膀胱黏膜毒蕈堿型膽堿能受體密度與前列腺術后膀胱痙攣的相關性研究

廖彬，黃世旺，蔡旌槐，陳偉義，陳益民

（廣東省潮州市人民醫院 泌尿外科，廣東 潮州 521000）

膀胱黏膜毒蕈堿型膽堿能受體密度與前列腺術后膀胱痙攣的相關性研究

廖彬，黃世旺，蔡旌槐，陳偉義，陳益民

（廣東省潮州市人民醫院 泌尿外科，廣東 潮州 521000）

目的探討膀胱黏膜毒蕈堿型膽堿能受體（M受體）M 2、M 3亞型的密度與前列腺電切術后膀胱痙攣的相關性。方法選取2012年5月-2015年5月醫院收治的良性前列腺增生（B P H）患者作為研究對象，將其分為合并膀胱過度活動癥（OA B）觀察組和不合并OA B對照組，再將觀察組分為發生膀胱痙攣組及不發生膀胱痙攣組，比較各組M 2、M 3受體的密度及其相關性。結果觀察組術后膀胱痙攣的發生率高于對照組；觀察組M 2、M 3受體密度均低于對照組；觀察組中發生膀胱痙攣患者的M 3受體密度低于不發生膀胱痙攣患者的M 3受體密度。結論膀胱黏膜M 3受體密度與前列腺術后發生膀胱痙攣存在相關性，提示M 3受體可能參與膀胱痙攣的發病機制。

毒蕈堿型膽堿能受體；膀胱黏膜；膀胱痙攣；良性前列腺增生；膀胱過度活動癥

良性前列腺增生（beni g n prostatic hyperplasia，B P H）是引起中老年男性排尿障礙最為常見的一種良性疾病。經尿道前列腺電切術（trans u rethral resection o f the prostate，T U R P）是治療B P H的金標準［1］。然而T U R P術后患者容易發生膀胱痙攣，膀胱痙攣會加重術后出血及患者痛苦，如何預防及控制術后膀胱痙攣是困擾泌尿外科醫生的難點。膀胱痙攣癥狀屬于膀胱過度活動癥（o v eracti v e bladder，O A B）范疇，有研究顯示，約50%的B P H患者同時伴有O A B癥狀［2-3］，而B P H合并O A B患者行T U R P術后膀胱痙攣發生率高達20%～25%［4-5］。

目前毒蕈堿型膽堿能受體（以下簡稱M受體）阻滯劑是治療O A B的一線用藥，能夠改善B P H患者的O A B癥狀，然而M受體阻滯劑如何緩解O A B癥狀的作用機制至今仍未明確［6］。近年來有研究發現，B P H合并O A B患者膀胱黏膜的M受體中M2、M3亞型受體密度比無O A B癥狀的B P H患者明顯降低，且與其發生O A B癥狀的嚴重程度存在相關性［7］。那么，膀胱黏膜M2、M3亞型受體的密度是否與T U P R術后發生膀胱痙攣存在相關性，M受體阻滯劑能否改善術后出現的膀胱痙攣癥狀，目前的相關報道較少。

1　資料與方法

1.1臨床資料

回顧性分析本院2012年5月-2015年5月收治的B P H患者共80例。將其分為B P H合并O A B組（觀察組）40例和B P H組（對照組）40例，使用O A B評分表，將尿急癥狀項目大于或等于2分定義為B P H合并O A B組，尿急癥狀項目0分者定義為B P H組。將觀察組中術后突然出現陣發性恥骨上區及尿道疼痛，膀胱沖洗管一過性受阻，伴或不伴有膀胱內液體返流至沖洗管或從尿道管周圍流出（排除膀胱血塊堵塞）的患者定義為膀胱痙攣組［8］，不發生上述癥狀的患者定義為不發生膀胱痙攣組。

1.2納入及排除標準

1.2.1納入標準①符合《2014版中國泌尿外科疾病診斷治療指南》中B P H的診斷標準；②前列腺特異性抗原＜4μg/L；③膀胱殘余尿量＞100ml；④存在行前列腺電切術手術指征患者；⑤年齡60～80歲；⑥簽署知情同意書，同意加入本研究項目。

1.2.2排除標準①術后病理診斷考慮前列腺癌患者；②糖尿病患者；③嚴重尿路感染。尿常規白細胞≥強陽性（+++）或膿球≥弱陽性（+）的患者；④存在神經源性膀胱功能障礙的患者；⑤近期曾使用M受體阻滯劑治療的患者；⑥患有精神疾病或存在語言障礙的患者。

