T h1/T h2/T h17細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)性過敏性結(jié)膜炎中的作用研究*

張劍，王冬蘭，閆冬梅

（1.佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院 眼科，黑龍江 佳木斯 154003；2.佳木斯大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154003）

論著

T h1/T h2/T h17細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)性過敏性結(jié)膜炎中的作用研究*

張劍1，王冬蘭1，閆冬梅2

（1.佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院 眼科，黑龍江 佳木斯 154003；2.佳木斯大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154003）

目的探討T h1/T h2/T h17細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)性過敏性結(jié)膜炎發(fā)病中的可能作用。方法40只B ro w n N or way大鼠隨機(jī)分為3組：空白組、對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組。應(yīng)用雞卵清蛋白（O V A）復(fù)制大鼠過敏性結(jié)膜炎模型。取3組大鼠眼球及上下眼瞼進(jìn)行病理學(xué)分析，計(jì)數(shù)穹隆部結(jié)膜嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)。EL ISA法測(cè)定大鼠血清Ig E、Ig G1、Ig G2a和脾細(xì)胞培養(yǎng)上清液I L-17、I L-4、I L-6、I L-10、I F N-γ含量。流式細(xì)胞儀測(cè)定大鼠外周血和脾臟T h17細(xì)胞。結(jié)果實(shí)驗(yàn)組大鼠穹隆部眼結(jié)膜嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)較空白組和對(duì)照組升高（P＜0.01）。實(shí)驗(yàn)組大鼠血清Ig E、Ig G1較空白組和對(duì)照組升高（P＜0.01），血清Ig G2a較空白組和對(duì)照組降低（P＜0.01）。實(shí)驗(yàn)組大鼠血清脾細(xì)胞培養(yǎng)上清液I L-17、I L-4、I L-6、I L-10水平較空白組和對(duì)照組升高（P＜0.01），I F N-γ水平較空白組和對(duì)照組降低（P＜0.01）。實(shí)驗(yàn)組大鼠外周血和脾臟T h17細(xì)胞均高于空白組和對(duì)照組（P＜0.01）。結(jié)論T h1/T h2/T h17細(xì)胞平衡失衡是大鼠實(shí)驗(yàn)性過敏性結(jié)膜炎發(fā)病的主要原因。恢復(fù)T h1/T h2/T h17失衡可能成為過敏性結(jié)膜炎治療的一條新途徑。

過敏性結(jié)膜炎；輔助性T細(xì)胞1/輔助性T細(xì)胞2/輔助性T細(xì)胞17；細(xì)胞因子

過敏性結(jié)膜炎是一種多見于兒童和青少年，易反復(fù)發(fā)作，常呈季節(jié)性加重的變態(tài)反應(yīng)性眼表疾病，患病達(dá)人群的20%［1］。近年來隨著環(huán)境污染加重，變應(yīng)原增加，發(fā)病率逐年增高。過敏性結(jié)膜炎確切的發(fā)病機(jī)制至今尚不十分清楚。以往的研究認(rèn)為過敏性結(jié)膜炎是免疫球蛋白E（imm u no g lob u lin E，I g E）介導(dǎo)的體液免疫和細(xì)胞免疫機(jī)制［2］，但是I g E介導(dǎo)的過敏性結(jié)膜炎變態(tài)反應(yīng)的病理生理過程并不完全清楚。本研究擬通過雞卵清蛋白（Ov alb u min，OV A）致敏、誘導(dǎo)大鼠實(shí)驗(yàn)性過敏性結(jié)膜炎模型。檢測(cè)過敏性結(jié)膜炎大鼠1型輔助性T細(xì)胞（type 1 helper T cell，Th1）/2型輔助性T細(xì)胞（type 2 helper T cell，Th2）/17型輔助性T細(xì)胞（type 17 helper T cell，Th17）相關(guān)細(xì)胞因子白細(xì)胞介素17（I nterle uk in-17，I L-17）、白細(xì)胞介素4（I nterle uk in-4，I L-4）、白細(xì)胞介素6（I nterle uk in-6，I L-6）、白細(xì)胞介素10（I nter le uk in-10，I L-10）、γ-干擾素（I nter f eron-γ，I F N-γ）及相應(yīng)抗體I g E、免疫球蛋白G1（imm u no g lob u lin G1，I g G1）、免疫球蛋白G2a（imm u no g lob u lin G2a，I g G2a）水平，揭示過敏性結(jié)膜炎的免疫學(xué)機(jī)制及發(fā)病的病理生理過程，為探討新的治療靶點(diǎn)和方法提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物B ro w n Nor w ay大鼠40只（S P F級(jí)），6～8周齡，體重150～200 g，由佳木斯大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.1.2主要試劑及儀器OV A（美國(guó)S i g ma公司），G iemsa染色試劑（北京索萊寶科技有限公司），莫能菌素、P E標(biāo)記的抗大鼠I L-17A、異硫氰酸熒光素（f l u orescein isothiocyanate，F(xiàn) I T C）標(biāo)記的抗大鼠C D4+抗體（美國(guó)e B iloscience公司），R PMI 1640培養(yǎng)基（美國(guó)G ibo公司），大鼠變應(yīng)原特異性I g E、I g G1、I g G2a、I L-17、I L-4、I L-6、I L-10、I F N-γE L I S A試劑盒（美國(guó)R D公司），B A C S C alib u r流式細(xì)胞儀（美國(guó)B D公司），全自動(dòng)酶標(biāo)儀（型號(hào)：R T-6000，美國(guó)R ayto公司）。

