可溶性內皮細胞蛋白C受體和高敏C反應蛋白水平預測糖尿病患者血管并發癥的價值

蒙緒標，符蘭芳，劉婷婷，鄭地明

（中南大學湘雅醫學院附屬海口醫院 內分泌科，海南 海口 570208）

論著

可溶性內皮細胞蛋白C受體和高敏C反應蛋白水平預測糖尿病患者血管并發癥的價值

蒙緒標，符蘭芳，劉婷婷，鄭地明

（中南大學湘雅醫學院附屬海口醫院 內分泌科，海南 海口 570208）

目的探討可溶性內皮細胞蛋白C受體（sEPCR）和高敏C反應蛋白（hsCRP）預測糖尿病（DM）患者血管并發癥的價值。方法20例1型DM患者、30例2型DM患者及30例健康志愿者納入該次研究。酶聯免疫吸附法（ELISA）來測定受試者血清sEPCR和hsCRP含量。結果與對照組相比，兩種類型糖尿病患者中sEPCR和hsCRP水平都升高。sEPCR能夠預測1型糖尿病患者大血管并發癥和血栓形成，P值分別為0.016和0.015。而hsCRP可以明顯預測2型糖尿病患者的大血管并發癥，P=0.042。結論1型和2型糖尿病患者sEPCR和hsCRP水平高于健康志愿者，提示其血管內皮功能損傷。sEPCR對1型糖尿病患者大血管并發癥和血栓形成有一定預測作用，而hsCRP對2型糖尿病患者大血管并發癥有一定預測作用。

糖尿病；sEPCR；hsCRP；血管并發癥

血管內皮功能障礙是1型和2型糖尿病（diabetes mellitus，DM）患者微血管和大血管病變重要因素[1]。血管內皮功能障礙不僅是血管并發癥的重要發病因素，也是影響其發展進程與臨床后遺癥的重要因素[2]。大血管并發癥的類型主要有冠狀動脈疾病、外周動脈疾病及中風，而微血管并發癥主要包括糖尿病腎病、糖尿病神經病變及糖尿病視網膜病變。內皮功能障礙是指內皮層失去生理特性，轉變為血管收縮、血栓或致炎因子狀態[3]。可溶性內皮細胞蛋白C受體（soluble endothelial protein C receptor，sEPCR）是內皮細胞蛋白C受體胞外域裂解產物[4]。內皮細胞蛋白C受體是1型跨膜蛋白，主要在大血管內皮中表達[5]。全身炎癥患者體內sEPCR水平將升高，并且可能引發血栓[6]。抗凝血療法可降低sEPCR水平[7]。高敏C反應蛋白（high sensitivity C reactive protein，hsCRP）是急性期反應物，也是炎癥敏感標志物。許多研究證實，即使是在臨床正常范圍內，hsCRP也是代謝綜合征前兆，是2型糖尿病患者早期心血管疾病的獨立預測因子。本研究主要探討1型與2型糖尿病患者內皮損傷標志物sEPCR和hsCRP水平，預測糖尿患者血管并發癥的價值。

