鵝、雞TMUV感染群的抗體陽性率分別為49.68%，10.00%，28.00%；2014年鴨、鵝TMUV感染群的抗體陽性率分別為39.19%，6.67%，雞未檢測到抗體陽性群。總體來看，鴨群在2010—2011年TMUV流行期間的抗體水平最高，表明鴨群是TMUV感染的主要禽種。

坦布蘇病毒；ELISA抗體；血清流行病學調查

鴨坦布蘇病是一種由坦布蘇病毒(TMUV)引起的以高發病率，低死亡率為特征的產蛋急驟下降、腹瀉、神經癥狀的鴨傳染病，其產蛋率可以從產蛋高峰在2～3 d內驟降10%～30%。該病2010年首先發生于江蘇、福建、浙江等沿海地區，隨后逐步蔓延到全國大部分地區[1-3]。后續研究表明，TMUV還可感染鵝、雞。潘金金等[4]利用在江蘇等地分離到的病毒毒株對14日齡雛鵝進行人工攻毒試驗，可引起雛鵝100%發病死亡；陳珍等[5]研究認為TMUV在雞群中有一定的感染力度。該病2010年在浙江省暴發流行，以后幾年僅呈現零星的散發病例，如何判斷該病在鴨群中的流行態勢，如何分析評估除鴨以外的鵝、雞等其他種類家禽發生暴發性流行的風險成為該病防控中的一個重要課題。為此，我們開展了較為系統的全省性TMUV抗體的監測與流行病學調查分析，以期為該病防控提供科學依據。

1　材料與方法

1.1檢測樣品來源及種類

本研究使用的禽場血清由浙江省動物疫病預防控制中心保存，采集時間為2010年下半年至2014年期間，采樣面覆蓋浙江省11個地市，樣品為浙江省動物疫病常規監測與流行病學調查中所采集保存的鴨、鵝、雞血清樣品，共4 989份，其中鴨血清2 935份，雞血清1 809份，鵝血清245份。

1.2檢測方法

TMUV抗體檢測采用間接ELISA方法，檢測試劑盒由浙江省農業科學院畜牧獸醫研究所禽病組余斌等[6]研制并提供本試驗使用，吸光度D450≥0.336時判定為陽性。

1.3數據分析及方法

由于2010—2011年間采集的血樣均處于TMUV同一流行期內，在對數據進行年份間比較時合并計算。TMUV抗體檢測數據采用統計分類方法進行分析，開展不同禽種抗體陽性率間差異顯著性的卡方檢驗以及計算均值、中位數、分值、極值時應用了MEDCALC醫學統計軟件，并應用該軟件制備Box-and-Whisker plot圖形[7]，鴨、鵝、雞不同年份的陽性率比較的折線圖采用Excel軟件完成。

2　結果與分析

2.1三種家禽TMUV感染后的抗體陽性率

4 989份鴨、鵝、雞血清樣品的檢測結果表明：浙江省家禽在2010年下半年至2014年的家禽TMUV抗體的陽性率為16.82%，其中鴨的陽性率為27.33%，鵝為6.94%，雞為1.11%。全部11個市鴨群均發現存在TMUV感染抗體陽性群，9個市的雞群存在感染抗體，而在對8個市鵝群檢測后只發現4個市的檢測結果陽性。以場點為單位計算TMUV抗體的陽性率，鴨場陽性率為59.52%，雞場為9.03%，鵝場為33.33%(圖1)。

為進一步分析家禽對TMUV的易感性，以檢測到1份樣本以上TMUV抗體陽性的禽場作為TMUV感染禽群，統計了鴨、雞、鵝3種家禽TMUV感染后的抗體陽性率，以此作為分析不同家禽對TMUV易感性的指標。通過對感染禽場的全部血清樣品檢測，鴨的TMUV抗體陽性率為44.74%，雞陽性率為10.00%，鵝陽性率22.67%，感染鴨群的TMUV抗體陽性率明顯高于鵝場和雞場，經采用卡方檢驗方法兩兩比較鴨與鵝、雞陽性率的差異顯著性，除鴨與鵝的場點陽性率為顯著差異外，其他不同禽種陽性率檢驗結果P值均小于0.01，差異極為顯著。在2010—2011年鴨TMUV引起的產蛋下降疫情流行期間，鴨感染群的TMUV抗體陽性率為54.83%，鵝、雞未采樣檢測；2012年鴨、鵝TMUV感染群的抗體陽性率分別為33.88%，20.00%，雞未檢測到抗體陽性群；2013年鴨、鵝、雞TMUV感染群的抗體陽性率分別為49.68%，10.00%，28.00%；2014年鴨、鵝TMUV感染群的抗體陽性率分別為39.19%，6.67%，雞未檢測到抗體陽性群。結果表明：鴨群TMUV抗體水平最高，2012—2014年明顯下降，但2013年高于2012年和2014年，鵝群趨勢與鴨相同，鴨群是TMUV感染的主要禽種。結果表明：隨著鴨場陽性率升高，鵝場與雞場會相應升高，存在一定的相關性(表1)；而雞場在2012年與2014年均未檢測到TMUV陽性場，2013年雖檢測到陽性場，群體陽性率普遍較低，13個陽性雞場中有11群雞血樣中只檢測到1份陽性，其中只有1個群體陽性率為70%；鴨群是TMUV感染的主要禽種(表2)。

