高效液相色譜法測(cè)定藥品中的二硫蘇糖醇和氧化型二硫蘇糖醇

羅 寧， 劉平懷*， 吳曉娜， 陳 晨， 張 玲， 何沂飛， 李 昂

(熱帶作物種質(zhì)資源保護(hù)與開(kāi)發(fā)利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)實(shí)，海南大學(xué)材料與化工學(xué)院，海南海口 570228)

二硫蘇糖醇(DTT)屬于常用的巰基試劑，其揮發(fā)性低、難聞氣味較少，而且氧化電位低。DTT的氧化態(tài)(DTTox)為環(huán)狀結(jié)構(gòu)，其結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，所以具有較高的還原性。在DNA提取實(shí)驗(yàn)中常常添加DTT打斷蛋白質(zhì)之間的二硫鍵，使DNA充分游離，提高DNA的提取效率[1,2]。DTT也常常被用于蛋白質(zhì)中二硫鍵的還原，可用于阻止蛋白質(zhì)中的半胱氨酸之間所形成的蛋白質(zhì)分子內(nèi)或分子間二硫鍵，因此，在蛋白質(zhì)提取中添加DTT可以保護(hù)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)不被破壞[3,4]。

試驗(yàn)藥品有效成分為工程菌的代謝產(chǎn)物，是一種活性蛋白。在生產(chǎn)過(guò)程中添加DTT用來(lái)保護(hù)目標(biāo)蛋白結(jié)構(gòu)，維持藥物活性。DTT屬于巰基化合物，還原性較強(qiáng)，在體內(nèi)可能會(huì)破壞蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，從而引起酶失活等現(xiàn)象，目前常用凝膠過(guò)濾[5]和透析[6]去除DTT。DTTox會(huì)使肌酸激酶結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，達(dá)到一定濃度時(shí)甚至?xí)辜∷峒っ竿耆Щ頪7]。因此必需對(duì)該藥品中的DTT和DTTox進(jìn)行檢測(cè)。目前有報(bào)道用二硫蘇糖醇分光光度計(jì)測(cè)定鈷離子含量[8]，但DTT極容易被氧化，且滴定法靈敏度不高，所以不能采用鈷離子來(lái)反滴定DTT。DTTox也沒(méi)有有效檢測(cè)方法。高效液相色譜法在藥品檢測(cè)中應(yīng)用較廣[9,10]。因此，本文采用高效液相色譜法同時(shí)對(duì)藥品中DTT和DTTox進(jìn)行檢測(cè)，確保藥品的安全性。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

大連依利特高效液相色譜儀，包括DAD230+二極管陣列檢測(cè)器，P230高壓恒流泵，EC2000工作站，柱溫箱，在線脫氣機(jī)；……