血清親環素A與頸動脈不穩定斑塊及腦梗死的相關性研究

聶善靜，李丹，王宏

（石河子大學醫學院第一附屬醫院 神經內科，新疆 石河子 832000）

血清親環素A與頸動脈不穩定斑塊及腦梗死的相關性研究

聶善靜，李丹，王宏

（石河子大學醫學院第一附屬醫院 神經內科，新疆 石河子 832000）

目的通過檢測頸動脈硬化不穩定斑塊伴動脈粥樣硬化腦梗死（A C I）患者（A C I組）、頸動脈硬化不穩定斑塊患者（單純斑塊組）及健康體檢者（對照組）血清親環素A（C y P A）、脂蛋白相關磷脂酶A2（Lp-P L A2）水平，探討觀察者血清C y P A、Lp-P L A2水平與斑塊不穩定性及A C I的關系。方法頸動脈粥樣硬化斑塊經頸部血管彩色超聲檢查確定；采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（EL ISA）測定觀察者血清C y P A、Lp-P L A2水平。結果

患者的血清C y P A水平A C I組（2.031±0.679）ng/m l＞斑塊組（3.790±0.943）ng/m l＞對照組（5.113±1.568）ng/m l，差異有統計學意義（P＜0.05）；血清Lp-p l A2水平A C I組（1.949±0.666）ng/m l＞斑塊組（1.703±0.541）ng/m l＞對照組（1.426±0.406）ng/m l，差異有統計學意義（P＜0.05）。L o gis t i c回歸分析顯示，C y P A是不穩定斑塊患者發生腦梗死的獨立危險因素（ ＾O R=2.71，95%C I：1.52，4.83，P=0.01）。以C y P A、Lp-P L A2為雙變量行相關分析顯示兩者呈正相關（r=0.343）。結論血清C y P A、Lp-P L A2水平可作為頸動脈不穩定斑塊的臨床標志物；聯合檢測血清C y P A、Lp-P L A2水平可能會預測A C I的發生。

頸動脈不穩定斑塊；動脈粥樣硬化腦梗死；血清親環素A；脂蛋白相關磷脂酶A2

腦梗死的發生嚴重威脅著人們的健康，加重人們的生活負擔，其中動脈粥樣硬化性腦梗死（atherosclerosis cerebral in f arction，A CI）是最常見的類型［1］。動脈粥樣硬化（A therosclerosis，A S）是慢性炎癥過程，炎癥反應、氧化應激貫穿A S起始、不穩定斑塊形成和斑塊破裂整個過程［2］。近年來血清親環素A（C yp A）、脂蛋白相關磷脂酶A2（L p-P L A2）作為一種新型炎癥標志物，被證實與斑塊的不穩定性相關［3-4］。C yp A與內皮功能、A S的發生、發展及斑塊的穩定性有密切關系，但尚未有研究報道其在單純不穩定斑塊及A CI患者血漿中的水平變化，故本研究主要通過測定L p-P L A2的水平來評估不穩定斑塊的嚴重程度及炎癥水平，比較單純頸不穩定斑塊及A CI患者血清C yp A、L p-P L A2水平的變化，以探討C yp A、L p-P L A2與頸動脈不穩定斑塊及A CI之間的關系。

1　資料與方法

1.1臨床資料

選取2014年11月～2015年8月于石河子大學醫學院第一附屬醫院神經內科的腦梗死患者，行頸動脈彩色B超確定合并有不穩定斑塊者50例，作為斑塊合并腦梗死組（A CI）；同期選體檢中心健康人群，經頸動脈彩色B超確定有不穩定斑塊者50例作為單純斑塊組，經頸動脈彩色B超確定無斑塊者50例作為正常對照組。