1.3方法

1.3.1標本的獲取通過膀胱鏡活檢取得膀胱頂部的黏膜組織標本。

1.3.2膀胱黏膜的大小及保存方法每位患者均取3塊組織，每塊組織約3mm×4 mm×4 mm（5～20 m g）。將取得的標本放入組織凍存管，并迅速投入液氮中冷卻。手術結束后將標本置入-80℃的冰箱冷凍保存。

1.3.3實驗分析前的標本處理將所有組織標本做成病理切片，行蘇木精-伊紅染色確認為膀胱黏膜組織。

1.3.4使用的試劑及儀器Tri z ol試劑（美國I n v itro g en公司），Thermo S cript R T-PC R S ystem（美國I n v itro g en公司），B rilliantⅡ S YB R g reen Q PC R k it（美國S trata g ene公司），實時熒光定量聚合酶反應（q R T-PC R）儀（美國S trata g ene公司），微量核酸蛋白定量儀（美國Nanodrop公司），微量加樣器（德國Eppendor f公司），低溫高速離心機（德國Eppendor f公司），凝膠成像分析系統（法國V L公司），恒溫循環水浴箱（美國Thermo公司）等。

1.3.5q R T-P C R提取標本總R N A，保證R N A純度及行R N A的完整性鑒定（見附圖），參照Thermoscript R T-PC R S ystem說明書，通過逆轉錄反應獲得cDN A片段，設計好熒光定量PC R引物，在檢測M2 和M3受體的R N A的同時，利用引物對每個標本進行檢測，從而校正不同標本之間因R N A總量或逆轉錄反應效率差異等因素所致的數據差異。使用熒光定量儀做數據分析，繪制熒光定量PC R標準曲線，根據標準曲線標化M2、M3受體基因的拷貝數，最后將得到的標化的M2和M3基因拷貝數作為M2和M3受體密度進行統計分析。

1.4指標觀察

附圖　RN A鑒定

測定所有患者膀胱黏膜M2、M3受體的密度及術后發生膀胱痙攣的發生率，分析膀胱黏膜M2、M3受體的密度與術后發生膀胱痙攣的相關性。

1.5統計學方法

采用S P SS 18.0統計軟件進行數據分析，M2及M3的R N A值用中位數和四分位間距表示［M（P25～P75）］，定性資料用χ2檢驗進行分析，定量資料用兩獨立樣本的秩和檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1術后膀胱痙攣發生率的比較

本研究80例手術均順利完成。觀察組與對照組術后膀胱痙攣的發生率經χ2檢驗，差異有統計學意義。提示B P H合并O A B患者術后更容易發生膀胱痙攣。見表1。

2.2M2、M3受體密度的比較

兩組M2、M3受體標化的基因拷貝數應用兩獨立樣本的秩和檢驗，差異有統計學意義，提示B P H合并O A B患者M2、M3受體密度比B P H患者降低。見表2。

2.3M 2、M 3受體密度與術后發生膀胱痙攣的相關性

表1　兩組術后膀胱痙攣的發生率比較 （n=40）

表2　兩組M 2、M 3受體密度的比較　［n=40，M（P25～P75）］

表3　觀察組中術后膀胱痙攣組與不發生膀胱痙攣組M 2、M 3受體密度比較　M（P25～P75）

為分析觀察組患者的M2、M3受體密度是否與術后發生膀胱痙攣存在相關性，筆者將觀察組再分為術后膀胱痙攣組及術后不發生膀胱痙攣組，兩組的M2、M3受體密度比較見表3，B P H合并O A B患者無論術后是否發生膀胱痙攣，M2受體密度并不存在差異性，而M3受體密度卻存在差異性，提示M3受體可能參與術后發生膀胱痙攣的發病機制。

3　討論

M受體分為M1～M5 5個亞型［9］。已有研究證實人類的膀胱逼尿肌中存在所有的M受體亞型，其中M2、M3受體的R N A占絕大多數［10］。既往的研究認為，M受體阻滯劑通過阻斷膀胱逼尿肌M受體（主要是M2和M3亞型），抑制逼尿肌過度收縮［11］，從而改善B P H患者的O A B癥狀，但是無法解釋已抑制患者的逼尿肌收縮，卻很少有B P H患者因服用M受體阻滯劑而出現排尿困難加重甚至出現尿潴留。近年來的研究發現膀胱黏膜同樣存在M受體的5個亞型，其中主要的受體亞型仍然是M2、M3受體。那么M受體阻滯劑是否通過抑制膀胱黏膜的M受體，從而緩解O A B癥狀的呢？這是近年來研究的熱點。