1.2方法

1.2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組B ro w n Nor w ay大鼠40只，隨機(jī)分為空白組10只，對(duì)照組10只，實(shí)驗(yàn)組20只。實(shí)驗(yàn)組于實(shí)驗(yàn)第1天給予OV A 100μg和佐劑A l 35m g磷酸鹽緩沖液（phosphate b uff er saline，P B S）200μl左足底部注射。第7天給同樣OV A P B S液200μl腹腔注射。第14天和第16天OV A P B S液（750μg/5μl/眼）點(diǎn)眼激發(fā)。對(duì)照組給予等量的P B S液，給藥時(shí)間和途徑同實(shí)驗(yàn)組。空白組為正常大鼠不加任何處理。

1.2.2眼部病理學(xué)檢查末次激發(fā)24 h斷髓法處死大鼠，摘取眼球及上下眼瞼，10%福爾馬林溶液固定，石蠟包埋，矢狀位4μm厚連續(xù)切片，G iemsa染色觀察大鼠眼結(jié)膜病理變化。計(jì)數(shù)穹隆部結(jié)膜每高倍鏡下嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)量。

1.2.3血清特異性Ig E、Ig G1、Ig G2a抗體測(cè)定采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（en z ymelin k ed imm u nosorbent assay，E L I S A）法，在大鼠I g E、I g G1、I g G2a單抗包被的酶標(biāo)板上分別加入標(biāo)準(zhǔn)品和樣品，37℃，90min，洗板4次。加入生物素化抗大鼠I g E、I g G1、I g G2a抗體，37℃，60min，洗板4次。加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗生物素蛋白鏈菌素37℃，30min。加入底物顯色。450 nm處測(cè)光密度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算待測(cè)樣品I g E、I g G1、I g G2a濃度。

1.2.4外周血、脾臟T h17細(xì)胞的流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)肝素化抗凝大鼠外周血或脾細(xì)胞懸液，裂解紅細(xì)胞，分離淋巴細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度1×107個(gè)/ml，取100μl加入佛波醇酯、離子霉素、莫能霉素，37℃，5%二氧化碳C O2培養(yǎng)5h，收集細(xì)胞用P E標(biāo)記的抗大鼠I L-17A、F I T C標(biāo)記的抗大鼠C D4+抗體進(jìn)行細(xì)胞表面及細(xì)胞內(nèi)抗原染色。流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.5脾細(xì)胞上清液細(xì)胞因子測(cè)定無(wú)菌條件下取出大鼠脾臟，經(jīng)100目鋼網(wǎng)研磨過濾成單個(gè)細(xì)胞，用R PMI 1640培養(yǎng)基（含100μg/L小牛血清、100μg/L青霉素及100μg/L鏈霉素）重懸脾細(xì)胞。用8.3 g/L N H4C l紅細(xì)胞裂解液裂解紅細(xì)胞，離心，收集細(xì)胞沉淀，R PMI 1640培養(yǎng)基重懸脾細(xì)胞，制成均質(zhì)的脾細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度至2×106個(gè)/ml。臺(tái)昐藍(lán)染色觀察活細(xì)胞≥98%時(shí)可用于實(shí)驗(yàn)。取脾細(xì)胞懸液100μl加到無(wú)菌96孔板中，加入OV A至質(zhì)量終濃度100μg/L，并設(shè)立陰性對(duì)照組，37℃，5%C O2培養(yǎng)72 h。收集上清液E L I S A法測(cè)定I L-17、I L-4、I L-6、I L-10、I F N-γ含量。實(shí)驗(yàn)操作程序與測(cè)定I g E、I g G1、I g G2a相同。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用S P SS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間差異性測(cè)定用方差分析，多組間兩兩比較用S N K-q檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1眼病理切片結(jié)果