病例組納入排除標準：所有腦梗死患者均符合2012年缺血性腦卒中診斷和診療質量控制行業標準，且符合T O A S J分型等L AA型；均經神經系統查體、頭顱C T和（或）M R I、頸動脈彩色多普勒超聲、心電圖等檢查確診。排除標準：①非大動脈粥樣硬化性腦梗死；②急性冠狀動脈綜合征、心力衰竭及其他周圍血管病；③自身免疫性疾病及其他炎癥疾病；④腫瘤、嚴重肝腎功能損害等疾病；⑤3個月內手術及外傷史。

對照組納入標準：年齡、性別與病例組相匹配，既往無腦血管病病史，頭顱磁共振證實無卒中。

頸動脈斑塊分組：穩定斑塊組（包括硬斑和扁平斑）；不穩定斑塊組（軟斑和潰瘍斑）。同時存在穩定及不穩定斑塊的均歸為不穩定斑塊。

1.2方法

1.2.1標本采集對照組、單純斑塊組、A CI組分別采取空腹靜脈血2m l，采血后均立即加入EDT A抗凝管中，以3 000 r/min離心15min后，收集上清液，將標本置入-80℃冰箱冷凍保存待測。為減少批間誤差和測量誤差，全部標本采集完成后一次性檢測。

1.2.2檢測方法采用 E L I S A法測定標本中C y P A、L p-P L A2水平，流程嚴格按照試劑盒說明書進行操作，人C yp A及人L p-P L A2酶聯免疫試劑盒均購于上海西唐生物科技有限公司。其余常規生化實驗室檢查由本院檢驗科完成。

1.2.3頸動脈彩色多普勒超聲檢查采用飛利浦I E33型彩色多普勒超聲診斷儀，探頭頻率7～11M H z，患者取平臥位，頭偏向一側，沿頸動脈走向，將探頭自上而下進行連續縱橫切面掃描雙側頸總、頸內、頸外動脈，觀察斑塊形態及回聲特點。將頸動脈粥樣硬化斑塊［5］定義為內膜中層不連續性、不均勻性增厚并凸入管腔，邊界光滑，病變厚度是鄰近部位內-中層厚度的1.5倍或彩色多普勒顯示血管腔某處彩色血流缺損，缺損處面積≥10mm2。斑塊分型方法：①內膜不光滑，回聲增強、增厚，局部輕微隆起為扁平斑；②斑塊凸出管腔，回聲強弱不均，表面光滑連續為軟斑；③斑塊較大，基底較寬，表面出現凹凸，邊緣回聲較低為潰瘍斑；④斑塊高低不平，強回聲，后伴聲影為硬斑。將扁平斑、硬斑歸為穩定斑塊組，軟斑、潰瘍斑歸為不穩定斑塊組。

1.3統計學方法

采用S P SS 17.0統計軟件進行數據分析，計量資料以均數±標準差（x±s）表示，正態分布計量資料用方差分析，非正態分布的計量資料用非參數檢驗，計數資料用χ2檢驗；血漿C y P A、L p-P L A2水平比較用方差分析兩兩比較法；腦梗死的相關危險因素用L og istic回歸分析，以比值比（odds ratio，O R＾）及95%可信區間（con f idence inter v al，CI）表示；相關分析用雙變量線性相關分析；P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.13組一般資料比較

經分析3組觀察者性別、年齡、吸煙史、體重指數（B MI）比較差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

2.23組之間血清C y P A、Lp-PL A2水平比較

A CI組血清C y P A、L p-P L A2水平與對照組和斑塊組的比較，經方差分析，差異有統計學意義（P＜0.05），A CI組血清C y P A、L p-P L A2水平高于對照組與斑塊組。C y P A3組間兩兩比較，對照組與斑塊組，對照組與A CI，斑塊組與A CI比較，差異有統計學意義（均P=0.000）；L p-P L A23組間兩兩比較，對照組與斑塊組比較，差異有統計學意義（P=0.013），對照組與A CI比較，差異有統計學意義（P=0.000），斑塊組與A CI比較，差異有統計學意義（P=0.001）。見表2。

