經肝、經脾接種VX2瘤株建立兔肝臟腫瘤模型的比較

史　博，平　勇，王永中，李智崗

(河北醫科大學第四醫院放射科，河北 石家莊 050011)

?

·論著·

經肝、經脾接種VX2瘤株建立兔肝臟腫瘤模型的比較

史博，平勇，王永中，李智崗*

(河北醫科大學第四醫院放射科，河北 石家莊 050011)

目的將VX2瘤株接種于兔不同部位(肝臟及脾臟)，觀察是否能夠成功建立兔肝臟腫瘤模型，通過觀察其CT增強掃描及數字減影血管造影(digital subtraction angiography，DSA)檢查的影像學特點，探討2種模型的差異。方法將60只實驗兔隨機分為2組各30只。A組將VX2細胞懸液1 mL(1×107/mL)種植于兔肝臟。B組將VX2細胞懸液1 mL(1×107/mL)種植于兔脾臟。分別于種植后第14天及第15天行CT增強掃描及DSA檢查。結果A組中30只實驗兔全部建模成功并完成實驗，B組中有28只建模成功并完成實驗。A組CT掃描及DSA檢查肝臟多發病灶數、肝臟環形強化病灶數與B組比較差異有統計學意義(P<0.05)。結論①經肝臟及脾臟種植VX2細胞懸液均能成功建立兔肝臟腫瘤模型。②通過肝臟接種VX2瘤株建立的模型，CT掃描及DSA表現更接近人類原發性肝癌；通過脾臟接種VX2瘤株建立的模型，CT掃描及DSA表現更接近于人類肝轉移瘤。

肝腫瘤；血管造影術；動物，實驗

10.3969/j.issn.1007-3205.2016.08.018

近年來我國肝臟惡性腫瘤發病率逐年增高，其中肝癌是危害人們健康的主要惡性腫瘤之一，居癌癥死亡原因的第3位，每年由于肝癌死亡的病例約50%發生在中國，患者就診時大多在中晚期[1-2]。因此，關于肝臟惡性腫瘤診治的研究，越來越為廣大醫務工作者所重視。制備適合的動物肝臟腫瘤模型進行研究，可以為臨床肝臟惡性腫瘤的診治提供有利的數據和依據。將VX2瘤株種植于兔相應的器官，建立兔肝臟腫瘤模型是目前常用的方法[3-8]，主要是將VX2瘤株(可以是VX2細胞懸液，也可以是VX2組織塊)直接種植于兔肝臟。VX2瘤株起源于Shope病毒誘發的兔乳頭狀瘤，為鱗狀細胞癌瘤株，由此建立的兔肝臟腫瘤模型是原發性肝癌還是肝臟轉移瘤存在爭議。將VX2瘤株種植于兔脾臟，隨之發生肝臟轉移，由此建立兔肝臟腫瘤模型的方法，國內外罕有報道。將VX2瘤株種植于兔脾臟的方法能否成功建立兔肝臟腫瘤模型，2種方法建立的兔肝臟腫瘤模型有什么不同，尚無明確結論。尋找更好的建立兔肝臟腫瘤模型方法以及建立適合研究的模型，對臨床肝臟腫瘤的研究及診治具有重要的意義。現將研究結果報告如下。

