半乳凝素-3在宮頸上皮瘤變和宮頸鱗狀細胞癌中的表達

唐　瑤， 何　麗， 李玨杉

(成都市婦女兒童中心醫院 婦科， 四川 成都　610000)

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半乳凝素-3在宮頸上皮瘤變和宮頸鱗狀細胞癌中的表達

唐瑤， 何麗， 李玨杉

(成都市婦女兒童中心醫院 婦科， 四川 成都610000)

目的： 探討半乳凝素-3(Galectin-3)在宮頸上皮瘤變(CIN)、宮頸鱗狀細胞癌組織中的表達及其意義。方法： 選擇80例宮頸鱗狀細胞癌組織標本、60例CIN標本及20例正常宮頸組織標本作為研究對象，采用免疫組化法檢測組織中Galectin-3蛋白表達，觀察不同CIN分級及宮頸鱗狀細胞癌患者的分化程度、病灶大小、是否發生淋巴轉移、年齡及臨床分期與Galectin-3蛋白陽性表達率的關系。結果： 3組Galectin-3蛋白陽性表達率比較，宮頸鱗狀細胞癌組織中顯著高于CIN和正常宮頸組織(P<0.05)，CIN組織和正常宮頸組織差異無統計學意義(P>0.05)；不同CIN分級患者組織中Galectin-3蛋白陽性表達率比較，差異無統計學意義(P>0.05)；宮頸鱗癌組織中Galectin-3蛋白陽性表達率在低分化、病灶≥2cm及癌細胞未發生淋巴轉移患者中顯著升高，差異有統計學意義(P<0.05)；在不同年齡和不同臨床分期患者間比較，差異無統計學意義(P>0.05)。結論： 宮頸鱗癌組織中Galectin-3蛋白陽性表達率顯著增高，與患者的癌細胞的分化程度、病灶大小及淋巴結轉移有關。

半乳凝素-3； 宮頸上皮瘤變； 宮頸鱗狀細胞癌； 免疫組織化學； 淋巴轉移； 腫瘤分期

[Abstract]Objective: To investigate the expression and significance of -3 (Galectin-3) in cervical squamous cell carcinoma (CIN) and cervical squamous cell carcinoma (SCC). Methods： 80 cases of cervical squamous cell carcinoma tissue specimens and 60 cases of CIN tissues, 20 cases of normal cervical tissue specimens were collected, using immunohistochemical method to detect the expressive intensity of galectin-3 in three groups, and analyzing galectin-3 protein and cervical squamous cell carcinoma patients clinical pathological features. Results: In squamous cell carcinoma of cervix galectin-3 protein positive expression rate was 82.50% significantly than 31.67% in CIN tissues and normal cervical tissues of 35.00%, the difference has statistical significance (P<0.05); normal cervical tissue and CIN and galectin-3 protein positive expression rate differences had no statistical significance (P>0.05). Cervical squamous cell carcinoma in galectin-3 protein positive expression rate in patients with different degree of differentiation, tumor size, whether lymph node metastasis has a statistically significant relationship (P<0.05), and the age of patients, the clinical staging was not significant (P>0.05). Conclusion: The positive expression rate of Galectin-3 protein in cervical squamous cell carcinoma was significantly increased, and it had a certain relationship with the degree of differentiation, the size of the lesion and lymph node metastasis.

[Key words]Galectin-3; cervical intraepithelial neoplasia; cervical squamous cell carcinoma; immunohistochemistry; lymphnode metastasis; tumor stage

宮頸癌以及宮頸上皮內瘤變(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)是宮頸細胞長期病變的結果，大多學者認為宮頸上皮HPV病毒感染是導致CIN及宮頸原位癌連續性病變的主要因素，但近年來的研究發現，單純的HPV感染不足以導致宮頸原位癌或者浸潤型癌的發生[1-2]。有學者提出細胞增殖周期調節、代謝以及細胞生理特征調控可能參與了宮頸病變的發生過程，半乳凝素-3(Galectin-3)是一個富含多N-乙酰基乳糖的外源凝集素家族成員，在調節機體免疫反應、血管新生和腫瘤進展等方面具有重要的意義，特別是對于早期異常增生或者腫瘤細胞同型誘導聚集作用更為明顯[3-4]。相關研究證實Galectin-3在乳腺癌、卵巢癌以及甲狀腺癌等惡性腫瘤中異常表達，并與腫瘤的臨床分期、淋巴轉移等臨床特征相關[5-6]。關于Galectin-3 在宮頸病變中的研究較少。本研究觀察宮頸鱗狀細胞癌組織、CIN及正常宮頸組織中Galectin-3蛋白表達水平，為研究宮頸癌的發生機制提供參考。