表1　3組一般資料比較 （n=50）

表2　3組間血清C y P A、Lp-PL A2水平的比較（n g/ml，x±s）

2.3A C I相關危險因素分析

以不穩斑塊組是否發生腦梗死為因變量，以性別、年齡、吸煙史、B MI、三酰甘油（T G）、血清總膽固醇（T C）、低密度脂蛋白（L D L-C）、高密度脂蛋白（H D LC）、同型半胱氨酸（H C Y）、糖化血紅蛋白（H b A1c）、C反應蛋白（C R P）、C y P A、L p-P L A2為協變量，分別進行單因素L o g istic回歸分析，結果T G、T C、L D L-C、H C Y、H b A1c、C R P、C y P A、L p-P L A2差異有統計學意義（P＜0.05）。將有統計學差異的指標為協變量進行多因素L o g istic回歸分析，提示C y P A是頸動脈不穩定斑塊發生腦梗死的獨立危險因素（=2.71，95%CI： 1.52，4.83，P=0.01）。

2.4觀察者血清C y P A、Lp-PL A2的相關性分析繪制散點圖后，發現C y P A與L p-P L A2有相關趨勢，經S pearman相關分析，觀察者血漿C y P A與L p-P L A2濃度呈正相關（r=0.343，P=0.000）。

3　討論

動脈粥樣硬化是腦血管事件發生的主要病理基礎［6］。1986年美國華盛頓大學醫學院R O SS教授首次明確提出A S是一種炎癥性疾病。斑塊的不穩定性是評價血管事件發生、復發的危險因素，陳莉等認為斑塊的危險性在于其不穩定性［7］，而炎癥反應影響斑塊的穩定性［8］，斑塊內炎癥是引起斑塊不穩定的關鍵因素，斑塊破裂及斑塊糜爛與炎癥共存，不穩定狀態時斑塊內炎癥總是上調［9］。近期與斑塊不穩定性相關的炎性標志物受到學者的關注，目前得到普遍認可的炎性標志物［10］如C R P、金屬機制蛋白酶（MMP9）等是A S的敏感檢測指標，但炎癥反應是一個復雜的過程，在A S不同階段，炎癥因子的水平各有差異，然而單項指標特異性較差，需要尋找不同階段的炎性指標結合超聲等影像學檢查，更早、更全面地揭示A S的發展及嚴重程度。

L p-P L A2又被稱為血小板活化因子乙酰水解酶，人血清L p-P L A2主要由炎癥細胞合成分泌，它是與A S密切相關的磷脂酶家族分子，可預測斑塊不穩定性及炎癥水平［11］，在國外研究中也是較公認的反應內斑塊不穩定性的新標志物之一。本研究表明，觀察者血清L p-P L A2水平為A CI組＞單純斑塊組＞對照組，說明L p-P L A2反應斑塊的不穩定性，A CI組L p-P L A2水平稍高，可能為A CI組的炎癥程度較高。L p-P L A2水解氧化型低密度脂蛋白膽固醇（O X L D L-C）生成游離的氧化脂肪酸和溶血卵磷脂［12］，這兩種物質是強烈的致炎因子，最終影響斑塊不穩定性。KO L O D GI E等也發現在斑塊壞死中心、易損及破裂斑塊周圍L p-P L A2高度表達，但在正常對照及穩定斑塊中難以檢測到。另外，白小涓等研究［9］表明，與傳統炎癥因子C-反應蛋白比較，L p-P L A2有較高的血管內特異性，是獨立于全身炎癥之外的血管內炎性標志物。