圖1　不同年份間3種家禽TMUV感染群的抗體陽性率比較Fig.1　Comparison of TMUV antibody positive rate in the three types of infected flocks

表1三種家禽TMUV感染抗體的陽性率比較

Table 1Comparison of TMUV antibody positive rate in the three types of poultry

禽種采樣地市/個陽性地市/個場點數/個陽性場點數/個場點陽性率/%血清樣品數/份陽性樣品數/份樣品陽性率/%鴨111125215059.52Aa293580227.33A雞119144139.03C1809201.11C鵝8421733.33Ab245176.94B合計111141717040.77498983916.82

注：不同禽種陽性率差異顯著性比較采用卡方檢驗，同列數據后無相同大寫字母者表示差異極顯著(P<0.01)，無相同小寫字母者表示差異顯著(P<0.05)。

表2來源于3類家禽的TMUV抗體ELISA檢測值統計

Table 2ELISA test results of TMUV antibody in the three types of poultry

禽種樣品數ELISA檢測D值最高值最低值均值中位數95%值97.5%值鴨10971.7710.0700.3780.2371.4151.516雞9500.8870.0620.1300.1170.1850.274鵝1200.7840.0990.1780.1650.4130.535

2.2三種家禽血清樣品間的TMUV抗體ELISA檢測值

不同家禽對TMUV的感染性也可通過感染后的抗體效價作為分析的重要指標之一。對本研究所檢測的全部1 097份鴨血樣、950份雞血樣和120份鵝血樣的TMUV抗體ELISA檢測值按禽種進行統計匯總。采用MDCALC醫學統計軟件制備的Box-and-Whisker plot圖，可以觀察到，無論是均值、檢測值的離散度，均為鴨>鵝>雞，鴨源樣品檢測值與其他2個禽種樣品之間的差異達極顯著水平(圖2)。

2.3不同年份間的鴨場TMUV感染抗體監測結果比較

在不同年份鴨群中采集的血清TMUV感染抗體檢測結果表明，2010—2011年在鴨TMUV流行期間，各鴨場的TMUV抗體陽性率分布范圍可由0%至100%，且平均陽性率明顯高于其他3個未發生大范圍流行年份；同時2012—2014年3個年份之間比較，雖然總體陽性率呈逐年下降趨勢，但在2012年和2013年仍出現超范圍數值，表明個別場存在散發病例的可能，而2014年則表現為數據分布范圍擴大，均值有所回升(圖3)。

■為均值；▼為警示數值；○為超范圍數值。圖2　三種禽群TMUV抗體ELISA檢測D (450)值的Box-and-Whisker plot圖Fig.2　Box-and-Whisker plot of D (450) value in ELISA test for TMUV antibody in the three types of poultry

A，B，C，D分別為2010—2011年，2012年，2013年，2014年。 ◆為均值，?為超范圍數值。圖3　2010—2014年各鴨場TMUV抗體陽性率的Box-and-Whisker plot分布圖Fig.3　Box-and-Whisker plot of positive rates of TMUV antibody in duck flocks from 2010 to 2014

3　結論與討論

3種家禽TMUV抗體監測數據的統計分析結果表明：目前TMUV感染的家禽種類主要為鴨；鵝可感染，但感染后的群體陽性率仍明顯低于鴨群，表明其易感性明顯低于鴨；盡管陳珍等[5]認為雞群可感染TMUV，但從本研究2012—2014年的監測結果可以發現，只有在鴨群感染率最高的年份才出現雞群偶爾感染現象，絕大部分雞群感染后只有個別雞出現陽性現象，且尚未發現雞的TMUV臨床發病病例。因此，雞群的TMUV感染是否為一過性感染，有待證實。

