兒咳合劑（Ⅰ）的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

左小明

江蘇省常州市第三人民醫(yī)院，江蘇常州213001

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兒咳合劑（Ⅰ）的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

左小明

江蘇省常州市第三人民醫(yī)院，江蘇常州213001

目的提升兒咳合劑（I）的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法改進兒咳合劑（I）中甘草的薄層鑒別方法，采用平皿法和培養(yǎng)基稀釋法對兒咳合劑（I）中微生物限量進行檢查，采用凱氏定氮法測定兒咳合劑（I）中氯化銨的含量。結(jié)果二氯甲烷可以代替毒性較大的三氯甲烷作為甘草的薄層鑒別展開劑，且在日光下已能鑒別，不一定需要再在紫外燈（365 nm）下檢視。培養(yǎng)基稀釋法可消除兒咳合劑（I）對枯草芽孢桿菌的抑菌作用。氯化銨的加樣回收率為99.54%，RSD為1.935%（n=6）。結(jié)論該方法操作簡便，準(zhǔn)確性高，可為兒咳合劑（I）質(zhì)量控制提供參考。

兒咳合劑（Ⅰ）；薄層色譜法；微生物限度；凱氏定氮法

兒咳合劑是由甘草流浸膏、桔梗流浸膏、氯化銨等按照一定比例制成的制劑，具有止咳、祛痰的功效，適用于小兒支氣管炎等癥。目前，該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)較為簡單，為了提升其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)范產(chǎn)品質(zhì)量，我們在前期摸索了兒咳合劑（I）薄層鑒別方法［1］的基礎(chǔ)上，又做了補充研究。后期研究發(fā)現(xiàn)，薄層鑒別試驗所用的三氯甲烷對操作人員的毒性較大，且屬于易制毒化學(xué)品，因此，擬用性質(zhì)與其類似而毒性相對較小的二氯甲烷代替三氯甲烷。另外，我們驗證了兒咳合劑（I）的微生物限度檢查，并建立了兒咳合劑（I）中氯化銨的含量測定方法，現(xiàn)報告如下。

1　儀器與材料

電光分析天平TG328A、醫(yī)用凈化工作臺YS-1300-V（蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司）、隔水式恒溫培養(yǎng)箱GSP-9080MBE（上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）、霉菌培養(yǎng)箱MJX-160B-Z（上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）、電熱恒溫水浴鍋（上海醫(yī)療器械五廠）、UV紫外熒光儀。

兒咳合劑（I）（常州市第三人民醫(yī)院提供，批號：131119、140312、140701），甘草對照藥材（購自中國藥品生物制品檢定研究院，批號：120904-201318），硅膠G板（青島譜科分離材料有限公司）。氯化銨（河北華晨藥業(yè)有限公司，批號：2014.03.19）。0.05 mol/L硫酸滴定液（江蘇省常州藥品檢驗所提供）。所用試劑均為分析純。

菌株：大腸埃希菌（Escherichia coli）［CMCC（B）44 102］、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）［CMCC（B）26 003］、枯草芽胞桿菌（Bacillus subtilis）［CMCC（B）63 501］、白色念珠菌（Candida albicans）［CMCC（F）98 001］（中國醫(yī)學(xué)細菌保藏中心提供，批號依次為：3a19-2、5a18、2a14、2a7）、黑曲霉（Aspergillus niger）［CMCC（F）98 003］（中國藥品生物制品檢定所提供，批號201307）。

培養(yǎng)基：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基、改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基、膽鹽乳糖培養(yǎng)基、MUG培養(yǎng)基、改良馬丁培養(yǎng)基、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（北京三藥科技開發(fā)公司，批號依次為：130307、1302182、1401152、130106、140805、140422、140318）。培養(yǎng)基靈敏度實驗符合2010年版中國藥典規(guī)定。

2　方法與結(jié)果

2.1甘草的定性鑒別

取本品20 mL，按照前期摸索的兒咳合劑（I）薄層鑒別方法進行對照藥材溶液、供試品溶液和缺甘草陰性對照溶液的制備，再吸取上述三種溶液各4μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-甲醇（9：1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，再置紫外光燈（365 nm）下檢視［2］。結(jié)果見圖1。

圖1　兒咳合劑（Ⅰ）中甘草的鑒別薄層色譜圖

由圖1可見，二氯甲烷代替毒性較大的三氯甲烷作為甘草的薄層鑒別展開劑后，供試品薄層色譜在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點，陰性樣品對檢出無干擾，且在日光下已經(jīng)能鑒別，不一定需要再在紫外燈（365 nm）下檢視。

2.2微生物限度檢查

取本品10 mL，參考《中國藥典》2010年版一部附錄XIIIC微生物限度檢查法和文獻，對兒咳合劑（I）的細菌、霉菌和酵母菌回收率和大腸埃希菌的檢查方法進行了驗證［3］，結(jié)果如下。