關于膀胱黏膜M受體的報道較多。有相關研究發現膀胱黏膜上的M受體密度與膀胱逼尿肌的M受體密度相似［12］，刺激膀胱黏膜的M受體可導致尿路上皮源性的抑制因子釋放，從而調節逼尿肌的收縮［13-14］，膀胱黏膜的M受體在O A B的發生機制中起著重要作用［15-16］。M受體阻滯劑不僅作用于膀胱逼尿肌的M受體，而且對膀胱黏膜M受體的抑制也起著重要作用［17］。大量的動物實驗研究發現，M受體阻滯劑的主要作用可能是通過抑制膀胱傳入通路上傳入神經的活性，從而減弱膀胱黏膜對乙酰膽堿的敏感性［18-20］。以上的研究結果均提示膀胱黏膜上的M受體與O A B的發生密切相關。

那么，做為屬于O A B范疇的膀胱痙攣癥狀是否與M2、M3受體密度存在相關性呢？在本研究的觀察組中筆者發現膀胱痙攣患者的M3受體密度明顯降低，結合既往的研究發現膀胱黏膜對激動M受體引起的的逼尿肌收縮反應存在抑制作用［14-15］，筆者認為，膀胱黏膜可能存在一種保護作用，在B P H合并O A B的病理狀態下，膀胱黏膜發揮其保護作用，通過減少M受體的密度，降低膀胱黏膜對乙酰膽堿的敏感性，緩解O A B癥狀，然而B P H合并O A B的患者因膀胱黏膜中M受體的過度減少，特別是M3受體亞型的減少可能導致術后更容易發生膀胱痙攣，M3受體在前列腺電切術后發生膀胱痙攣的發病機制中可能起著重要的作用。

綜上所述，M受體阻滯劑如何緩解O A B癥狀的作用機制是相當復雜的。本研究中B P H合并O A B行經尿道前列腺電切術術后發生膀胱痙攣的患者膀胱黏膜的M3受體密度明顯下降，至少說明M3受體密度對術后發生膀胱痙攣的影響。雖然目前仍然缺乏膀胱黏膜M受體在疾病狀態下是如何發揮作用的研究，但作為與前列腺電切術后發生膀胱痙攣相關的M3受體卻可以作為研發新藥的靶點，高選擇性的M3受體阻滯劑對預防和控制經尿道前列腺電切術術后發生膀胱痙攣可能起著更加有效的作用。

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（申海菊 編輯）

Correlation study between density of muscarinic receptors in bladder mucosa and bladder spasm after prostate surgery

Bin Liao，Shi-wang Huang，Jing-huai Cai，Wei-yi Chen，Yi-min Chen
（Department of Urology，the People's Hospital of Chaozhou City，Chaozhou，Guangdong 521000，China）

Objective To analyze the correlation of the bladder spasm after prostate surgery and the density of M2 and M3 muscarinic receptors in bladder mucosa.M ethods Patients with benign prostatic hyperplasia（BPH）in our hospital from May 2012 to May 2015 were enrolled as research objects and divided into observation group［BPH with overactive bladder（OAB）］and control group（BPH without OAB）.And then the observation group was further divided into bladder spasm subgroup and non-spasm subgroup.The density of M2 and M3 receptors were determined and their correlations with bladder spasm were analyzed.Results The rate of bladder spasm of the observation group was higher than that of the control group.The density of M2 and M3 muscarinic receptors of the observation group was lower than that of the control group.The density of M3 muscarinic receptor in the bladder spasm subgroup was lower than that in the non-spasm subgroup. Conclusions There is a correlation between bladder spasm after prostate surgery and density of M3 muscarinic receptor in bladder mucosa，suggesting M3 receptor may be involved in the pathogenesis of bladder spasm and it can be used as a target to design drugs for prevention and control of bladder spasm.

muscarinic receptor；bladder mucosa；bladder spasm；benign prostatic hyperplasia；overactive bladder

R 697.32

B

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.15.020

1005-8982（2016）15-0106-04

2015-12-28