HIF-α、IL-10、Ki-67在老年子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達(dá)及臨床意義

張　偉，李　盛

(江漢大學(xué)附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，湖北 武漢 430015)

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HIF-α、IL-10、Ki-67在老年子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達(dá)及臨床意義

張偉，李盛

(江漢大學(xué)附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，湖北 武漢 430015)

子宮內(nèi)膜樣腺癌；缺氧誘導(dǎo)因子-α；白細(xì)胞介素-10；Ki-67抗原

[Key words]endometrial adenocarcinoma; hypoxia inducible factor α (HIF-α); interleukin-10 (IL-10); Ki-67

子宮內(nèi)膜癌是女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一，隨著社會(huì)生活變化，其發(fā)病率逐年增加。研究結(jié)果表明80%以上的子宮內(nèi)膜癌病灶位于子宮體內(nèi)，患者5年生存率較高，手術(shù)治療預(yù)后較好，但少數(shù)患者出現(xiàn)轉(zhuǎn)移侵襲性較強(qiáng)，患者預(yù)后效果較差等現(xiàn)象，用現(xiàn)有的理論難以充分解釋[1-2]。因此，掌握腫瘤轉(zhuǎn)移侵襲性強(qiáng)弱以及分化轉(zhuǎn)移程度差異，從而有助于臨床醫(yī)生對(duì)患者預(yù)后情況加以判斷，針對(duì)性給予治療。本研究主要針對(duì)缺氧誘導(dǎo)因子-α(hypoxia-induciblefact α，HIF-α)、白細(xì)胞介素-10(interleukin 10，IL-10)以及Ki-67抗原(Ki-67)3項(xiàng)指標(biāo)在老年子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達(dá)狀況，探究其臨床意義，明確三者與子宮內(nèi)膜樣腺癌相關(guān)性大小，從而為臨床工作提供指導(dǎo)。

1材料與方法

1.1一般資料

將2010年2月至2014年10月期間內(nèi)在江漢大學(xué)附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科進(jìn)行子宮內(nèi)膜腫瘤的手術(shù)治療患者作為研究對(duì)象，年齡均大于60歲，在所有研究對(duì)象中，經(jīng)病理指標(biāo)確診為子宮內(nèi)膜腺癌標(biāo)本為40例(A組)，子宮內(nèi)膜不典型增生患者標(biāo)本32例(B組)，同時(shí)，將正常子宮肌瘤增生期患者的子宮內(nèi)膜診刮標(biāo)本36例設(shè)定為對(duì)照組(C組)。其中A組患者年齡60～75歲，平均年齡(63.59±5.31)歲；腫瘤采用國(guó)際婦產(chǎn)科協(xié)會(huì)(federation internationale of gynecologie and obstetrigue，F(xiàn)IGO)分期方式[3]，包含Ⅰ期患者18例，Ⅱ期患者14例，Ⅲ期8例；在腫瘤分化程度方面，G1級(jí)患者17例，G2級(jí)患者13例，G3級(jí)患者10例；存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者11例。B組患者平均年齡(62.68±3.42)歲，C組患者平均年齡(63.26±4.64)歲。所有納入本次研究患者在1年內(nèi)無宮內(nèi)置節(jié)育環(huán)史，以及未服用性激素類藥物。3組間基本資料對(duì)比，差異無顯著性(均P>0.05)。

1.2方法

所有納入本研究的組織樣本均采用40g/L甲醛固定，石蠟包埋，切片厚度4μm的連續(xù)切片，染色采用蘇木精-伊紅進(jìn)行，HIF-α、Ki-67等采用免疫組化S-P方法進(jìn)行檢測(cè)，IL-10采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)進(jìn)行測(cè)定，并進(jìn)行全自動(dòng)酶分析儀進(jìn)行測(cè)定。

1.3結(jié)果判斷

在光學(xué)顯微鏡下對(duì)切片標(biāo)本進(jìn)行觀察，陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)為胞膜、胞漿或是核內(nèi)棕黃色顆粒，粗細(xì)一致，Ki-67的陽(yáng)性顆粒主要位于細(xì)胞核內(nèi)，而HIF-α主要分布在細(xì)胞漿和細(xì)胞核內(nèi)，黃色顆粒較大。在400倍光學(xué)顯微鏡下隨機(jī)選取10個(gè)視野內(nèi)細(xì)胞，參考染色細(xì)胞數(shù)量將陽(yáng)性細(xì)胞分4等級(jí)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目低于10%，即為0分；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目為10%～24%記為1分；陽(yáng)性細(xì)胞25%～49%為2分，陽(yáng)性細(xì)胞≥50%為3分，還根據(jù)染色深淺不同進(jìn)行分類，不顯色、淡黃色、桔黃色和棕黃色各計(jì)為0、1、2、3分，兩者相加，陰性為0～1分，陽(yáng)性為2～3分，強(qiáng)陽(yáng)性為超過3分[4]。對(duì)樣本切片選擇5個(gè)高倍視野(×40物鏡，×10目鏡)， 同等曝光條件一次拍攝完成，采用相關(guān)圖像分析軟件對(duì)照片進(jìn)行分析，校正光密度后，分析高倍視野內(nèi)的積分光密度(integrated option density，IOD)，以五高倍視野的IOD平均值作為該樣本IOD值。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2結(jié)果

