慢性乙型肝炎病毒感染者血清脂聯素水平與體液免疫功能的相關性研究

徐瑩瑩，龔建玲，嚴亞丹，沈月爽

慢性乙型肝炎病毒感染者血清脂聯素水平與體液免疫功能的相關性研究

徐瑩瑩，龔建玲，嚴亞丹，沈月爽

目的研究慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者血清脂聯素（ADI）水平與體液免疫功能的相關性。方法選取正常對照組50例，慢性乙型肝炎(CHB)221例（其中慢性非活動性HBV攜帶組40例，活動性肝炎60例，重癥肝炎24例，肝硬化59例，肝癌38例），分別測定ADI、白介素-6（IL-6）、干擾素-（IFN-）、體液免疫功能指標[免疫球蛋白A(IGA)、免疫球蛋白G（IGG）、免疫球蛋白M(IGM)、補體3（C3）、補體4(C4)]，比較上述指標在CHB不同臨床階段的差異性，分析ADI與上述指標的相關性。結果正常對照組與慢性非活動性HBV攜帶組上述指標差異均無統計學意義（均＞0.05），HBV感染患者（除外慢性非活動性HBV攜帶組）的ADI、IGA、IGG、IGM、IL-6，IFN-均明顯高于正常對照組和慢性非活動性HBV攜帶組，隨著機體免疫反應的加強，ADI、IGA、IGG、IGM、IL-6、IFN-等指標越來越高；而C3、C4均明顯低于正常對照組和慢性非活動性HBV攜帶組（均＜0.05），隨著機體免疫反應的加強，C3、C4逐漸耗盡，越來越低。ADI與IGA、IGG、IGM、IL-6，IFN-顯著正相關，與C3、C4呈顯著負相關。結論ADI可以作為評價HBV感染時肝臟免疫反應程度的指標，對CHB的體液免疫反應的影響尚不確定。

肝炎，乙型，慢性；脂聯素；體液免疫

血清脂聯素（ADI）是由脂肪組織分泌的一種細胞因子，已有研究很多集中在非酒精性脂肪肝和ADI的相關性，大量研究證實，非酒精脂肪肝群體的ADI是低于正常對照組的[1]。ADI與慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染的相關性研究甚少，在已有的研究中ADI對機體的免疫功能影響結論也不統一，有研究認為ADI會通過抑制白介素-6（IL-6）、干擾素-（IFN-）的分泌減弱機體的免疫反應[2]。筆者在預實驗中發現，隨著機體免疫反應的進行，ADI的水平會明顯升高，這與已有的研究結果[3]是相吻合的；但同時，筆者的預實驗表明隨ADI升高，IL-6、IFN-的水平與ADI表現出很強的正相關性，那ADI對于機體免疫反應的抑制作用就無法證實。為驗證筆者的預實驗，分析ADI在HBV感染者體液免疫中的作用，筆者就HBV感染的不同階段的ADI水平與IL-6、IFN-及相關的免疫功能指標進行檢測，比較上述指標在不同臨床階段的差異性，分析ADI與各個指標的相關性。現將結果報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料選擇2012年6月至2013年12月浙江省慈溪市人民醫院（標本在浙江醫院檢測）收治的221例HBV感染者。其中男121例，女100例；年齡17～79歲，平均（34.53±8.01）歲。CHB患者根據肝炎活動程度分為慢性非活動性HBV攜帶組40例、活動性肝炎60例、重癥肝炎24例、肝硬化59例、肝癌38例，診斷、分型符合參考文獻[4]。所有病例均通過血清學檢測排除其他肝炎病毒感染，排除合并惡性腫瘤、自身免疫性肝病、酒精性肝病、非酒精性脂肪性肝病和糖尿病等。正常對照組50例，其中男25例，女25例；年齡18～74，平均（36.33±7.37）歲。