C y P A是一種在生物界廣泛存在、高度保守的蛋白質，它可以存在于細胞內，也可因細胞凋亡和炎癥反應向細胞外分泌，發揮類似于細胞因子的作用［13］。在A S形成中C y P A主要通過以下方面發揮作用：①唐振旺等認為［14］，其通過調控細胞因子和炎癥分子而參與內皮細胞的損害及整個過程；②趨化單核細胞移行，促進巨噬細胞分泌MMP-9和巨噬細胞集落刺激因子，增加斑塊的不穩定性［15］；③激活E R K1/2、J N K （J u n N-terminal k inase）、核轉錄因子（N F-κB）和p38M A P K等信號通路，加重對內皮細胞的損害，增加A S斑塊不穩定性［16］。本研究在剔除感染性疾病、惡性腫瘤、自身免疫性疾病等因素的影響后發現觀察者血清C yp A水平為單純斑塊組＞對照組，提示C yp A水平與斑塊的不穩定性有一定關系，對于A CI組＞單純斑塊組，不僅能說明炎癥反應參與不穩定斑塊的發展及腦梗死的發病過程，還能反映不穩定斑塊發展的嚴重程度，提示高水平的C yp A更容易合并腦梗死，可能與A CI患者斑塊炎癥程度較高有關。N IG R O研究也表明，在A S斑塊中C yp A大量表達，是檢測炎癥和斑塊活動的有效指標［3］。C yp A可能會成為預測不穩定斑塊發展的生物學指標。

本研究以不穩定斑塊患者是否發生腦梗死為因變量進行多因素L o g istic回歸分析，結果顯示C y P A、L D L-C、H b A1c有統計學意義，提示除L D L-C、H b A1c傳統影響因素外，C y P A是頸動脈不穩定斑塊發生腦梗死的獨立危險因素（=2.71）。雙變量相關分析結果顯示，觀察者血清C yp A和L p-P L A2濃度在A S進展中呈正相關，提示C yp A和L p-P L A2具有協同正向作用，兩者之間可能存在通路，其協同作用的機制尚不明確，需要更多研究來證實。

綜上所述，C yp A和L p-P L A2為不穩定斑塊的特異性炎癥標志物，聯合檢測它們的含量可能對A S的早期發現、判斷斑塊局部炎癥發展的嚴重程度、預防血管事件發生及臨床干預有重要意義。

［1］A Z A R P A Z HOOH M R，M OB A RR A N，P A R I Z A DE H S M，et al. S er u m hi g h-sensiti v ity C-reacti v eprotein and heat shoc k protein27antibody titers inpatients w ithstro k e and6-month pro g nosis［J］.A n g iolo g y，2010，61（6）:607-612.

［2］L I X，DE R O I DE N，M A LL A T Z.The role o f the in f lammasome in cardio v asc u lar diseases［J］.J M ol M ed（B erl），2014，92（4）:307-309.

［3］N IG R O P，S A T OH K，DE LL M R，et al.C yclophilin A is an in f ammatory mediator that promotes atherosclerosis in apolipoprotein E-de f cient mice［J］.J E x p M ed，2011，208（1）:53-66.

［4］G A R G P K，MCC L E LL A ND R L，J ENN Y N S，et al.A ssociation o f lipoprotein-associatedphospholipase A（2）andendothelial fu nction in the M u lti-Ethnic S t u dy o f A therosclerosis（M E S A）［J］. V asc u lar M edicine，2011，16（4）:247-252.

［5］C O PP O L A G，C O RR A D O E，PI R A I N O D，et al.C arotid intima-media thic k ness and endothelial fu nction in yo u n g patients w ith history o f myocardial in f arction［J］.I nternational J o u rnal o f A n g iolo g y，2009，28（2）:120-126.

［6］李召晨，杜瑞艷，王洪娟，等.頸動脈粥樣硬化與急性腦梗死關系的研究［J］.中國現代醫學雜志，2013（6）:89-93.

［7］陳莉，吳婷，李慎義，等.超聲檢測頸動脈斑塊與冠心病的相關性研究［J］.中國現代醫學雜志，2013（3）:48-51.

［8］胡蓉，方先松，江麗霞，等.冠心病患者血清L p-P L A2及hs-C R P水平與冠狀動脈粥樣硬化易損斑塊的相關性［J］.中國老年學雜志，2015（1）:74-75.