2.1缺氧誘導(dǎo)因子-α和Ki-67抗原免疫組織化學(xué)染色結(jié)果

對(duì)正常子宮組織，子宮內(nèi)膜不典型增生組織，及子宮內(nèi)膜癌組織進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)HIF-α和Ki-67的表達(dá)，HIF-α主要分布在細(xì)胞漿和細(xì)胞核內(nèi)，Ki-67的陽(yáng)性顆粒主要位于細(xì)胞核內(nèi)，HIF-α與Ki67的著色深度正常組織，子宮內(nèi)膜不典型增生、子宮內(nèi)膜腺癌組織中逐漸加深。代表性結(jié)果如圖1所示。

圖1不同類型子宮內(nèi)膜病變HIF-α與Ki-67的表達(dá)

Fig.1Expressions of HIF-α and Ki-67 in different types of endometrial lesions

2.2 各組患者相關(guān)指標(biāo)比較

3組HIF-α和Ki-67陽(yáng)性表達(dá)率有顯著性差異(χ2值分別為36.925、34.645，均P<0.05)，IL-10水平有顯著性差異(F=188.544，P<0.05)，A組HIF-α和Ki-67陽(yáng)性表達(dá)率、IL-10水平均最高，見表1。

2.3不同臨床類型中3項(xiàng)指標(biāo)的表達(dá)情況對(duì)比

HIF-α、Ki-67表達(dá)陽(yáng)性率隨著臨床分期增加而增高，數(shù)據(jù)比較存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，肌層浸潤(rùn)程度越高，存在淋巴轉(zhuǎn)移的患者，其上述兩項(xiàng)指標(biāo)的陽(yáng)性率高，數(shù)據(jù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)，在病理分級(jí)比較中無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。在IL-10的IOD指標(biāo)對(duì)比中，臨床分期高、病理分級(jí)高、肌層浸潤(rùn)、淋巴轉(zhuǎn)移均與IOD高值相匹配，數(shù)據(jù)比較存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)，見表2、表3和表4。

Table 1 Comparison of expressions of HIF-α, IL-10 and Ki-67 among different endometria ±S]

表2子宮內(nèi)膜樣腺癌在不同臨床病理狀態(tài)下HIF-α水平(n)

Table 2 Levels of HIF-α in different clinical pathology status of endometrial adenocarcinoma(n)

表3 子宮內(nèi)膜樣腺癌在不同臨床病理狀態(tài)下Ki-67水平[n(%)]

Table 3 Levels of Ki-67 in different clinical pathology status of endometrial adenocarcinoma [n(%)]

項(xiàng)目例數(shù)(n)IL-10(pg/mL)tP臨床分期-25.3460.000 Ⅰ188131.30±642.13 Ⅱ+Ⅲ2213764.22±742.32病理分級(jí)-29.6510.000 G1177984.26±425.60 G2+G32312693.35±542.34肌層浸潤(rùn)-23.1050.000 <1/2268944.46±352.66 ≥1/21411843.51±423.82淋巴轉(zhuǎn)移-26.9620.000 有119149.42±523.32 無2913523.63±432.5

3討論

3.1缺氧誘導(dǎo)因子-α在老年子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的意義

HIF是機(jī)體內(nèi)氧平衡維持的重要轉(zhuǎn)錄基因，主要由α、β亞基組成，HIF-α主要發(fā)揮調(diào)節(jié)和活性亞基作用，是機(jī)體內(nèi)惟一發(fā)揮氧調(diào)節(jié)的基因亞單位，對(duì)HIF活性有重要影響，在機(jī)體內(nèi)外多種因素剌激下活化，對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、存活及凋亡等生物學(xué)過程產(chǎn)生重要影響，發(fā)揮體內(nèi)生理、病理調(diào)節(jié)作用。近年來，有相關(guān)研究結(jié)果表明多項(xiàng)腫瘤的檢測(cè)報(bào)告中，發(fā)現(xiàn)HIF-α有過度表達(dá)的現(xiàn)象，且還與腫瘤轉(zhuǎn)移侵襲能力存在相關(guān)性，能夠影響腫瘤對(duì)治療的敏感性，與預(yù)后效果存在密切關(guān)系，在腫瘤細(xì)胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)HIF-α表達(dá)，而在腫瘤組織基質(zhì)細(xì)胞及相鄰正常組織細(xì)胞內(nèi)未出現(xiàn)HIF-α表達(dá)，腫瘤壞死病灶區(qū)域及浸潤(rùn)邊緣，HIF-α表達(dá)水平較高[5]。