1　資料與方法

1.1一般資料

收集2013年1月～2015年1月宮頸鱗狀細胞癌組織標本80例、CIN標本60例以及正常宮頸組織標本20例。80例宮頸鱗狀細胞患者， 39～59歲，平均(46.3±6.9)歲；癌細胞高分化10例，中分化21例，低分化49例；臨床分期為Ⅰ期35例，Ⅱ期29例，Ⅲ期16例。60例CIN組患者，33～57歲，平均(44.6±9.0)歲；CINⅠ級26例，Ⅱ級22例，Ⅲ級12例。20例正常宮頸組織人群， 35～57歲，平均(46.1±7.2)歲。宮頸鱗癌組織、CIN組織均來源于手術后標本，宮頸鱗癌患者術前均未接受放化療及免疫治療； 正常宮頸組織來源于常規婦科檢查獲取的正常宮頸組織；納入研究對象的各項資料完整。

1.2方法

1.2.1組織標本處理采用石蠟切片脫蠟至水，切片厚度3 mm，3% H2O2室溫孵育 5 min，去離子水沖洗3次， 3 min/次，采用濃度為10% 牛奶蛋白(1 g蛋白加入100 mL純水)封閉，室溫孵育5 min，加入Galectin-3抗體(鼠來源，南京碧云天生物科技有限公司)， 37 ℃ 孵育 2 h，PBS緩沖液沖洗3次，5 min/次，滴加HRP標記的二抗(兔來源，購自羅氏檢測公司)，37 ℃ 孵育 30 min，PBS 沖洗3次，5 min/次，加入 NBT/BCIP色劑顯色 5 min，復染，脫水，透明，封片，鏡下觀察。OLIPICS電子顯微鏡購自上海精密儀器有限公司，配套試劑購自南京泰康生物科技有限公司。

1.2.2結果判定及評分Galectin-3蛋白的陽性主要著色于細胞漿，在細胞核及細胞表面也有少量表達，呈黃色、棕黃色、褐色表達。(1)根據著色強度進行評分：0分為無色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為褐色或黑色。(2)根據陽性細胞比例進行評分：陽性細胞數<10%為1分，11%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。兩種積分相乘總分<3分為陰性，≥3分為陽性。

1.3觀察指標

比較3組被檢者組織中Galectin-3蛋白表達陽性率，按年齡、癌細胞分化程度、病灶大小、臨床分期、是否有淋巴轉移對宮頸鱗狀細胞癌患者進行分組，記錄各組間的Galectin-3蛋白陽性表達病例數，分析不同細胞分化程度、病灶大小、是否發生淋巴轉移、年齡及臨床分期與Galectin-3蛋白表達的關系。

1.4統計學方法

2　結果

2.1Galectin-3蛋白表達

3組組織中均有Galectin-3蛋白表達，細胞漿中均可見黃色、棕黃色、褐色顆粒(圖1)，3組Galectin-3蛋白陽性表達率比較，宮頸鱗狀細胞癌組織顯著的高于CIN組織和正常宮頸組織，差異有統計學意義(χ2=37.144、χ2=18.316，P<0.05)，CIN組織和正常宮頸組織差異無統計學意義(χ2=0.076，P>0.05)。見表1。

表1　3種子宮頸組織標本中Galectin-3蛋白表達

注：為A為宮頸鱗癌組織，B為CIN組織，C為正常宮頸組織圖1　3種組織子宮頸標本中Galectin-3的表達(SP，×200)Fig.1　SP staining of 3 tissue samples

2.2不同CIN分級組織中Galectin-3蛋白表達

不同CIN分級組織中Galectin-3蛋白表達陽性率比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2　不同CIN分級子宮頸組織中Galectin-3蛋白表達(n，%)

2.3Galectin-3蛋白表達與子宮頸鱗癌患者臨床病理特征的關系

宮頸鱗癌組織中Galectin-3蛋白陽性表達率在低分化、病灶≥2 cm及癌細胞未發生淋巴轉移患者顯著升高，差異有統計學意義(P<0.05)；在不同年齡和不同臨床分期患者間比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表3。