空白組大鼠眼結(jié)膜無(wú)充血，固有層無(wú)或偶見粒細(xì)胞浸潤(rùn)，每高倍鏡下嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)（15.92± 5.97）個(gè)。對(duì)照組大鼠眼結(jié)膜無(wú)明顯充血水腫，固有層沒有或偶見粒細(xì)胞浸潤(rùn)，每高倍鏡下嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)（17.36±6.02）個(gè)。實(shí)驗(yàn)組大鼠結(jié)膜組織疏松，充血水腫明顯，固有層內(nèi)嗜酸性粒細(xì)胞及中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，肥大細(xì)胞增加，并有脫顆粒現(xiàn)象。實(shí)驗(yàn)組每高倍鏡下嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)（78.27±15.96）個(gè)。3組大鼠眼結(jié)膜嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)比較，經(jīng)單因素方差分析差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=128.193，P=0.000）。大鼠結(jié)膜嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)經(jīng)S N K-q兩兩比較，對(duì)照組與空白組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.596），實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組增多（P=0.000）。病理改變證明實(shí)驗(yàn)組大鼠發(fā)生過敏性結(jié)膜炎。見圖1。

2.2大鼠血清I g E、I g G1、I g G2a水平的變化

大鼠血清I g E、I g G1、I g G2a水平比較，經(jīng)單因素方差分析差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000）。大鼠血清I g E、I g G1水平經(jīng)S N K-q兩兩比較，對(duì)照組與空白組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組升高（P=0.000），血清I g G2a水平經(jīng)S N K-q兩兩比較，對(duì)照組與空白組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.405），實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組降低（P=0.000）。見表1和圖2。

圖1　空白組、對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組病理切片結(jié)果

表1　大鼠血清I g E、I g G1、I g G2a水平比較 （μg/m l，x±s）

圖2　大鼠血清I g E、I g G1、I g G2a水平比較

2.3大鼠外周血、脾臟組織T h17細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果

外周血Th17細(xì)胞流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示，大鼠外周血Th17細(xì)胞含量空白組為（0.70±0.05）%，對(duì)照組為（0.71±0.09）%，實(shí)驗(yàn)組為（3.98±0.13）%。3組大鼠外周血Th17細(xì)胞含量，經(jīng)單因素方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=456，P=0.000）。大鼠外周血Th17細(xì)胞含量經(jīng)S N K-q兩兩比較，對(duì)照組與空白組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.760），實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組升高（P=0.001）（見圖3A）。脾臟組織Th17細(xì)胞檢測(cè)中選擇代表性的流式細(xì)胞儀分析。結(jié)果顯示大鼠脾細(xì)胞懸液Th17細(xì)胞空白組含量為（0.81±0.07）%，對(duì)照組為（0.82±0.11）%，實(shí)驗(yàn)組為（4.86±0.17）%，3組大鼠脾細(xì)胞懸液Th17細(xì)胞含量，經(jīng)單因素方差分析差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=439，P=0.000）。經(jīng)S N K-q兩兩比較對(duì)照組與空白組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.813），實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組升高（P=0.001）（見圖3B）。

2.4大鼠脾細(xì)胞培養(yǎng)上清液I L-17、I L-4、I L-6、I L-10、IF N-γ水平

3組大鼠脾細(xì)胞培養(yǎng)上清液I L-17、I L-4、I L-6、I L-10、I F N-γ水平經(jīng)單因素方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000）。大鼠脾細(xì)胞培養(yǎng)上清液I L-17、I L-4、I L-6、I L-10水平經(jīng)S N K-q兩兩比較，對(duì)照組與空白組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組升高（P=0.000），大鼠脾細(xì)胞培養(yǎng)上清液I F N-γ水平經(jīng)S N K-q檢驗(yàn)，對(duì)照組與空白組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.317）。實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組降低（P=0.000）。見表2和圖4。

2.5大鼠脾細(xì)胞培養(yǎng)上清液I L-17/IF N-γ、I L-4/ IF N-γ、I L-6/IF N-γ、I L-10/IF N-γ比值

圖3　3組大鼠外周血、脾細(xì)胞懸液T h17細(xì)胞流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果比較