1.2研究方法所有標本采用日本積水創公司生產的黃管（含分離膠及促凝劑），均與清晨空腹抽取靜脈血5 ml，以3 000 r/min的速度離心10 min，離心后留取血清保存于－70℃冰箱，待所有標本收齊后一起檢測。用ELISA法(試劑盒均購自 eBioscience有限公司)檢測ADI、IL-6、IFN-水平，BECKMAN-IMMAGE免疫比濁法（BECKMAN原裝配套試劑）檢測免疫球蛋白A(IGA)、免疫球蛋白G（IGG）、免疫球蛋白M(IGM)、補體3（C3）、補體4(C4)。

1.3統計方法運用SPSS 17.0軟件進行統計學分析。計量資料以均數±標準差表示，多組比較采用單因素方差分析，多組間兩兩比較采用LSD-比較；脂聯素與其他變量資料行Spearman等級相關分析。＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1ADI、IFN-、IL-6、IGA、IGG、IGM、C3及C4在各組的比較ADI和IFN-水平在HBV感染者（除外慢性非活動性HBV攜帶組）的水平均顯著高于正常對照組和慢性非活動性HBV攜帶組（均＜0.05）；肝硬化組、肝癌組、重癥肝炎組的水平均顯著高于活動性肝炎組（均＜0.05）；重癥肝炎組顯著高于肝硬化和肝癌組（均＜0.05）。IL-6在HBV感染者患者（除外慢性非活動性HBV攜帶組）的水平均顯著高于正常對照組和慢性非活動性HBV攜帶組（均＜0.05）；肝硬化組、肝癌組、重癥肝炎組差異均無統計學意義（均＞0.05），但均顯著高于活動性肝炎組（均＜0.05）。肝硬化組、肝癌組、重癥肝炎組IGA、IGM水平均顯著高于正常對照組和慢性非活動性HBV攜帶組；活動性肝炎組與正常對照組和慢性非活動性HBV攜帶組差異無統計學意義（＞0.05）；肝硬化組、肝癌組、重癥肝炎組的水平均高于慢性活動性肝炎組（均＜0.05）；IGM重癥肝炎組顯著高于肝硬化和肝癌組（均＜0.05）。IGG在HBV感染者（除外慢性非活動性HBV攜帶組）的水平均顯著高于正常對照組和慢性非活動性HBV攜帶組，重癥肝炎組的水平顯著高于肝硬化組和肝癌組，高于活動性肝炎組（均＜0.05）。C3在HBV感染者（除外慢性非活動性HBV攜帶組）的水平均顯著低于正常對照組和慢性非活動性HBV攜帶組（均＜0.05）；與活動性肝炎和肝癌組相比，肝硬化和重癥肝炎的水平更低；重癥肝炎的水平要低于肝硬化。C4水平HBV感染者（除外慢性非活動性HBV攜帶組）的水平均低于正常對照組和慢性非活動性HBV攜帶組，與活動性肝炎、肝硬化、肝癌組比較，重癥肝炎組顯著降低。見表1～2。

2.2HBV感染者血清ADI水平與體液免疫功能指標的的相關分析ADI濃度與IGA、IGA、IGG IL-6、IFN-呈正相關，與C3、C4呈負相關。見表3。

3　討論

HBV感染臨床表現多樣化，隨著病程的進展，機體的免疫系統會有不一樣的反應，反應的強烈程度，可以通過幾個體液免疫IGA、IGG、IGM、C3和C4來衡量。免疫反應加強時，IGA、IGG、IGM分泌升高，隨著免疫反應加強，C3、C4耗盡水平下降。近年來，免疫因素在CHB發病過程中的作用越來越受到重視。HBV感染機體后，宿主免疫反應的強弱、促炎和抗炎細胞因子相互斗爭的結果都影響著乙型肝炎發病及其轉歸，并與肝臟損傷密切相關。研究表明，各型乙型肝炎患者體內都存在明顯的促炎和抗炎細胞因子失衡。當然HBV感染機體的免疫反應十分復雜，有太多的因素會影響IFN-、IL-6等具有清除HBV作用因子的分泌，這也是目前研究CHB免疫反應的熱點。

