ICU和EICU高頻接觸物表分離的金黃色葡萄球菌耐藥性及毒力基因檢測

劉鵬，陳琳，許兆軍，許小敏，梁珊燕

ICU和EICU高頻接觸物表分離的金黃色葡萄球菌耐藥性及毒力基因檢測

劉鵬，陳琳，許兆軍，許小敏，梁珊燕

目的 了解ICU和EICU高頻接觸物表分離的金黃色葡萄球菌的耐藥性及毒力基因的攜帶情況。方法

重癥監護病房；急診重癥監護病房；金黃色葡萄球菌；耐藥性；毒力基因

金黃色葡萄球菌是重癥監護病房（ICU）、急診重癥監護病房（EICU）常見分離到的病原菌[1]，可導致嚴重感染。其高發病率和病死率，是醫療團隊在救治過程中面臨的重大挑戰問題。患者周圍環境物體表面的金黃色葡萄球菌，通常可以在其上面存活數周，甚至數月，同樣污染的環境物表可以傳播病原體。本研究旨在了解ICU和EICU高頻接觸物表分離的金黃色葡萄球菌耐藥性及毒力基因攜帶情況，并對耐甲氧西林發生率和殺白細胞基因（PVL）和超抗原基因（sea、seb、sec、sed、see、seg、seh、sei、sej、sek、sel、sem、sen、seo、sep、seq、eta、etb、etd、tst）進行檢測，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象 2015年1—3月每月1次采集ICU和EICU高頻接觸的物表；床欄、床上用品、床邊桌、血壓計、靜脈注射泵、護士呼叫按鈕、尿液收集袋共計312份。在清潔消毒前，采用采樣棉簽采樣100 cm2，7.5%NaCl增菌6～8 h，接種金黃色葡萄球菌顯色培養基篩查，35℃孵育24 h，如不明顯延長至48 h，紫紅色菌落，再進行染色和凝固酶試驗確認，共收集54株菌株。

1.2 菌種鑒定及藥敏試驗 篩查陽性的菌株，采用PCR擴增作spa基因。同時參照美國臨床和實驗室標準協會推薦標準（CLSI）確認MRSA。VITEK-2 compact GPS-16卡片進行藥敏實驗。金黃色葡萄球菌ATCC25923標準菌株。

1.3 基因檢測和測序 蛋白酶K裂解法制備細菌DNA模板。全部基因檢測均為PCR法，嚴格按照試劑盒說明書操作。檢測項目為殺白細胞基因（PVL），20種超抗原基因（sea、seb、sec、sed、see、seg、seh、sei、sej、sek、sel、sem、sen、seo、sep、seq、eta、etb、etd、tst），PCR產物用3730全自動熒光法測序（美國，ABI公司）。用Chromas直接作BLAST Search網上比對。

2 結果

2.1 金黃色葡萄球菌對各種抗菌藥物的耐藥性 312份標本分離出54株金黃色葡萄球菌，分離率17.31%。檢出耐甲氧西林菌株31株，MRSA發生率為57.41%。分離株對萬古霉素、替考拉寧、利奈唑烷、替加環素、喹奴普汀/達福普汀、呋喃妥因均敏感，慶大霉素、紅霉素、綠潔霉素、四環素、環丙沙星、左旋氧氟沙星的耐藥率均超過 75.00%。莫西沙星和復方新諾明耐藥57.41%。見表1。

表1 54株金黃色葡萄球菌對各種抗菌藥物的敏感率和耐藥率 株（%）

2.2 金黃色葡萄球菌超抗原基因檢測組合模式 金黃色葡萄球菌超抗原基因35株有陽性檢出（即超抗原基因總檢出率達64.81%），其中sea、seq各24株（44.44%），seb、sem、sep 各 3 株（5.56%），sek19株（35.19%），seg、sei、sen、seo各6株（11.11%），sec、sed、see、seh、sej、sel、eta、eta、eta、tst未檢出。PVL基因檢出10株（14.81%）。見表2。