本研究結(jié)果顯示，隨著子宮內(nèi)膜惡性程度增加，HIF-α表達(dá)水平提高，分析該研究結(jié)果可知子宮內(nèi)膜腺樣癌變過程中，細(xì)胞增殖速度加快，胞內(nèi)存在缺氧現(xiàn)象，使得細(xì)胞內(nèi)HIF-α轉(zhuǎn)錄激活，HIF-α高表達(dá)，并介導(dǎo)內(nèi)膜細(xì)胞能量代謝模式變化，使得缺氧情況下也能迅速增殖。本研究結(jié)果表明，在不同指標(biāo)如臨床分期、肌層浸潤(rùn)以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況下，HIF-α表達(dá)不同，且隨病情嚴(yán)重，腫瘤分化，表達(dá)呈顯著上升趨勢(shì)，因此，可知HIF-α表達(dá)水平較高，在子宮內(nèi)膜癌癥早期以及惡性進(jìn)展期等過程均存在，與腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移、侵襲等存在密切關(guān)系。

3.2 Ki-67抗原在老年子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的意義

Ki-67抗原主要發(fā)揮識(shí)別GO晚期外細(xì)胞周期核抗原的作用，其特點(diǎn)在于抗原半衰期短，在于細(xì)胞周期脫離后，快速降解，能夠?qū)υ鲋撤至训募?xì)胞發(fā)揮快速識(shí)別的作用，是一種應(yīng)用最為廣泛的增殖細(xì)胞標(biāo)記之一[6]。在宮頸炎、上皮內(nèi)瘤變以及宮頸癌中，Ki-67呈表達(dá)逐步增加的水平，且隨著子宮頸癌的分化效果越差，其相關(guān)表達(dá)的指數(shù)越高，增殖旺盛的細(xì)胞，其表現(xiàn)的轉(zhuǎn)移侵襲性越強(qiáng)。因此，在多項(xiàng)研究中，Ki-67也主要用于評(píng)價(jià)腫瘤細(xì)胞的增殖活性、生長(zhǎng)、浸潤(rùn)情況，并對(duì)其復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移及侵襲情況進(jìn)行判定[7]。

本研究結(jié)果表明，Ki-67陽(yáng)性率分別在不同子宮內(nèi)膜狀態(tài)下表達(dá)水平不同，且在正常增生期子宮內(nèi)膜、不典型增生及內(nèi)膜樣腺癌組織中，陽(yáng)性率逐漸提高，A組樣本中Ki-67的高水平表達(dá)，且高于另外兩組，A、B組樣本中的陽(yáng)性表達(dá)水平對(duì)比，數(shù)據(jù)無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，這一結(jié)果進(jìn)行分析可知，細(xì)胞過度增殖與子宮內(nèi)膜樣腺癌發(fā)生、發(fā)展存在密切關(guān)系，這一過程從子宮內(nèi)膜不典型增生開始，因此，不典型增生子宮內(nèi)膜中Ki-67過度表達(dá)，Ki-67可作為評(píng)價(jià)子宮內(nèi)膜樣腺癌細(xì)胞增殖、分化狀態(tài)的重要指標(biāo)，可用于判斷腫瘤的侵襲能力。

3.3.白細(xì)胞介素-10在老年子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的意義

IL-10是由機(jī)體內(nèi)多種免疫細(xì)胞，如巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞以及活化的B細(xì)胞以及Th2細(xì)胞分泌產(chǎn)生多功能細(xì)胞因子合成抑制因子，有研究結(jié)果表明，IL-10能夠調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)炎癥、免疫、腫瘤細(xì)胞等，因此，能夠?qū)C(jī)體炎癥、感染及自身免疫性疾病等能夠發(fā)揮重要作用[8-9]。在IL-10的IOD指標(biāo)對(duì)比中，臨床分期高、病理分級(jí)高、肌層浸潤(rùn)、淋巴轉(zhuǎn)移均與IOD高值相匹配，隨著子宮內(nèi)膜惡性程度增加，IL-10表達(dá)水平提高，分析該研究結(jié)果可知子宮內(nèi)膜腺樣癌變過程中，刺激機(jī)體內(nèi)炎癥、免疫系統(tǒng)，細(xì)胞分泌激活，IL-10分泌增多。因此，子宮內(nèi)膜癌癥早期以及惡性進(jìn)展期等過程均存在高水平IL-10表達(dá)，其與腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移、侵襲均存在一定的關(guān)系。

綜上所述，HIF-α、IL-10及Ki-67在子宮內(nèi)膜癌組織內(nèi)高表達(dá)，則表明子宮內(nèi)膜樣腺癌組織浸潤(rùn)性較強(qiáng)，有轉(zhuǎn)移、侵襲性，應(yīng)當(dāng)在臨床上加以重視，因此在臨床上需推廣檢測(cè)指標(biāo)，有助于手術(shù)方式的確定和預(yù)后判斷。

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[專業(yè)責(zé)任編輯：安瑞芳]

Expression and clinical significance of HIF-α, IL-10 and Ki-67 in endometrial adenocarcinoma of the aged

ZHANG Wei, LI Sheng

(Department of Obstetrics and Gynecology, Affiliated Hospital of Jianghan University, Hubei Wuhan 430015, China)

2015-08-22

張偉(1980-)，女，主治醫(yī)師，主要從事婦科腫瘤的研究。

李盛，副主任醫(yī)師。

10.3969/j.issn.1673-5293.2016.02.016

R711.7

A

1673-5293(2016)02-0194-04