表2　大鼠脾細(xì)胞培養(yǎng)上清液I L-17、I L-4、I L-6、I L-10、IF N-γ水平比較 （p g/ml，）

表2　大鼠脾細(xì)胞培養(yǎng)上清液I L-17、I L-4、I L-6、I L-10、IF N-γ水平比較 （p g/ml，）

注：1）與空白組比較，P＞0.05；2）與對(duì)照組比較，P＜0.01

組別I F N -γ空白組（n = 1 0）　2 . 5 6 ± 0 . 0 4 　5 . 9 8 ± 1 . 0 9 　4 . 9 6 ± 0 . 5 1 　5 . 4 9 ± 0 . 9 8 　2 2 . 8 5 ± 3 . 6 3對(duì)照組（n = 1 0）　2 . 5 9 ± 0 . 0 61）　6 . 1 2 ± 1 . 1 31）　4 . 9 1 ± 0 . 4 81）　5 . 6 6 ± 1 . 0 21）　2 3 . 4 5 ± 3 . 8 91）實(shí)驗(yàn)組（n = 2 0）　1 7 . 6 8 ± 2 . 5 62）　6 7 . 0 4 ± 6 . 1 22）　5 4 . 6 2 ± 4 . 3 72）　6 2 . 9 2 ± 5 . 8 92）　7 . 9 6 ± 1 . 0 12）F值　3 3 9 . 1 2 5 　4 3 8 . 6 1 9 　4 4 5 . 0 9 9 　4 9 7 . 6 0 9 　1 5 6 . 1 2 0 P值　0 . 0 0 0 　0 . 0 0 0 　0 . 0 0 0 　0 . 0 0 0 　0 . 0 0 0 I L -1 7 I L -4 I L -6 I L -1 0

3組大鼠脾細(xì)胞培養(yǎng)上清液I L-17/I F N-γ、I L-4/I F N-γ、I L-6/I F N-γ、I L-10/I F N-γ 比值經(jīng)單因素方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000）。大鼠脾細(xì)胞培養(yǎng)上清液I L-17/I F N-γ、I L-4/I F N-γ、I L-6/ I F N-γ、I L-10/I F N-γ比值經(jīng)S N K-q兩兩比較，對(duì)照組與空白組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組升高（P=0.000）。見表3。

圖4　大鼠脾細(xì)胞培養(yǎng)上清液I L-17、I L-4、I L-6、I L-10、IF N-γ水平比較

表3　脾細(xì)胞I L-17/IF N-γ、I L-4/IF N-γ、I L-6/IF N-γ、I L-10/IF N-γ比較 （）

表3　脾細(xì)胞I L-17/IF N-γ、I L-4/IF N-γ、I L-6/IF N-γ、I L-10/IF N-γ比較 （）

注：1）與空白組比較，P＞0.05；2）與對(duì)照組比較，P＜0.01

組別I L -1 0 / I F N -γ空白組（n = 1 0 ） 0 . 2 9 ± 0 . 0 5 　0 . 7 6 ± 0 . 0 6 　0 . 5 8 ± 0 . 0 5 　0 . 6 9 ± 0 . 0 4對(duì)照組（n = 1 0 ） 0 . 2 8 ± 0 . 0 41）　0 . 7 9 ± 0 . 0 81）　0 . 5 9 ± 0 . 0 71）　0 . 7 1 ± 0 . 0 61）實(shí)驗(yàn)組（n = 2 0 ） 2 . 4 5 ± 0 . 1 32）　8 . 0 1 ± 1 . 1 62）　7 . 6 4 ± 1 . 0 72）　7 . 9 6 ± 1 . 0 82）F值　6 7 7 . 7 6 8 　3 7 7 . 1 2 4 　4 2 3 . 2 5 2 　4 4 2 . 1 5 8 P值　0 . 0 0 0 　0 . 0 0 0 　0 . 0 0 0 　0 . 0 0 0 I L -1 7 / I F N -γ I L -4 / I F N -γ I L -6 / I F N -γ

3　討論

過敏性結(jié)膜炎是眼部結(jié)膜組織對(duì)過敏原發(fā)生了廣泛的抗原特異性輔助T細(xì)胞反應(yīng)引起的過敏性疾病。輔助性T細(xì)胞按其分化和功能分為Th1、Th2、Th17和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞［3］。