表2 54株金黃色葡萄球菌超抗原

3 討論

金黃色葡萄球菌易引起醫院獲得性和社區性感染。患者攜帶的金黃色葡萄球菌可頻繁污染周圍環境物體表面，由于ICU、EICU患者氣管插管和鼻胃管使用率高，像許多其他病原菌一樣能夠在其表面形成生物膜，導致細菌的持續釋放，同樣污染的環境物表可以傳播病原體。本組312份高頻接觸的物表標本分離出54株金黃色葡萄球菌，分離率17.31%，與其他研究報告相一致[2-3]，高分離率與病房的終末清潔不徹底、患者感染同源細菌（直接來源于環境表面；醫務人員污染的手）有關。多項研究表明，實施改善環境物表的清潔與消毒，可以減少病原體的傳播。

MRSA感染的治療變得越來越困難，由于MRSA菌株耐 -內酰胺類抗生素及其他抗菌藥物。MRSA的感染過去的十年中在ICU增加逐年增加。本研究54株 ICU和EICU高頻接觸物表分離的菌株對常見抗菌藥物耐藥率均較高，這與國內、外的其他研究報告相一致[4-5]。金黃色葡萄球菌具有廣泛的毒力因子。

金黃色葡萄球菌感染的嚴重程度可能與這些毒素的產生。外毒素可以促使組織的破壞、逃避宿主的免疫反應。本研究在PVL檢出率14.81%，低檢出率可能與分離的細菌均為院內獲得相關。金黃色葡萄球菌至少有20個不同血清學的超抗原已被描述，包括SEA-Q和TSST-1。本研究中SEA的檢出率44.44%。產腸毒素的金黃色葡萄球菌菌株，結合不同的SE基因也可以促進的發生率和嚴重程度，在本項研究中seq檢出24株（44.44）和sek19檢出株（35.19%）。

ICU和EICU高頻接觸物表金黃色葡萄球菌的高分離率、高耐藥率分離及廣泛的毒力因子，需要臨床強化清潔/消毒，減少污染物表傳播疾病。

[1] 胡付品,朱德妹,汪復,等.2013年中國CHINET細菌耐藥性監測[J].中國感染與化療雜志,2014,14(5):365-370.

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[5] 糜祖煌,金輝,秦玲.葡萄球菌屬連續分離株毒力與耐藥基因研究[J].中華醫院感染學雜志,2008,18(4):454-456.

10.3969/j.issn.1671-0800.2016.01.012

R446.6

A

1671-0800(2016)01-0025-02

2015-08-20（本文編輯：孫海兒）

浙江省醫藥衛生科技計劃項目（2014KYA197）；寧波市科技局社發擇優委托項目（2011C51002）

315010寧波，寧波市第二醫院

許小敏，Email:xjl199908 02@sina.com

2015年1—3月每月1次采集ICU和EICU高頻接觸物表檢測分離金黃色葡萄球菌，用vitek2-compact上機及葡萄球菌A蛋白PCR基因表達鑒定菌株，GPS-16卡片進行藥敏實驗，通過PCR方法分析殺白細胞基因（PVL）和超抗原基因（sea、seb、sec、sed、see、seg、seh、sei、sej、sek、sel、sem、sen、seo、sep、seq、eta、etb、etd、tst）的表達情況。結果 312份標本分離出54株金黃色葡萄球菌，分離率17.31%。MRSA發生率為57.41%。對萬古霉素、替考拉寧、利奈唑烷、替加環素、喹奴普汀/達福普汀、呋喃妥因均敏感，慶大霉素、紅霉素、綠潔霉素、四環素、環丙沙星、左旋氧氟沙星的耐藥率均超過75.00%。莫西沙星和復方新諾明耐藥57.41%；超抗原基因總檢出率達64.81%，其中sea 、seq各24株（44.44%），seb、sem、sep各3株（5.56%），sek19株（35.19%），seg、sei、sen、seo各6株（11.11%），sec、sed、see、seh、sej、sel、eta、eta、eta、tst未檢出。PVL基因檢出10株（14.81%）。結論 ICU和EICU高頻接觸物表金黃色葡萄球菌的高分離率、高耐藥率分離及廣泛的毒力因子，需要臨床強化清潔/消毒，減少污染物表傳播疾病。