1　資料與方法

1.1研究對象

本研究納入2013年1月-2013年12月在海口醫院內分泌門診就診的20例1型DM患者和30例2型DM患者，同時納入同期在本院進行體檢的30例健康志愿者作為對照組。1型糖尿病患者平均病程（12.2±9.4）年（1～31年），中位值為10年。2型糖尿病患者平均病程（10.8±5.7）年（4～25年），中位值為9年。50例糖尿病患者中16例男性和34例女性。1型DM患者組中，10例（50%）伴有高血壓，3例（15%）伴有微血管并發癥，1例伴有神經病變，2例伴有腎病，4例（20%）伴有冠狀動脈疾病（大血管并發癥），1例（5%）伴有腎病和冠狀動脈疾病，6例（30%）為單純性DM，無其他并發癥。2型DM患者組中，18例（60%）伴有高血壓，6例（20%）伴有微血管并發癥，1例伴有神經病變，4例伴有腎病，1例伴有視網膜病變，3例（30%）伴有大血管并發癥，其中有2例伴有冠狀動脈疾病、1例伴有外周動脈疾病，1例（3.3%）伴有腎病兼冠狀動脈疾病，8例（26.7%）為單純性DM，無其他并發癥。患者用藥史：23%的患者曾服用辛伐他汀（降血脂藥物），33%的患者曾服用鎮痛劑（24%對乙酰氨基酚，9%阿司匹林）。41%的患者曾服用抗高血壓劑（22%血管緊張素酶抑制肽，9%鈣通道阻滯劑，6%選擇性β受體阻滯劑，4%非選擇性β受體阻滯劑）。9%的患者曾服用黃嘌呤氧化酵素抑制劑，6%的患者曾服用呋喃苯肢酸。6%的患者曾服用硫酸低鐵。24%的患者曾攝入鈣與維生素D（13%維生素D，11%鈣）。另外，11%的患者曾服用葉酸，11%的患者曾服用雷尼替丁，6%的患者曾服用奧美拉唑。1型糖尿病患者曾接受胰島素治療。2型糖尿病患者曾單獨或與二甲雙胍聯合口服降糖藥。所有糖尿病患者均有完整病史資料。吸煙或全身炎癥疾病或感染患者被排除在研究之外。對照組為8名男性和22名女性。

1.2樣本采集

試驗組與對照組受驗者空腹12 h后，無菌條件下采集3m l靜脈血。血液離心15min，將血清分離成兩部分。一部分用于測定生化標志物，而另一部分保存在-80℃冰箱中，用于測定sEPCR和hsCRP。

1.3檢測方法

采用酶聯免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）測定可溶性內皮細胞蛋白C受體和高敏C反應蛋白水平。sEPCR ELISA和hsCRP試劑盒購自美國R&D公司。hsCRP試劑批內精度CV%為8.3%～15.2%，而hsCRP試劑批間精密度CV%為7.8%～9.9%。貝克曼生化儀測定血糖、尿素、肌酐、膽固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白（high densityl ipoprotein，HDL）和低密度脂蛋白（low density lipoprotein，LDL）。

1.4統計學方法

采用SPSS 18.0統計軟件。計量資料用均數±標準差（）、中位數或范圍表示。根據數據分布，組間比較采用t檢驗或Mann-Whitney U檢驗。多重回歸分析hsCRP和sEPCR與血管并發癥和血栓形成的獨立相關性。P<0.05為差異具有統計學意義。

2　結果

2.1患者一般資料

1型糖尿病患者包括男性7例和女性13例（男女比例為1∶1.9），2型糖尿病患者包括男性12例和女性18例（男女比例為1∶1.5）。1型糖尿病組，年齡18～70歲，平均（45.9±16.7）歲。2型糖尿病組，年齡22～80歲，平均（52.4±13.6）歲。1型糖尿病組和2型糖尿病組患者年齡比較，差異無統計學意義（P=0.136；見表1）。兩組間患者病程差異也無統計學意義（P=0.246；見表1）。對照組8例男性和22例女性，男女比例為1∶2.8；年齡20~60歲，平均（36.6±12.5）歲。與對照組相比，兩組糖尿病組的患者年齡都較大。與對照組相比，1型糖尿病患者血糖和肌酐水平升高，而膽固醇、三酰甘油和糖化血紅蛋白水平增加。LDL、HDL與尿素差異無統計學意義。另一方面，與對照組相比，2型糖尿病患者血糖、肌酐和三酰甘油水平升高。此外，膽固醇和糖化血紅蛋白水平也增加。LDL與尿素差異無統計學意義。1型DM患者與2型DM患者相比，所有生化參數差異均無統計學意義（表1）。