1　材料與方法

1.1實驗動物新西蘭大白兔60只，雌雄不限，體質量2.5～3.0 kg/只，隨機分為2組，每組30只。A組：于兔耳緣靜脈注射1%戊巴比妥鈉(3 mL/kg)麻醉后，仰臥固定于實驗臺上，劍突下腹部皮膚剪毛、消毒后，于正中縱行逐層切開腹壁約3 cm，暴露并牽拉出肝臟左葉，直視下緩慢注入VX2細胞懸液(濃度1×107/mL)1 mL，無菌干紗布壓迫5 min，觀察無細胞懸液外流后還納肝臟，逐層關閉腹壁，連續7 d于耳緣靜脈注射頭孢曲松鈉20 mg·kg-1·d-1預防感染。B組：將實驗兔麻醉后，仰臥固定，左側肋弓下緣剪毛、消毒，沿左側肋緣逐層切開腹壁約3 cm，暴露并牽拉出脾臟，緩慢注入VX2細胞懸液(濃度1×107/mL)1 mL，無菌干紗布壓迫5 min，觀察無細胞懸液外流后還納脾臟，逐層關閉腹壁，連續7 d于耳緣靜脈注射頭孢曲松鈉20 mg·kg-1·d-1預防感染。分別于種植后第14天及第15天行CT增強掃描及數字減影血管造影(digital subtraction angiography，DSA)檢查，觀察統計CT掃描、DSA檢查兔肝臟多發病變例數以及環形強化和染色例數。

1.2CT掃描80 kV，200 mA，層厚2.5 mm，延時5 s，造影劑(碘佛醇注射液350)注射速度為1 mL/s，造影劑注射總量為4 mL。

1.3DSA麻醉好的兔仰臥位固定，于右側腹股溝區逐層切開皮膚及皮下，暴露并游離右側股動脈，結扎股動脈遠端，使近端充盈明顯，直視下使用5F套管針(日本泰爾茂公司)穿刺右側股動脈并置入Stride微導管(日本朝日公司，2.2 F)，在透視監視下將Stride微導管分別選入腹主動脈(造影速率2 mL/s，總量4 mL)、腹腔干(造影速率1.5 mL/s，總量4 mL)及肝固有動脈(造影速率0.5 mL/s，總量2 mL)造影。結束后拔出導管及套管，結扎右側股動脈，逐層縫合，連續7 d于耳緣靜脈注射頭孢曲松鈉20 mg/kg/d預防感染。

1.4統計學方法應用PEMS 3.1統計軟件進行數據分析，計數資料比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2　結　　果

2.1模型情況對比A組(經肝種植VX2細胞懸液)30只兔全部成功建模，成功率為100.00%，并全部完成實驗。B組(經脾種植VX2細胞懸液)30只兔中，2只在接種VX2細胞懸液后10 d死亡，死亡后解剖發現這2只均出現腹膜種植，有大量腹腔積液，肝臟均未見轉移病灶；有28只建立模型成功，成功率為93.33%，28只兔完成實驗。

2.2CT掃描與DSAA組CT掃描及DSA檢查肝臟多發病灶數及環形強化病灶數與B組差異均有統計學意義(P<0.05)。見表1，2。

表1　2組CT掃描肝臟多發病灶數及環形強化病灶數比較

表2　2組DSA檢查肝臟多發病灶數及環形強化數比較

3　討　　論

肝臟是最常見的惡性腫瘤轉移靶器官，在西方國家肝臟惡性腫瘤以肝臟轉移瘤居多，在我國肝臟轉移瘤與原發性肝癌的發病率大致相當，但隨著乙型肝炎防治的進行，肝轉移瘤的發病有增多趨勢，因此肝臟惡性腫瘤的治療越來越為臨床醫師重視。經肝動脈化療栓塞是治療肝臟惡性腫瘤常用的技術，可以顯著延長肝癌患者的生存期[9]，也是不能手術的肝癌或肝轉移瘤的首選治療方法[10-12]。制備適合介入診療研究的動物肝臟腫瘤模型為臨床研究肝臟惡性腫瘤的診治奠定了基礎。于兔相應器官種植VX2瘤株建立的兔腫瘤模型是絕大多數學者認為最合適的供介入放射學研究的動物模型，并且模型建立的成功率均在50%以上[13-14]。

本研究中A組模型建立成功率為100.00%，B組成功率為93.33%，B組中有2只兔子在接種后10 d死亡，經解剖發現腹腔內廣泛轉移，肝臟并未發現轉移病灶，原因可能是脾臟接種瘤株后，局部壓迫時間不足，還納脾臟后細胞懸液流出，造成廣泛的腹膜種植。本研究結果顯示通過肝臟和脾臟種植VX2瘤株均能成功建立兔肝臟腫瘤模型。