從鴨群流行態勢分析，2010—2011年的TMUV抗體陽性率最高，應與2010年浙江省發生的疫情有關；2012—2014年陽性率均顯著降低，與浙江省該病疫情態勢穩定，在臨床上沒有出現較大范圍發病流行的疫情監控結果一致；調查中還發現在2013年出現多個雞場陽性率，鵝場陽性率與鴨場同步升高，2012年和2013年鴨場樣品中出現了個別超范圍檢測值(outliner)和警示數值(warning marker)，表明臨床上仍可能存在散發病例等異常風險，而2014年鴨群陽性率的波動范圍加大，同時ELISA檢測吸光度D(450)均值上升，盡管未監測到發生大范圍TMUV暴發流行現象，期間數據波動現象預示著對該病的監控仍需加強，TMUV引起的疫情仍存在反彈的可能性。

血清流行病學調查結果表明，鴨群是TMUV感染的主要禽種，該病防控仍應著眼于鴨場，必須及時淘汰陽性禽群，加強生物安全措施，同時要徹底改變鴨與鵝、雞的混養現象，防止病毒向鵝、雞等其他禽種傳播，造成新的危害。

[1]SU J L， LI S， HU X D et al.Duck egg-drop syndrome caused by BYD Virus: a new tembusu-related flavivirus[J].PLoSOne， 2011， 6(3)：1-10.

[2]TANG Y，DIAO Y，GAO X，et a1.Analysis of the complete genome ofTembusuvirus，a flavivirusisolated from ducks in China[J].Transboundary&EmergingDisease，201l， 59(4)：336-343.

[3]劉友生，彭春香，傅光華，等. 2010～2011年中國部分地區禽坦布蘇病毒感染調查及分子變異分析[J]. 中國動物傳染病學報，2012，20(1)：47-53.

[4]潘金金，鄒曉艷，李鑫，等. 鵝源坦布蘇病毒SHYG株的分離與鑒定[J]. 中國農業科學，2013，46(5)：1044-1053.

[5]陳珍，傅秋玲，施少華，等. 我國部分地區雞感染禽坦布蘇病毒血清流行病學調查[J]. 福建農業學報，2014，29(1)：1-4.

[6]余斌，華炯鋼，劉躍生，等. 鴨坦布蘇病毒抗體間接ELISA檢測方法的建立和應用[J]. 浙江畜牧獸醫，2014 (5)：1-6.

[7]CLARKE G M. Statistics and experimental design: an introduction for biologists and biochemists[M]. 3rd edition. London: Edward Arnold， 1994: 18-19.

(責任編輯盧福莊)

Seroepidemiological investigation and analysis on duck Tembusu virus antibody level in Zhejiang Province

LI Jian-qiu1， ZHOU Cai-qin2， YU Bin3， WU Xue-jun2， ZHAO Ling-yan2， ZHOU Lei2， ZHANG Cun3， XU Hui2，*

(1.HangzhouCollegeofCommerce，ZhejiangGongshangUniversity，Hangzhou310012，China; 2.ZhejiangCenterofAnimalDiseaseControl，Hangzhou311199，China; 3.InstituteofAnimalHusbandryandVeterinaryScience，ZhejiangAcademyofAgriculturalSciences，Hangzhou310021，China)

In the present study， seroepidemiological investigation on duckTembusuvirus(TMUV) antibody level was carried out. A total of 4 989 sera samples were collected from duck， goose and chicken during 2010-2014 in Zhejiang Province. The TMUV antibody levels of collected samples were detected by ELISA method. It was shown that the positive rates of TMUV antibody in duck， goose and chicken samples were 27.33%， 6.94% and 1.11%， respectively. By yearly analysis， TMUV antibody positive rate was 54.83% in the infected duck flocks in 2010-2011 during epidemic period. Goose and chicken sera samples were not collected in that period. TMUV positive rates in the infected duck and goose flock were 33.88% and 20.00%， respectively， in 2012， and positive serum sample was not found in chicken flocks. TMUV positive rates in the infected duck， goose and chicken flock were 49.68%， 10.00% and 28.00%， respectively in 2013. TMUV positive rates in the infected duck and goose flock were 39.19% and 6.67%， respectively， in 2014， and no positive serum sample was found in the chicken flocks. In conclusion， the highest TMUV antibody level was found in the year of 2010-2011 during the epidemic period， and duck was the main TMUV infected poultry.

Tembusuvirus; ELISA antibody; seroepidemiological investigation

10.3969/j.issn.1004-1524.2016.04.04

2015-12-05

浙江省三農六方資助項目

李劍秋(1964—)，女，浙江杭州人，副教授，從事應用數學等研究。E-mail: lijanqiu566@163.com

，徐輝，E-mail: xuhui888@163.com

S855

A

1004-1524(2016)04-0563-04

李劍秋，周彩琴，余斌，等. 浙江省鴨、雞、鵝群感染坦布蘇病毒的血清學調查與分析[J].浙江農業學報，2016，28(4): 563-566.