表1　患者一般資料 （）

表1　患者一般資料 （）

注：P1是與對照組比較，P2是指2型和1型糖尿病患者比較

參數2型糖尿病組年齡/歲　36.6±12.5　45.9±16.7　52.4±13.6 t/P值　t=7.883，P1=0.041　t=15.721，P1=0.000；t=2.172，P2=0.136葡萄糖/（mg/dl）　85.8±17.1　211.8±109.0　171.9±83.6 t/P值　t=18.272，P1=0.000　t=19.287，P1=0.000；t=1.873，P2=0.175膽固醇/（mg/dl）　160.8±29.1　206.1±61.5　201.9±51.8 t/P值　t=10.283，P1=0.009　t=13.874，P1=0.004；t=0.943，P2=0.804三酰甘油/（mg/dl）　87.5±43.5　146.7±92.5　192.8±131.3 t/P值　t=8.487，P1=0.017　t=17.627，P1=0.000；t=1.422，P2=0.180 HDL/（mg/dl）　52.2±10.8　50.2±18.4　42.9±13.8 t/P值　t=1.042，P1=0.754　t=9.473，P1=0.013；t=1.972，P2=0.116 LDL/（mg/dl）　106.3±22.5　118.4±38.4　120.8±40 t/P值　t=1.563，P1=0.371　P1=0.168；P2=0.831尿酸/（mg/dl）　29.5±7.9　41.8±34.2　35.6±28.7 t/P值　t=2.169，P1=0.138　t=1.485，P1=0.478；t=1.463，P2=0.491肌酐/（mg/dl）　0.4±0.1　1.2±0.9　1.2±0.9 t/P值　t=14.892，P1=0.001　t=19.286，P1=0.000；P2=0.825糖化血紅蛋白%/（mmol/mol）　4.6±0.7（27±16）　10.2±2.7（88±6）　7.9±2.6（63±5）t/P值　t=13.874，P1=0.004　t=15.126，P1=0.003；t=1.981，P2=0.115對照組1型糖尿病組

2.21型、2型糖尿病患者及健康志愿者sEPCR和hsCRP水平比較

與對照組相比，1型DM患者sEPCR和hsCRP水平均升高（P<0.05），而2型DM患者的sEPCR和hsCRP水平升高。1型DM患者與2型DM患者相比，sEPCR和hsCRP水平差異無統計學意義（表2）。根據糖尿病患者并發癥情況分組分析后發現，與對照組相比，單純糖尿病患者的sEPCR和hsCRP水平升高；并發高血壓的糖尿病患者hsCRP水平升高，但sEPCR水平差異無統計學意義；伴大血管并發癥和血栓形成的糖尿病患者sEPCR和hsCRP水平均升高；伴微血管并發癥的糖尿病患者sEPCR水平升高，但hsCRP水平差異無統計學意義（表3）。

2.3sEPCR和hsCRP與糖尿病患者臨床參數相關性分析

多元回歸分析表明1型DM患者的sEPCR水平與病程顯著相關（F=4.691；b=0.455；P=0.040），而hsCRP與病程及高血壓均顯著相關（與病程相關時，F=4.282；b=0.583；P=0.018；與高血壓相關時，b=0.522；P=0.031）。2型DM患者sEPCR與病程、高血壓等參數均無顯著相關性，而hsCRP與血糖顯著相關（F=3.314；b=0.400；P=0.030）。1型DM患者sEPCR水平（b=0.539；t=2.706；P=0.016）和BMI（b=-0.503；t=-2.402；P=0.030）能夠預測大血管并發癥（表4）。2型DM患者hsCRP（b=0.365；t=2.138；P=0.042）和膽固醇（b=0.455；t=2.706；P=0.012）能夠預測大血管并發癥（表4）。兩種DM患者中，sEPCR和hsCRP都不能預測微血管并發癥。1型DM患者sEPCR水平（b=0.526；t=2.742；P=0.015）和膽固醇（b=0.463；t=2.234；P=0.046）能夠預測血栓形成。