兔VX2肝臟腫瘤模型的肝臟病變強化或染色明顯，為富血供腫瘤，但也有學者報道兔VX2肝臟腫瘤CT強化不明顯，為乏血供腫瘤[15]。兔VX2肝臟腫瘤血供差異與建模方法不同是否有關，研究報道很少。肝動脈化療栓塞治療肝臟腫瘤的療效與腫瘤血供的豐富程度相關，肝臟腫瘤的血供是否豐富對介入栓塞治療中栓塞劑的選擇至關重要。經肝臟種植瘤株，瘤株直接在肝臟生長，這種模型是否可以被認為是原發肝癌？經脾臟種植瘤株，瘤細胞在脾臟增殖，進而隨血液轉移至肝臟，這種模型是否可以認為是肝轉移瘤？人原發性肝癌多表現為單發、整個病灶強化或染色明顯[16]，為富血供腫瘤；而肝轉移瘤多表現為多發、病灶邊緣環形強化，為乏血供腫瘤。本研究建立的兔VX2肝臟腫瘤模型作為原發性肝癌研究還是作為肝轉移瘤研究，眾多學者尚無共識。對不同方法建立的兔肝臟腫瘤模型進行比較，找出存在的差異，才能為臨床肝臟惡性腫瘤診療的研究提供更可靠的依據。

本研究中CT掃描發現A組30只實驗兔中肝臟出現多發病變例數及肝臟腫瘤表現為邊緣環形強化的例數均較少，分別占10.00%和6.67%，而B組28只實驗兔中多發病變例數及肝臟腫瘤表現為邊緣環形強化的例數均較多，分別占92.86%和85.71%，2組差異均有統計學意義。表明經脾臟種植瘤株建立的模型中肝臟腫瘤CT表現特點為多發、邊緣環形強化，這與人肝轉移瘤相一致；相反，經肝臟種植瘤株建立的模型中肝臟腫瘤的CT表現特點更接近于人原發性肝癌。

本研究中DSA檢查結果與CT掃描結果相一致，2組差異亦均有統計學意義。DSA檢查也進一步證實經脾種植瘤株建立的模型中肝臟腫瘤與人類肝轉移瘤的特點接近，而經肝臟種植瘤株建立的模型更接近人原發性肝癌。

總之，經肝臟及經脾臟種植VX2細胞懸液均能成功建立兔肝臟腫瘤模型。通過兔肝臟種植VX2瘤株建立的肝臟腫瘤模型CT及DSA表現更接近人類原發性肝癌；通過兔脾臟種植VX2瘤株建立的肝臟腫瘤模型CT及DSA表現更接近于人類肝轉移瘤。

[1]童敏,陳柱.以改良方法建立兔VX2肝癌模型[J].中國組織工程研究,2015,19(27):4361-4364.

[2]吳發宗，紀建松，涂建飛.兔VX2肝癌模型肝動脈化療栓塞后微環境中CD3+、CD4+T細胞的表達[J].健康研究,2014,34(6):622-624.

[3]李博,李智崗,艾寧,等.2種方法建立兔VX2肝種植癌模型的對比及介入技術應用[J].河北醫科大學學報,2011,32(4):429-432.

[4]Parvinian A,Casadaban LC,Daba RC. Development,growth,propagation,and angiographic,utilization of rabbit VX2 model of liver cancer:a pictorial primer and “how to” guide[J]. Diagn Interv Radiol,2014,20:335-340.

[5]唐勝利,袁玉峰,錢群,等.康派特醫用膠改良兔VX2肝癌模型的種植方法及其生長特性[J].中華實驗外科雜志,2015,32(11):2884-2886.

[6]Duran R,Sharma K,Dreher MR,et al. A Novel Inherently Radiopaque Bead for Transarterial Embolization to Treat Liver Cancer-A Pre-clinical Study[J]. Theranostics,2016,6(1):28-39.