Th1細(xì)胞產(chǎn)生I L-2、I F N-γ、TN F-α，Th2細(xì)胞產(chǎn)生I L-4、I L-5、I L-6、I L-10等細(xì)胞因子，近年研究證實(shí)Th17產(chǎn)生I L-17。Th1、Th2細(xì)胞分別產(chǎn)生特征性細(xì)胞因子，檢測(cè)I F N-γ可以了解Th1的功能狀態(tài)，檢測(cè)I L-4、I L-6、I L-10可以了解Th2的功能狀態(tài)［4］。研究發(fā)現(xiàn)，Th1、Th2細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子還與特異性抗體I g E、I g G亞類的表達(dá)密切相關(guān)，Th1細(xì)胞因子刺激I g G2a抗體的產(chǎn)生，而Th2細(xì)胞因子刺激I g E、I g G1的產(chǎn)生。比較血清I g G2a和I g G1水平的改變也可以了解Th1/Th2之間功能狀態(tài)的調(diào)節(jié)變化［5］。本研究結(jié)果顯示，過敏性結(jié)膜炎大鼠脾細(xì)胞培養(yǎng)上清液I L-4、I L-6、I L-10水平較對(duì)照組大鼠升高，I F N-γ水平降低。脾細(xì)胞培養(yǎng)上清液I L-4/I F N-γ、I L-6/ I F N-γ、I L-10/I F N-γ比值過敏性結(jié)膜炎大鼠較對(duì)照組大鼠升高。過敏性結(jié)膜炎大鼠血清I g E、I g G1水平較對(duì)照組大鼠升高，血清I g G2水平較對(duì)照組降低。提示過敏性結(jié)膜炎大鼠Th2細(xì)胞功能活動(dòng)增強(qiáng)，Th1細(xì)胞活性降低。Th2/Th1比例升高，免疫狀態(tài)由Th1向Th2“克隆漂移”，表現(xiàn)為Th2型優(yōu)勢(shì)表達(dá)。表明Th1/Th2失衡與過敏性結(jié)膜炎的發(fā)病密切相關(guān)［6］，Th2細(xì)胞過多產(chǎn)生的細(xì)胞因子I L-4、I L-6、I L-10參與過敏性結(jié)膜炎發(fā)病的病理生理過程［7］。但是Th1/ Th2失衡并不能完全解釋過敏性結(jié)膜炎發(fā)病的全部機(jī)制。近年研究發(fā)現(xiàn)，在輔助性T細(xì)胞中還存在著一類新成員，由于這類效應(yīng)C D4+T細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子以I L-17為主，因此被命名為Th17［8］。Th17參與完成許多免疫反應(yīng)，Th17發(fā)揮作用的關(guān)鍵是其分泌的細(xì)胞因子I L-17［9］。

近年研究發(fā)現(xiàn)，在花粉季節(jié)過敏性鼻炎患者外周血Th17細(xì)胞數(shù)量增多，血清I L-17水平升高，患者血清I L-17水平與過敏性鼻炎患者臨床癥狀嚴(yán)重程度呈正相關(guān)［10］。支氣管哮喘患者肺泡支氣管灌洗液中I L-17表達(dá)升高［11］。變應(yīng)性鼻炎、支氣管哮喘均為細(xì)胞介導(dǎo)的變態(tài)反應(yīng)。有研究證明，在OV A誘導(dǎo)的小鼠支氣管哮喘模型致敏階段，中和I L-17抗體可增強(qiáng)過敏反應(yīng)，使小鼠支氣管灌洗液中I L-5和嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)增加。I L-17在抗原特異性細(xì)胞的活化、嗜酸性粒細(xì)胞聚集和血清I g E的生成過程中均發(fā)揮作用［12］。I L-17參與Th1/Th2失調(diào)過敏性疾病的發(fā)病過程［13］。I L-17能誘導(dǎo)人支氣管上皮細(xì)胞、纖維細(xì)胞、氣道平滑肌細(xì)胞和靜脈內(nèi)皮細(xì)胞釋放促炎因子TN F-α、I L-1β、C-C S F、I L-6以及趨化因子C X C L1/G roα、C X C L2和C X C L8/I L-8，增加中性粒細(xì)胞的生成。I L-17通過刺激固有免疫機(jī)制調(diào)節(jié)中性粒細(xì)胞聚集，I L-17的基本生物學(xué)功能就是促進(jìn)趨化因子、促細(xì)胞炎癥因子和金屬蛋白酶的表達(dá)，刺激炎癥反應(yīng)及中性粒細(xì)胞趨化［14］。本研究結(jié)果顯示，過敏性結(jié)膜炎大鼠外周血、脾臟Th17細(xì)胞增加，脾細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)生I L-17增多。提示Th17細(xì)胞分泌I L-17增多參與了過敏性結(jié)膜炎發(fā)病的病理生理過程。