表2　1型、2型糖尿病患者與對照組受試者sEPCR和hsCRP水平比較

表3　不同并發癥糖尿病患者sEPCR和hsCRP水平比較

表4　1型和2型糖尿病患者大血管并發癥和血栓形成的預測因素

3　討論

心血管疾病是糖尿病常見并發癥，也是糖尿病患者死亡的主要原因。內皮功能障礙與1型和2型 DM相關[3]。該實驗發現糖尿病患者組血漿sEPCR水平明顯高于健康對照組（P<0.05），這可能是由于EPCR從內皮細胞表面不斷脫落引起，VAN-WISSEN等[8]研究結果與本研究結果一致。VAN-WISSEN等還認為sEPCR值較高可能與DM患者炎癥反應和內皮細胞損傷有關。此外，該結果還發現sEPCR和hsCRP無相關性，提示除炎癥反應外，還有多種因素影響DM患者sEPCR水平升高。本研究還發現sEPCR與糖尿病病程顯著正相關，提示內皮細胞損傷程度與病程有關，這也被認為是1型DM患者sEPCR升高的混雜因素。此外，單純性糖尿病、伴大血管并發癥和血栓形成糖尿病患者sEPCR水平明顯高于健康對照組（P<0.05）。與此相反，對照組與伴高血壓及微血管并發癥（P>0.05）糖尿病患者間sEPCR水平差異無統計學意義。sEPCR能夠抑制APC抗凝血活性，所有sEPCR較高患者都處于血栓前狀態，更容易形成血栓[9]。此外，盡管大血管并發癥和血栓形成患者sEPCR更高，但糖尿病患者亞組內sEPCR水平差異無統計學意義，這可能由于樣本數較少的原因（大血管并發癥患者n=8，血栓形成患者n=5）（P>0.05）。將大血管并發癥和血栓形成作為獨立變量，每種類型DMsEPCR與其他參數作為因變量，進行多元回歸分析分發現sEPCR可能對糖尿病患者大血管并發癥和血栓形成發病機制起著關鍵作用，能夠預測這些并發癥發生。本研究是國內首次證實sEPCR能夠作為糖尿病患者大血管并發癥和血栓形成的預測因子。

本研究還發現1型和2型糖尿病患者hsCRP水平明顯高于健康對照組（均P<0.05）。高血糖癥可以促進多種細胞釋放腫瘤壞死因子α（TNF-α）和白細胞介素6（IL-6）等炎癥細胞因子，這些細胞因子可以促進肝臟生成與釋放hsCRP，從而使血液循環中hsCRP水平升高[10]。本組2型DM患者hsCRP與血糖呈正相關，1型DM患者病程與高血壓都與hsCRP顯著相關，也可以被認為是1型DM患者hsCRP升高的獨立混雜因素。以往研究證實高血壓與hsCRP血漿水平呈正相關[11]。高血壓可能增加血管氧化應激和對動脈壁的促炎性作用。男性患者hsCRP與血糖呈顯著正相關（r=0.5；P=0.01），而女性患則無此相關性。因此，性激素可能影響血糖與hsCRP相關性，這可能是男性患者心血管疾病風險較高的一個原因[12]。此外，與對照組相比，單純DM、微血管和大血管并發癥、血栓形成和同時罹患高血壓和DM患者hsCRP水平均明顯增加（P<0.05）。本研究中，hsCRP被認為是2型糖尿病患者大血管并發癥的重要預測因子，可以作為此類患者檢測大血管并發癥的早期標志物。

總之，與健康對照組相比，1型和2型糖尿病患者表現出較高的sEPCR和hsCRP水平，說明這些患者可能存在內皮損傷。sEPCR可以被用作1型DM患者大血管并發癥和血栓形成的預測因子，而hsCRP可以被用作2型DM患者大血管并發癥和血栓形成的預測因子。

[1]陳蕊華,蔣曉真,周龍珠,等.血漿可溶性CD36與2型糖尿病及亞臨床大血管病變的關系[J].臨床內科雜志,2013,30(9):809-811.

[2]劉子睿,張麗瓊,高麗園,等.視網膜微血管內皮細胞在糖尿病視網膜病變中的研究現狀[J].現代生物醫學進展,2014,14(8):2590-2592.