3　討論

近年來性生活紊亂、性伴侶的頻繁更換以及過早地進行性生活等，均可促進宮頸CIN以及宮頸癌的發生，相關研究證實CINI的發病率在年齡18～28歲可達2.5%以上，CINII-III級的發病率也可達0.7%以上[7-8]。宮頸HPV病毒感染通過整合E6/E7病毒基因進入柱狀上皮，經不斷的擴增繁殖，促進上皮細胞增殖周期失調，細胞侵襲和轉移能力均明顯增加，進而調控細胞增殖、凋亡、分化、血管侵襲以及早期腫瘤細胞的浸潤。Galectin-3作為凝集素家族成員，由2個糖識別結構區域以及膠原蛋白和纖維蛋白C5融合結構，14號染色體的相關Galectin-3基因編碼和翻譯成功后，Galectin-3蛋白可以通過其氨基末端的巰基多重功能區域，進入宿主細胞核發揮調控細胞增殖和分化等生物學活性作用[9-10]。有研究發現，Galectin-3在乳腺癌以及卵巢癌中的平均陽性表達率可分別達45%、37%，且隨臨床分期、淋巴轉移率增高、細胞分化的降低， Galectin-3的陽性表達率升高[11-12]。然而迄今為止對于Galectin-3在宮頸CIN以及宮頸癌中的研究報道較少，僅有部分學者認為Galectin-3的表達與宮頸癌的病死率有一定的關系[13]。

表3　Galectin-3蛋白表達與子宮頸鱗癌患者臨床病理特征的關系

本研究發現宮頸癌組患者中Galectin-3的陽性表達率可達80%以上，明顯高于CIN組以及正常對照組，免疫組化切片分析可見Galectin-3主要表達于宮頸鱗狀上皮增殖較為活躍的區域，且細胞的異型性越為明顯，Galectin-3的表達強度越高，提示Galectin-3蛋白的異常表達在宮頸癌早期發生發展過程中可能發揮了重要的調節作用。但正常對照組以及宮頸CIN組患者中并未發現Galectin-3表達的差異，考慮在正常宮頸上皮發展至宮頸CIN的過程中，HPV感染可能發揮了主導作用，而Galectin-3的生物學活性作用不明顯，另一方面也可能與本次研究納入的低級別的CINI級病例數量較多有關。對于不同分級的CIN中Galectin-3表達陽性率的分析發現，Galectin-3的表達并未隨著CIN病變等級的上升的升高，表明CIN分期并不影響Galectin-3的表達，其表達率基本維持在15%左右，持續性地維持在較低的水平。本研究重點探討Galectin-3與宮頸癌患者相關臨床特征間的關聯，結果提示，低分化的宮頸癌患者Galectin-3陽性率達到了70%，而腫瘤病灶>2 cm以及發生了淋巴結轉移的患者Galectin-3的陽性率也可達60%左右，明顯高于低分化組、病灶<2 cm組以及未轉移組，表明Galectin-3的表達與宮頸癌患者的臨床病理特征具有密切的關系。腫瘤病灶>2 cm的患者，其對于宮旁組織的浸潤率較高，浸潤程度較深，而Galectin-3可以通過增加宮頸癌細胞的同型聚集能力，增強其侵襲和轉移的能力，進一步促進腫瘤病灶的擴大，另外Galectin-3可以增加宮頸癌細胞對于淋巴管內皮的粘附，進而增加淋巴結轉移率。徐美容等[14-15]也認為，在低分化宮頸鱗狀細胞癌中，Galectin-3的陽性率較高，并認為Galectin-3可以增加HPV病毒對于宿主細胞的整合能力，進而進一步增加宮頸癌細胞的溢出和脫落，增加淋巴結轉移率。但本次研究的局限性在于未能探討Galectin-3在CINII-III級患者宮頸錐切術后的改變， 宮頸錐形切除術后切緣Galectin-3陽性率對于指導臨床工作更具指導意義。

綜上所述，雖然Galectin-3在不同CIN分級中并無顯著差異性表達，但宮頸癌組織中的Galectin-3蛋白表達陽性率較高，且與患者細胞分化程度、病灶大小、是否發生淋巴結轉移密切相關，臨床上通過檢測宮頸癌術后標本的Galectin-3表達水平，可為指導臨床預后提供一定的參考。

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(2016-01-31收稿，2016-07-09修回)

中文編輯： 吳昌學； 英文編輯： 趙毅

Expression and Significance of Galectin-3 in CIN and Cervical Squamous Cell Carcinoma

TANG Yao, HE Li, LI Jueshan

(DepartmentofGynaecology,ChengduCenterHospitalofWomenandChildren,Chengdu610000,SichuanProvince,China)

R737.33

A

1000-2707(2016)08-0967-04

10.19367/j.cnki.1000-2707.2016.08.025

網絡出版時間：2016-08-23網絡出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20160823.1343.022.html