［9］白小涓.內皮祖細胞在動脈粥樣硬化易損斑塊中的作用［J］.中國動脈硬化雜志，2011（7）:543-546.

［10］M O RR OW D A，DE L E M O S J A，S A B A T I NE M S，et al.C linical rele v ance o f C-reacti v e protein d u rin g f ollo w u p o f patients w ith ac u te coronary syndromes inthe Agg rastat-to-Z ocor Trail［J］. C irc u lation，2006，114（4）:281-288.

［11］劉軍妮，徐冬玲，杜貽萌，等.脂蛋白相關磷脂酶A2與兔易損斑塊的相關性研究［J］.中國病理生理雜志，2010（4）:669-675.

［12］T A K A H A S H I M，Y A G YU H，T A Z O E F，et al.M acropha g e lipoprotein lipase mod u lates the de v elopment o f atherosclerosis b u t not adiposity［J］.L ipid R es，2013，54（4）:1124-1134.

［13］張田田，張俊峰.親環素A及其受體C D147對動脈粥樣硬化的影響［J］.上海交通大學學報（醫學版），2011（12）:1778-1781.

［14］唐振旺.C yclophilin A基因多態性及其介導的炎癥反應在冠心病中的作用［D］.南華大學，2012（6）:11-77.

［15］王茂林，汪恩煥，周鐘陽，等.血清親環素A與急性動脈粥樣硬化性腦梗死關系研究［J］.淮海醫藥，2014（3）:221-222.

［16］袁偉，嚴金川，梁儀，等.親環素A啟動單核細胞炎癥性募集的機制［J］.中國動脈硬化雜志，2013（9）:791-796.

（申海菊 編輯）

Correlation of cyclophilin A w ith unstable carotid p laques and atherosclerotic cerebral infarction

Shan-jing Nie，Dan Li，Hong Wang
（Department of Neurology，the First Affiliated Hospital，School of Medicine，Shihezi University，Shihezi，Xinjiang 832000，China）

Objective To investigate the relationships of plasma levels of cyclophilin A（CyPA）and lipoprotein-association phospholipase A2（Lp-PLA2）with the unstability of carotid plaques and atherosclerotic cerebral infarction（ACI）.M ethods Carotid atherosclerotic plaques were defined by cervical vascular color ultrasonic inspection.The plasma levels of CyPA and Lp-PLA2 were detected by enzyme linked immunosorbent assay（ELISA）in patients with unstable carotid atherosclerosis plaques and ACI（ACI group），patients with unstable carotid atherosclerosis plaques（simple plaque group）and in healthy people（control group）.Results The plasma level of CyPA in the ACI group［（2.031±0.679）ng/ml］was significantly higher than that in the simple plaque group［（3.790±0.943）ng/m l］，which was in turn higher than that in the control group［（5.113±1.568）ng/ml］（P＜0.05）.The plasma level of Lp-PLA2 in the ACI group［（1.949±0.666）ng/m l］was significantly higher than that in the simple plaque group［（1.703±0.541）ng/m l］，which was in turn higher than that in the control group［（1.426±0.406）ng/m l］（P＜0.05）.Logistic regression analysis showed that CyPA was the independent risk factor for cerebral infarction in the patients of unstable plaques（＾O R=2.71；95%CI:1.52，4.83；P= 0.01）.Correlation analysis showed CyPA and Lp-PLA2 were in a positive correlation（r=0.343）.Conclusions Plasma CyPA and Lp-PLA2 levels can be used as clinical markers of unstable carotid plaques.Joint detectionof CyPA and Lp-PLA2 could predict the occurrence of ACI.

atherosclerotic cerebral infarction；carotid artery unstable plaque；cyclophilin A；lipoproteinassociated phospholipase A2

R 543.5；R 743.33

B

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.15.021

1005-8982（2016）15-0110-04

2015-10-29

王宏，E-mail：w an g832000@sina.com