對(duì)人類的研究發(fā)現(xiàn)，Th17/Th1細(xì)胞能同時(shí)分泌I L-17和I F N-γ［15］。I L-12不僅刺激Th17/Th1產(chǎn)生I L-23R和R O Rγδ而促進(jìn)I L-17分泌，還上調(diào)Th1細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子Tbet表達(dá)，促進(jìn)I F N-γ分泌［16］。在病理狀態(tài)下，Th1、I F N-γ可能影響Th17、I L-17，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，缺乏I F N-γ時(shí)Th17產(chǎn)生I L-17增多，可誘發(fā)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎的發(fā)生。I F N-γ缺失型小鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎模型外周血I L-17明顯增多［17］。本研究結(jié)果顯示，過敏性結(jié)膜炎大鼠脾細(xì)胞培養(yǎng)上清液I F N-γ減少，外周血、脾臟Th17細(xì)胞數(shù)量增多，脾細(xì)胞培養(yǎng)上清液I L-17含量增多。提示Th17/Th1失衡是大鼠過敏性結(jié)膜炎發(fā)病的重要原因。

本研究證明，Th1/Th2/Th17失衡，Th2、Th17細(xì)胞因子產(chǎn)生增多，Th1細(xì)胞功能降低、細(xì)胞因子分泌減少是大鼠過敏性結(jié)膜炎發(fā)病的重要原因。因此，在臨床上抑制Th2、Th17細(xì)胞因子產(chǎn)生，促進(jìn)Th1細(xì)胞因子分泌，增強(qiáng)Th1反應(yīng)，抑制Th2、Th17過度反應(yīng)，恢復(fù)Th1/Th2/Th17平衡，可能成為治療過敏性結(jié)膜炎的一條新途徑。

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（申海菊 編輯）

Effect of Th1/Th2/Th17 balance on development of experimental allergic conjunctivitis*

Jian Zhang1，Dong-lan Wang1，Dong-mei Yan2
（1.Department of Ophthalmology，the First Affiliated Hospital of Jiamusi University，Jiamusi，Heilongjiang 154003，China；2.College of Basic Medical Sciences，Jiamusi University，Jiamusi，Heilongjiang 154003，China）

Objective To investigate the effect of Th1/Th2/Th17 balance on development of experimental allergic conjunctivitis.Methods Forty Brown Norway rats were randomly divided into three groups:normal group，control group and experimental allergic conjunctivitis group（experimental group）.Ovalbumin（OVA）-induced allergic conjunctivitis models were established.The eyes including eyelids and conjunctivae were harvested for histological analysis，and infiltrating eosinophils in fornical conjunctivae were counted.The serum levels of IgE，IgG1 and IgG2a and the concentrations of IL-17，IL-4，IL-6，IL-10 and IFN-γin spleen culture supernatant were measured by ELISA.The Th17 cells in peripheral blood and spleen tissue were detected using flow cytometry.Results The experimental group had significantly higher number of conjunctival eosinophils than the normal and control groups（P＜0.01）.The experimental group had significantly higher serum IgE and IgG1 levels and significantly lower serum IgG2a level than the normal and control groups（P＜0.01）.The concentrations of IL-17，IL-4，IL-6 and IL-10 in spleen culture supernatant were significantlyhigher but the IFN-γlevel was significantly lower in the experimental group than in the normal and control groups（P＜0.01）.The Th17 cells in the peripheral blood and spleen tissue of the experimental group were significantly more than those of the normal and control groups（P＜0.01）.Conclusions Th1/Th2/Th17 imbalance might play an important role in the development of experimental allergic conjunctivitis.To modulate the unbalanced Th1/Th2/Th17 reaction may contribute to treatment of allergic conjunctivitis.

allergic conjunctivitis；Th1；Th2；Th17；cytokine

R 777.3

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.15.006

1005-8982（2016）15-0032-06

2015-08-14

黑龍江省衛(wèi)生廳科研項(xiàng)目（No：2013248）；佳木斯大學(xué)青年基金（No：S q2014-006）

閆冬梅，E-mail：chaiyin g1975@soh u.com；Tel：0454-8623586