表1　兒咳合劑（Ⅰ）細菌、霉菌和酵母菌回收率的測定（平皿法）

由表1可見，三次平行實驗中，大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠球菌、黑曲霉回收率均不低于70%，但枯草芽孢桿菌回收率均低于70%，說明平皿法（常規(guī)法）適用于該供試品的霉菌及酵母菌計數(shù)，但不適用于細菌計數(shù)，其細菌計數(shù)改用培養(yǎng)基稀釋法（0.2 mL/皿）進行驗證，結(jié)果見表2。

表3　兒咳合劑（Ⅰ）中大腸埃希菌檢查方法驗證

表2　兒咳合劑（Ⅰ）細菌回收率測定（培養(yǎng)基稀釋法0.2 m L/皿）

由表2可見，三次平行實驗中，大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌回收率均不低于70%，說明培養(yǎng)基稀釋法（0.2 mL/皿）適用于該供試品的細菌計數(shù)。

由表3可見，試驗組可檢出大腸埃希菌，而供試品對照組未檢出大腸埃希菌，說明供試品不影響大腸埃希菌的生長，常規(guī)法可用于兒咳合劑（I）中大腸埃希菌的檢查。

2.3氯化銨的含量測定

2.3.1測定方法精密量取本品10 mL，置凱氏燒瓶中，加水250 mL，搖勻，加碎毛細管數(shù)根，再加20%氫氧化鈉溶液10 mL，玻璃棒一根，立即用氮氣球?qū)颗c冷凝管連接［2］。冷凝管的尖端浸入4%硼酸溶液50 mL的液面下，加熱蒸餾，至2/3的溶液餾出時（接受瓶中約240mL液體），將冷凝管提出接近液面，讓蒸汽沖洗1分鐘，用水淋洗尖端后停止蒸餾，餾出液加甲基紅-溴甲粉綠混合指示液10滴，用硫酸滴定液（0.05 mol/L）滴定，滴定至溶液由藍綠色變?yōu)榛易仙S行做空白試驗，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正［4］。每1mL硫酸滴定液（0.05 mol/L）相當(dāng)于5.349mg氯化銨（NH4Cl）。

2.3.2空白試驗按照兒咳合劑（I）處方制得缺氯化銨的陰性制劑，精密量取陰性制劑10 mL，按照2.3.1方法進行空白試驗校正。

2.3.3線性關(guān)系考察精密量取缺氯化銨陰性制劑10mL，再加入精密稱定的氯化銨，按照2.3.1方法測定，記錄滴定體積（mL）。以滴定體積（X，mL）為橫坐標(biāo)，氯化銨的稱樣量（Y，mg）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果見表4。

表4　兒咳合劑（Ⅰ）中氯化銨的線性關(guān)系

2.3.4重復(fù)性試驗精密量取同一批號的兒咳合劑（I）6份，按照2.3.1方法測定氯化銨含量，平均值為94.59 mg，RSD為0.887%（n=6）。

2.3.5加樣回收率試驗精密量取同一批號的兒咳合劑（I）（批號：140312）5 mL，再加入精密稱定的氯化銨50 mg，按照2.3.1方法測定氯化銨含量，計算加樣回收率，得氯化銨的加樣回收率為99.54%，RSD為1.935%（n= 6）。結(jié)果見表5。

表5　氯化銨的加樣回收率（n=6）

2.3.6樣品的測定取三批兒咳合劑（I），按照2.3.1方法測定氯化銨含量。結(jié)果見表6。

表6　樣品含量測定結(jié)果（n=3）

3　討論

兒咳合劑（I）由氯化銨、甘草流浸膏、桔梗流浸膏、橙皮糖漿組成，我們分別摸索了氯化銨、甘草流浸膏，桔梗流浸膏和橙皮糖漿的鑒別方法。實驗結(jié)果表明，按處方量制備的缺氯化銨的陰性對照溶液中氯離子和銨離子反應(yīng)均呈陽性，說明陰性對檢出存在一定的干擾，因此，不可作為兒咳合劑（I）的鑒別方法。桔梗的鑒別反應(yīng)研究實驗效果不理想，考慮到兒咳合劑（I）原料中甘草流浸膏和桔梗流浸膏比例為5：1，100 mL兒咳合劑（I）約含有3mL桔梗流浸膏，且甘草和桔梗流浸膏中均含有三萜和皂苷類成分，陰性干擾很大，因此，桔梗的鑒別不可作為兒咳合劑（I）的鑒別方法。由于橙皮糖漿是作為矯味劑使用的，100 mL兒咳合劑（I）中約含有2.5 mL橙皮酊，且甘草流浸膏中也有較多的黃酮類成分，陰性干擾很大，因此，橙皮的鑒別也不可作為兒咳合劑（I）鑒別方法。而甘草的鑒別反應(yīng)效果較好，無論展開劑是三氯甲烷還是二氯甲烷，供試品薄層色譜在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，都顯相同顏色的主斑點，陰性樣品對檢出無干擾，在日光下已經(jīng)能鑒別，不一定需要再在紫外燈（365 nm）下檢視，且不同點樣量、不同溫濕度、不同廠家薄層板條件下薄層色譜的重現(xiàn)性和耐用性均較好，因此，將其納入兒咳合劑（I）鑒別方法。