[3]MARIJAM,POLOVINA,TATJANA S,et al.Endothelial dysfunction in metabolic and vascular disorders[J].Postgraduate Medicine,2014, 126(9):38-53.

[4]葉建明,封建華,盧國元,等.狼瘡性腎炎患者血漿可溶性內皮細胞蛋白C受體及血栓調節蛋白水平變化及臨床意義[J].中國中西醫結合腎病雜志,2013,14(8):615-617.

[5]KU SK,HAN M S,PARK E J,et al.Exendin-4 inhibits endothelial protein C receptor shedding in vitro and in vivo[J].Pharmacological Research,2014,84(21):18-25.

[6]徐荷鳳.2型糖尿病患者血漿可溶性內皮細胞蛋白C受體及血栓調節蛋白的變化及意義[J].中國血液流變學雜志,2012,22(4): 351-352.

[7]BILGICM A,YILMAZH,BOZKURTA,et al.Relationship of late arteriovenous fistula stenosis with soluble E-selectin and soluble EPCR in chronic hemodialysis patients with arteriovenous fistula[J].Clinical and Experimental Nephrology,2015,19(1):133-139.

[8]VAN-WISSEN S,TRIPM D,SMILDE T J,et al.Differential hs-CRP reduction in patients with familial hypercholesterolemia treated with aggressive or conventional statin therapy[J].Atherosclerosis,2002,165 (2):361-366.

[9]MEDINA P,NAVARRO S,ESTELLéSA,et al.Contribution of polymorphisms in the endothelial protein C receptor gene to soluble endothelial protein C receptor and circulating activated protein C levels, and thrombotic risk[J].Thromb Haemost,2004,91(5):905-911.

[10]王擁軍.高血糖癥對腦血管病的影響[J].中國卒中雜志,2007,2 (7):626-631.

[11]李長紅,鄭斌,李振海.惡性高血壓患者血漿高敏C反應蛋白,血管性血友病因子和血管性血友病因子裂解酶的變化及意義[J].中華高血壓雜志,2011,19(1):57-60.

[12]PFUTZNERA,SCHONDORFT,HANEFELDM,et al.High sensitivity C-reactive protein predicts cardiovascular risk in diabetic and nondiabetic patients:effects of insulin sensitizing treatment with pioglitazone [J].J Diabetes Sci Technol,2010,4(8):706-716.

（張西倩編輯）

Role of sEPCR and hsCRP levels in prediction of vascular complications of patients with diabetes mellitus

Xu-biao Meng，Lan-fang Fu，Ting-ting Liu，Di-ming Zheng
（Department of Endocrinology，the Affiliated Haikou Hospital of Xiangya Medical College，Central South University，Haikou，Hainan 570208，China）

Objective To measure soluble endothelial protein C receptor（sEPCR）and high-sensitivity C reactive protein（hsCRP）levels as markers of endothelial damage in both types of diabetes mellitus（DM）and to determine if they can be used as predictors of vascular complications.Methods Fifty patients with DM（20 with type 1 and 30 with type 2 DM）and 30 healthy subjects were included.All were subjected to measurement of sEPCR and hsCRP by enzyme linked immunosorbent assay.Results sEPCR and hsCRP were significantly increased in both types of DM when compared to the control group.sEPCR was a significant predictor of macrovascular complications and thrombosis in type 1 DM（P=0.016 and P=0.015，respectively），while hsCRP was a significant predictor of macrovascular complications in type 2 DM（P=0.042）.Conclusions Patients with type 1 or type 2 DM exhibit higher sEPCR and hsCRP levels compared to healthy controls，which suggest endothelial damage.sEPCR could be used as a predictor of macrovascular complications and thrombosis in type 1 DM，whereas hsCRP might be used as a predictor of macrovascular complications in type 2 DM.

diabetes mellitus；sEPCR；hsCRP；vascular complication

R587.1

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.14.012

1005-8982（2016）14-0058-05

2015-12-28

鄭地明，E-mail：32170485@qq.com