表1　病例組與正常對照組血清脂聯素及各指標水平比較

ADI是因首先在小鼠脂肪細胞中發現而得名。因其有廣泛的生理作用，尤其具有抗炎作用，而成為近年慢性肝病的研究熱點。ADI是通過與其在細胞膜上的受體結合起作用的。目前已被克隆的人脂聯素受體主要有兩種：AdipoR1 和AdipoR2，前者主要表達于心肌和骨骼肌，后者主要表達于肝臟。ADI與其相應受體結合后，通過活化AMP激酶（AMPK)和過氧化物酶體增殖物激活受體-（PPAR-）在心血管疾病、類風濕關節炎等疾病時發揮抗炎、調節免疫力等作用[5-8]。目前關于CHB和ADI的研究甚少，究其原因就是因為ADI對CHB的影響機制不明確。基于上述原因，筆者將ADI與IFN-、IL-6等體液免疫相關指標關聯性作為研究的主旨。

本文結果顯示IGA、IGG、IGM水平大體上是重癥肝炎組＞肝硬化組、肝癌組＞活動性肝炎組＞正常對照組及慢性非活動性HBV攜帶組；C3、C4與之相反，可以認為HBV感染患者機體的免疫反應程度：重癥肝炎組＞肝硬化組、肝癌組＞活動性肝炎組＞正常對照組及慢性非活動性HBV攜帶組。IFN-、IL-6的水平，其趨勢與IGA、IGG、IGM一致，表明IFN-、IL-6的確在加強體液免疫上起到正向作用。分析ADI的水平發現，ADI的水平與IFN-、IL-6、IGA、IGG、IGM水平正相關，與C3、C4負相關。這就意味著，CHB患者血清ADI水平與IFN-、IL-6水平變化是一致的，ADI沒有抑制IFN-、IL-6，或者說ADI對CHB患者的體液免疫反應沒有起到抑制作用。這與以往的研究結果[2，9]是不同的，證明HBV感染時，ADI對體液免疫無影響。但ADI與肝臟的免疫反應程度是正相關的，ADI可作為評價肝臟免疫反應程度的指標。

表3　ADI水平與各指標的相關性

HBV感染患者ADI水平升高的原因有：（1）受損肝細胞可誘導ADI的表達。有研究提示 ADI也可在肝臟中產生，HBV感染患者在因HBV介導的免疫反應肝細胞受損后，促使免疫反應加強，故IGA、IGG、IGM分泌升高，而C3、C4耗盡水平下降，同時受損肝細胞將誘導ADI的表達升高[10]。（2）ADI排泄障礙。Tacke等[11]的研究說明ADI可能經由膽道排泄。重癥肝炎時肝細胞大量壞死同時伴膽汁淤積，這導致ADI的排泄障礙，循壞中的ADI堆積。這可能就是在本試驗中重癥肝炎組ADI的水平明顯高于其他組的一個原因。這與以往的研究結果[12]是相同的。（3）與炎癥因子的對抗性上升。有研究顯示酒精性肝病患者ADI水平明顯上升，與腫瘤壞死因子水平正相關[13]。HBV感染患者尤其是重型肝炎患者在進展中，將產生大量腫瘤壞死因子等炎癥因子[12]。本試驗中IL-6、IFN-等促炎細胞因子在重型肝炎患者明顯高于其他組，作為對炎癥的控制和對機體的保護，ADI對抗性上升也明顯。ADI對CHB的免疫反應的影響尚不確定，還需研究機制方向解決；隨著深入研究，其有望成為HBV感染患者提供有效治療和控制病情的一種新途徑。

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10.3969/j.issn.1671-0800.2016.05.016

R575.1

A

1671-0800(2016)05-0592-03

2016-02-18

（本文編輯：姜曉慶）

315300浙江省慈溪，慈溪市人民醫院（徐瑩瑩、龔建玲、嚴亞丹）；浙江醫院（沈月爽）

徐瑩瑩，Email：xyy9610@ sina.com