微生物限度檢查是保證藥品質(zhì)量的重要指標(biāo)，兒咳合劑（I）的原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)采用常規(guī)的平皿法進行細菌、霉菌及酵母菌的計數(shù)，采用常規(guī)法進行控制菌大腸埃希菌的檢查，但沒有對該方法進行過方法學(xué)驗證，而藥品可因原料或輔料、工藝、劑型等因素表現(xiàn)出一定的抑菌活性，常規(guī)法不一定都適用，因此，需要進行方法學(xué)驗證［5］。研究過程中發(fā)現(xiàn)，兒咳合劑（I）對枯草芽孢桿菌具有一定的抑制作用，推測可能甘草或桔梗流浸膏對其有抑制作用，抑制作用的強弱有待進一步研究。

氯化銨具有刺激胃粘膜，反射性地興奮迷走神經(jīng)，引起惡心，使支氣管腺分泌增加，黏痰變稀，易于咳出的作用［6］，是兒咳合劑（I）祛痰作用的主要成分。我們采用凱氏定氮法對兒咳合劑（I）中氯化銨的含量進行測定。研究過程中發(fā)現(xiàn)，按照兒咳合劑（I）處方制得缺氯化銨的陰性制劑經(jīng)測定后，也會消耗少量硫酸滴定液，考慮到這可能是因為缺氯化銨的陰性制劑中含有甘草流浸膏，而甘草流浸膏制備過程中為了防止甘草酸析出而加入了濃氨試液調(diào)節(jié)pH值在7.5～8.5［7］。因此，我們制備缺氯化銨的陰性制劑進行空白試液，每次測定隨行做空白試驗，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。另外，在凱氏燒瓶中加入數(shù)粒玻璃珠后溶液仍然會沖出進入接收瓶中導(dǎo)致實驗失敗，但在凱氏燒瓶中加入碎毛細管和一根玻璃棒可避免此現(xiàn)象，提高實驗成功率。經(jīng)線性、重復(fù)性、加樣回收率考察，建立的氯化銨的含量測定方法專屬性強，重現(xiàn)性好，可用于兒咳合劑（I）的質(zhì)量控制。

［1］范正達，陳海鷹.兒咳合劑（I）的薄層色譜鑒別［J］.海峽藥學(xué)，2014，26（11）：81-82.

［2］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）［S］.2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：476.

［3］范震洪.蜂膠濃縮液微生物限量檢查方法的建立［J］.藥品評價，2011，8（24）：24-27.

［4］區(qū)潔雯，呂冠欣，孫俊軍，等.停咳糖漿中鹽酸麻黃堿與氯化銨的含量測定［J］.中國藥師，2013，16（6）：845-847.

［5］劉萍.7廠家鹽酸環(huán)丙沙星滴眼劑微生物方法驗證對比［J］.中外醫(yī)療，2011（23）：122.

［6］朱斌.探討鎮(zhèn)咳與祛痰的用藥區(qū)別［J］.醫(yī)藥前沿，2013（9）：374.

［7］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）［S］.2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：376.

Research on Quality Standards of Pediatric Cough M ixture（I）

ZUO Xiao-ming
Changzhou Third People's Hospital，Changzhou，Jiangsu Province，213001 China

Objective To improve the quality standards of pediatric cough mixture（I）.Methods The thin layer distinguish method of liquorice in pediatric cough mixture（I）was improved，themicrobial limits were examined by the platesmethod and culture medium dilution method，and the content of ammonia chloride was measured by the Kjeldahl determination. Results Dichloromethane could replace the chloroform with bigger toxicity as the thin layer differential expansion agent of liquorice，and could be identified in the sunlight，and it was no necessary to be viewed under the ultraviolet lamp（365nm），and the culturemedium dilutionmethod could eliminate the bacteriostatic action of pediatric coughmixture（I）on the bacillus subtilis，and the loading recycle rate of ammonia chloride was 99.54%and RSD was 1.935%（n=6）.Conclusion The operation of thismethod is easy with high accuracy，which can provide reference for the quality control of pediatric cough mixture（I）.

Pediatric cough mixture（I）；Thin-layer chromatography；Microbial limit；Kjeldahl determination

R286

A

1672-5654（2016）08（a）-0127-04

10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.22.127

2016-05-07）

左小明（1976.8-），男，江蘇常州人，本科，主管藥師，研究方向：醫(yī)院藥學(xué)。