[7]Gholamrezanezhad A, Mirpour S, Geschwind JH,et al. Evaluation of 70-150-μm doxorubicin-eluting beads for transcatheter arterial chemoembolization in the rabbit liver VX2 tumour model[J]. Eur Radiol,2016[Epub ahead of print].

[8]秦漢林,王偉昱,朱先海,等.CT引導下不同方法建立兔VX2肝癌模型的比較[J].中華實驗外科雜志,2015,32(10):2602-2604.

[9]Song do S,Nam SW,Bae SH,et al. Outcome of transarterial chemoembolization-based multi-model treatment in patients with unresectable hepatocellular carcinoma[J]. World J Gastroenterol,2015,21(8):2395-404.

[10]范晴敏,陸正華.肝轉移癌的微創治療[J/CD].中華臨床醫師雜志:電子版,2013,7(6):2635-2637.

[11]葉穎江,申占龍,王杉.轉移性肝癌的治療理念和策略[J/CD].中華普外科手術學雜志:電子版,2014,8(1):26-29.

[12]王紅光,武中林,郭慶軍,等.DSA變速采集在肝癌介入治療中的應用[J].河北醫科大學學報,2012,33(10):1200-1203.

[13]盧陳英,惠俊國,夏水偉,等.64排CT及血管成像在兔VX2肝癌移植瘤診斷中的應用[J].中華醫學雜志,2015,95(7):541-543.

[14]Namur J,Pascale F,Maeda N,et al. Safety and efficacy compared between irinotecan-loaded microspheres HepaSphere and DC bead in a model of VX2 liver metastases in the rabbit[J]. J Vasc Interv Radiol,2015,26(7):1067-1075.

[15]武中林,吳勇超,谷鐵樹,等.肝轉移瘤血液供應來源分析[J].河北醫科大學學報,2015,36(4):428-432.

[16]王善軍.多排螺旋CT重建技術在小肝癌早期診斷中的價值[J].河北醫科大學學報,2012,33(11):1334-1336.

(本文編輯：劉斯靜)

Comparison of liver tumor models of rabbit inoculated with VX2 tumor through liver and spleen

SHI Bo,PING Yong, WANG Yong-zhong, LI Zhi-gang*

(Department of Radiology, the Forth Hospital of Hebei Medical University, Shijiazhuang 050011， China)

ObjectiveTo observe whether the rabbit liver tumor models can be successfully established and to explore the difference between the 2 models. VX2 tumor strains were inoculated in different parts of the rabbit(liver and spleen). Imaging features were examined by using CT enhanced scan and digital subtraction angiography(DSA). MethodsSixty rabbits were divided into two groups randomly(30 rabbits in each group). In group A, the tumor cell suspension in a volume of 1 mL was injected into liver. In group B, the suspension was injected into spleen. The rabbits were examined by CT perfusion scan and DSA at 14 and 15 days after implantation. The CT manifestation(the number and enhancement characteristics of hepatic lesions), the manifestation of DSA(the number and stain of the lesions) and the parameters of CT perfusion scan were observed. ResultsThrity rabbits models in group A were all successfully established and the experiments were completed. Twenty-eight rabbits models in group B were all successfully established and the experiments were completed. There were significant differences in the CT scan, DSA examination of multiple focal liver lesions and number of ring enhanced lesions in liver between group A and group B(P<0.05). ConclusionThe rabbit liver tumor model was successfully established by VX2 cell suspension culture in liver and spleen. The model established by liver inoculated with VX2 tumor strain was found to be more close to human primary liver cancer by using the CT scan and DSA. The model established by spleen inoculated with VX2 tumor strain was found to be more close to human primary liver metastasis by using the CT scan and DSA.

liver neoplasms； angiography； animals, laboratory

2016-03-29；

2016-04-13

史博(1980-)，男，遼寧沈陽人，河北醫科大學第四

。E-mail:FSKL1ZH1GANG2013@163.com

R753.5

A

1007-3205(2016)08-0940-04

醫院主治醫師，醫學碩士，從事腫瘤介入治療研究。